不同药剂对海南茄子青枯病病原菌的室内药效测定

周运瑶,张 斌,林海秀,罗宏伟,李 珍,丘凤莲 ,张英樊,王沛政

(1.三亚市农业技术推广服务中心,海南 三亚 572000; 2.海南热带海洋学院,海南 三亚 572022)



不同药剂对海南茄子青枯病病原菌的室内药效测定

周运瑶1,张 斌1,林海秀1,罗宏伟1,李 珍2,丘凤莲2,张英樊2,王沛政2

(1.三亚市农业技术推广服务中心,海南 三亚 572000; 2.海南热带海洋学院,海南 三亚 572022)

茄子青枯病是茄子生产上最重要的病害之一,该病会严重影响茄子的产量和质量.本研究采用水平扩散法,利用当地市场上常用的11种防治青枯病的药剂通过室内评价对茄子青枯病菌进行了抑菌实验研究.试验结果表明在推荐的稀释倍数下,仅农用硫酸链霉素对青枯病原菌的表现抑菌效果,在稀释1500-2500倍时的平均抑菌直径在2.0 cm左右, 在稀释2500倍(当于28.8 ug/ml)依然表现出抑制效果.此外,枯草芽孢杆菌在稀释200-1000倍时的平均抑菌圈直径在1-1.5 cm之间,在高浓度时表现出一定的抑制效果.该研究结果为当地田间茄子病害防治提供了参考.

茄子;青枯病;药剂;药效测定

0 引 言

茄子青枯病是由茄科雷尔氏菌(Ralstoniasolanacearum) 引起的毁灭性病害,是世界上危害最大、分布最广、造成损失最严重的植物病害之一.茄科雷尔氏菌的寄主范围很广,可侵染50多科的200多种植物[1].茄科雷尔氏菌是土传的细菌性病害,药剂很难防治.最有效、最经济的防治措施仍是种植抗病品种.世界各国茄子育种专家都十分重视茄子抗青枯病品种选育研究[2-4].田间茄子植株感病症状,首先细根褐变,然后茎叶萎蔫下垂直至全部枯死,病茎的褐变部位用手挤压,有乳白色菌液排出.青枯病菌通常从茄子根部或茎部的伤口侵入,并在茄子的维管束组织中扩展,从而引起发病.田间自然条件下,也能从没有受伤的次生根根冠部位侵入.茄子青枯病病原菌可在田间病残体上越冬,借助强风暴雨、农事操作等途径传播[5-6].在田间高温高湿、重茬、积水、偏施氮肥等情况下易于发病.茄子青枯病是我国长江流域及以南地区茄子生产上的主要病害,一般减产20%-30%,严重时损失达60%[7].研究表明,如果茄子的砧穗选择得当,嫁接不但可以显著增强茄果类作物的抗病性,还能提高产量和品质[8].在生产上茄子近缘野生种托鲁巴姆(SolanumtorvumSwartz)作为茄子砧木被广泛使用,具有抗青枯病的特性[8-9].因此,茄子嫁接技术在全国范围内得到了大面积的推广使用[10-11].海南嫁接茄子的种植面积也呈逐年增加,但也发现问题.2012年海南乐东县、三亚市崖城镇、凤凰镇等地发现嫁接茄子死秧现象严重,嫁接茄子死秧率达30%-50%,经济损失高达50%以上.王爽报道认为青枯病的暴发可能是不同地区青枯病病原生理小种存在较大的差异,导致砧木品种的抗病性下降[12].鉴于该病的严重危害性,为减少青枯病菌对嫁接茄苗生产的危害,找到有效防治茄子青枯病的药剂,控制该病害的发生及流行,减少产量损失.本研究利用三亚市农药店出售的防治青枯病的常用化学药剂,进行室内药剂筛选,期望得到一批对茄子青枯病菌杀菌效果好的药剂,为今后茄子的病害防治提供参考依据.

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1供试培养基

蛋白胨 10.0 g；氯化钠 10.0 g；酵母提取物 5.0 g；双蒸水 1000 mL；调 pH至7.0. TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)0.05 g(倒平板时加入).琼脂15 g(固体培养基加).

1.1.2 供试菌株供试病原细菌

茄科雷尔氏菌(Ralstoniasolanczcearum)由三亚茄子病田取样分离得到.取新鲜发病植株的茎基部组织, 用清水将表皮冲洗干净,取内部维管束组织切成0.5cm2左右的小块,用70%的酒精清洗5-10s；再用无菌水洗净,放在无菌吸水纸上吹干,在固体培养基上恒温30℃下增殖培养24 h；后挑取细菌菌落再画线培养,直到菌落单一.分离过程在超净工作台中进行.

1.1.3 供试药剂

以三亚市农药商店内出售的防治青枯病的常用药剂: 叶枯唑(有效成分含量20%,用量1500 g/公顷)、多菌灵铜钙、(江苏龙灯化学有限公司60%,用量1500 g/公顷)、苯甲嘧菌酯(40%,用量1500 g/公顷)、中生菌素(5%,用量750 g/公顷)、杜邦可杀德(氢氧化铜40%,用量750 g/公顷)、农用硫酸链霉素(72%粉剂,用量750 g/公顷)、枯草芽孢杆菌(1000亿孢子/克,用量750 g/公顷)、溴菌任菌铜(25%,用量750 g/公顷)、亮盾-咯菌清(6.2%,用量750 g/公顷)、喹啉铜(33%,用量750 g/公顷)、噁霉灵(8%,用量750 g/公顷)等11份杀菌剂.

1.2方法

病原细菌菌悬液的制备:将青枯病菌在液体培养基培养48 h后,稀释涂板,使1 ml菌悬液涂板后长出的菌落数为100个左右.上述农药首先依据农药推荐剂量,按500倍、1000倍、1500倍、2000倍、2500倍稀释；在此基础上对个别药剂再按200倍、400倍、600倍、800倍、1000倍稀释.

拮抗活性测试:将己熔化的细菌培养基冷却至45℃左右,迅速吸取茄子青枯菌液加入培养基中,充分混匀后立即倒入直径9 cm的培养皿中,使其均匀平铺.用直径为6 mm的灭菌滤纸片投入各浓度药液中放置15 s,从药液取后放置在带菌培养基表面,每皿放置3个, 重复三次,以吸附无菌水作空白对照.然后培养皿在28℃恒温培养箱中培养48 h后观察有无抑菌圈的产生,用十字交叉法测量抑菌圈直径.

2 结果与分析

上述农药按500倍、1000倍、1500倍、2000倍、2500倍稀释后, 水平扩散法抑菌试验结果表明,除农用硫酸链霉素和枯草芽孢杆菌药剂外,上述药剂在所有的稀释倍数下均对青枯病病原细菌的没有抑菌效果,农用硫酸链霉素药剂在所有的稀释倍数下均对青枯病病原细菌有抑菌效果 (见表1), 550倍和1000倍抑菌效果接近,抑菌平均直径2.2 cm,而1500倍到2500倍抑菌效果接近,抑菌平均直径2.0 cm左右, 稀释达到2500倍(当于28.8 ug/ml)依然表现有效抑制.部分抑菌效果图见图1,可以发现500倍和2000倍稀释浓度下抑菌圈几乎到达培养皿边缘,展现出很强的抑菌效果.方差分析发现5种稀释浓度的硫酸链霉素重复间差异不显著(见表2),5种不同稀释浓度的硫酸链霉素间差异也不显著,F=2.291429 < F crit=3.47805(见表3).实验还发现农用硫酸链霉素的抑菌实验在放置15天后,依然起到抑菌效果.其次是枯草芽孢杆菌,仅在较高浓度下起作用,我们对其重新设置了浓度梯度进行进一步实验.

表1 农用硫酸链霉素抑菌效果

续表1

表2 5种稀释浓度的硫酸链霉素方差分析

表3 不同稀释浓度间的硫酸链霉素方差分析

图1 部分农用硫酸链霉素抑菌效果图

实验发现由于枯草芽孢杆菌仅在较高浓度下起到一定的作用,因此我们对枯草芽孢杆菌重新设置了浓度梯度为200倍、400倍、600倍、800倍、1000倍,结果表明(表4),枯草芽孢杆菌药剂在所有的稀释倍数下均对青枯病病原细菌有一定的抑菌效果,平均每个抑菌圈的直径在1-1.5 cm之间,部分抑菌效果图见图2, 稀释在1000倍(当于1亿/ml)依然能有效抑制,但抑制圈的直径只有1 cm,相比农用硫酸链霉素其抑制作用要差很多.方差分析发现5种稀释浓度的枯草枯草芽孢杆菌重复间差异不显著(见表2),5种不同稀释浓度的枯草枯草芽孢杆菌间差异显著,F=5.367 < F crit=3.47805(见表3).

表4 枯草芽孢杆菌抑菌效果

表5 5种稀释浓度的枯草芽孢杆菌方差分析

表6 不同稀释浓度间的枯草芽孢杆菌方差分析

3 讨论

图2 部分枯草芽孢杆菌抑菌效果图

从试验结果可以得出,在试验所选择的化学药剂中,仅农用硫酸链霉素的抑菌效果较好且稳定,枯草芽孢杆菌抑菌在较高浓度下有一定的效果,除此外其他药剂没有抑菌效果.经分析造成其它药剂效果不好的原因可能有以下几点:首先是药剂本身的效果不佳.其次是病菌长期使用药剂产生了抗性.再次是药剂的作用机理不同造成的.叶枯唑是用于防治植物细菌性病害,但主要是防治水稻白叶枯病、水稻细菌性条斑病、 柑桔溃疡病的良好药剂.苯甲嘧菌酯主要用于防治丝核菌、子囊菌纲、担子菌纲、半知菌纲、白粉菌科,锈菌目、卵菌纲等病害,可能对青枯病细菌病菌抑制作用有限.多菌灵铜钙、喹啉铜、杜邦可杀德(氢氧化铜)等铜制剂能防治多种作物上的真菌和细菌病害, 其作用是喷施后在植物表面形成一层严密的保护药膜,有效抑制病菌的萌发和侵人,从而达到防病治病的目的,因此在本实验中难以阻止病菌的繁殖扩展.中生菌素是中国农科院生防所研制成功的一种新型农用抗生素,具有触杀、渗透作用,对细菌是抑制菌体蛋白质的合成,导致菌体死亡；对真菌是使丝状菌丝变形,抑制孢子萌发并能直接杀死孢子.日前生产中主要应用于防治番茄的晚疫病、细菌性溃疡病、辣椒的疫病、霜霉病,黄瓜的霜霉病、细菌性叶斑病等.亮盾-咯菌清主要是用于防治水稻根腐病和恶苗病.恶霉灵是农业植保专家最新研制出的恶霉灵更新换代产品,属内吸性高效农药杀菌剂,能有效抑制病原真菌菌丝体的正常生长.

本研究所选择的化学药剂中,农用硫酸链霉素的抑菌效果较好且稳定,在茄子嫁接苗生产中,由于砧木根部抗青枯病效果好,而接穗是丰产感病品种,建议将农用硫酸链霉素用于茄子苗根上部喷施可能效果更加.2011年06月22日, 农业部办公厅印发《第八届全国农药登记评审委员会第九次全体会议纪要》的通知,停止受理和批准硫酸链霉素的新增田间试验、农药登记,已批准含有硫酸链霉素的产品,其登记证件到期后不再办理续展登记.尽管药效好,目前市场上也能买到,但从长期看该药会越来越少.枯草芽孢杆菌抑菌在较高浓度下有一定的效果,该药是绿色生物农药,建议可以以较高浓度灌根使用,抑制茄子青枯病菌在土壤中繁殖.

对青枯病的药剂抑菌研究已有不少报道.程光辉[13]通过室内试验测定,认为农用硫酸链霉素对辣椒青枯病菌的抑菌效果最好.毕涛[14]报道通过室内试验测定不同药剂对烟草青枯病菌的抑制效果,发现其中四霉素水剂和硫酸链霉素可溶性粉剂抑菌效果最好；乙蒜素乳油、福美双水分散粒剂、百菌清腈菌唑可湿性粉剂和中生菌素等药剂能有效抑制烟草青枯病菌的生长.王梅[15]研究结果表明3% 中生菌素可湿性粉剂和72% 农用硫酸链霉素可湿性粉剂对青枯病菌的抑菌效果.上述研究报道中的中生菌素抑菌效果与本研究不一致,但也表明能有效抑制青枯病的药剂不多.下一步我们将利用不同厂家的中生菌素药剂,同时利用外地的药剂再进行进一步实验筛选.本研究发现能有效抑制茄子青枯病菌的药剂较少,应引起重视,在生产中不要盲目用药,以免乱用药达不到防病作用,同时还增加了成本.

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(编校：李由明)

Efficacy of Different Fungicides for Hainan Eggplant Wilt Pathogens by Laboratory Screening

ZHOU Yun-yao1,2, ZHANG Bin1, LIN Hai-xiu, LUO Hong-wei1, LI Zhen2, QIU Feng-lian2, ZHANG Ying-fan2, WANG Pei-zheng2

(1. Sanya Center for Agricultural Technology Extension and Service; 2. Hainan Tropical Ocean university, Sanya Hainan 572022, China)

Eggplant Wilt disease, one of the grave diseases of Eggplant, seriously reduces fruit yield and appearance quality. Efficacy of 11 bactericides common in the local market against R. Solanacearum was tested by using Horizontal diffusion method in laboratory. The results showed that only streptomycin in the general dilution has antibacterial effect against R. Solanacearum , with the average diameter about 2.0 cm of inhibitory of R. Solanacearum in dilution from 1500 to 2500 times. When being diluted to 2500 times (in 28.8ug/ml), the streptomycin still had the inhibitory effect. In addition, the average inhibition diameter of Bacillus subtilis diluted from 200 -1000 times ranged from 1 to 1.5cm, with a certain inhibitory effect at higher concentration. The results provide the reference for the prevention and the control of the R. Solanacearum for the local eggplant planting.

eggplant;R. Solanacearu Pesticides; pharmaceutical efficacy

2016-05-03

海南省大学生创新创业项目(201411100)

周运瑶( 1956-) ,男,海南乐东人,三亚市农业技术推广服务中心农艺师,主要研究方向为农业推广与与应用. 通信作者：王沛政(1972-),男,陕西西安人,海南热带海洋学院副教授,博士,主要研究方向为分子生物学.

S641. 1

A

1008-6722(2016) 05-0076-05

10.13307/j.issn.1008-6722.2016.05.15