维吾尔医异常黑胆型哮喘大鼠模型的心电图变化分析

郑玉兰， 兰 卫， 巴哈古力·阿卜都热合曼， 米热阿依·亚力昆， 巴吐尔·买买提明

(新疆医科大学1中医学院， 2药学院，3中心实验室， 乌鲁木齐 830011)



维吾尔医异常黑胆型哮喘大鼠模型的心电图变化分析

郑玉兰1， 兰 卫1， 巴哈古力·阿卜都热合曼2， 米热阿依·亚力昆2， 巴吐尔·买买提明3

(新疆医科大学1中医学院，2药学院，3中心实验室， 乌鲁木齐 830011)

目的 观察维吾尔医异常黑胆质型哮喘大鼠模型的心电图变化规律。方法 选用55只SD大鼠,随机分为健康对照组、哮喘组、异常黑胆质证组和异常黑胆质型哮喘组4组；模型制备成功后用心电记录仪记录不同组别大鼠的心电图，并测量P波时限、P-R间期、QRS时限、Q-T间期等心电图指标，同时记录不同组别大鼠的体质量变化情况。结果 异常黑胆质证组和异常黑胆质型哮喘组的体质量增长率明显低于健康对照组和哮喘组。异常黑胆质证组和异常黑胆质型哮喘组大鼠心电图的P波时限、Q-T间期明显延长，与健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；异常黑胆质型哮喘组大鼠心电图P-R间期延长，与健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；但是异常黑胆质证组大鼠P-R间期没有发生变化，与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；各组大鼠QRS时限均没有发生变化，与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。单纯的哮喘组大鼠心电图参数没有发生变化，与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 异常黑胆质证导致模型大鼠心电图显著改变，证候刺激造成心肌缺血的可能性较大。

异常黑胆质证； 哮喘； 心电图

维吾尔医认为哮喘病是在内外诱因的作用下，机体体液平衡失调，异常黏液质或异常黑胆质过盛并沉积于局部(尤其是气道)导致肺和气道的气质体液失调，从而形成吾腐乃提(炎症)，并最终导致哮喘[1]。哮喘在各体液中患病率各有不同，最高的是异常黑胆质型哮喘。异常黑胆质理论是维吾尔医学体液论的核心理论之一，证候动物模型是揭示证候生物学基础的有力工具。因此，在维吾尔医理论指导下，运用维吾尔医的传统思维和辨治思路，模拟异常黑胆质证发生及发展变化过程，建立一种符合维吾尔医发病理论的动物模型并对模型所表现的“证”进行量化分级，建立证候模型量表评价体系，将是一项有益的探索。故本研究以异常黑胆质证为研究对象，建立异常黑胆质型哮喘大鼠模型，探讨模型建立过程中的心电图变化及其机制，为异常黑胆质型动物模型的规范化与科学化研究奠定基础。

1 资料与方法

1.1 实验动物 SPF级SD大鼠55只，雄性，4～6周龄大小，体质量(200±30)g，购自新疆医科大学实验动物中心，生产许可证号：SCXK(新)2011-0004，实验单位使用许可证编号：SCXK(新)2011-0001。饲养环境模拟自然昼夜条件，温度(21±2)℃，湿度40%～45%，自由饮水。

1.2 仪器与试剂 RXZ型智能人工气候培养箱(宁波江南仪器厂)，TDGC2-2型接触调压器(中山市衡新电子有限公司)，402A型压缩空气式雾化器(鱼跃医疗)，BL-420F型生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司)，卵清蛋白(美国Sigma公司)，20%氢氧化铝胶生理盐水(齐鲁动物保健品有限公司)，氯化乙酰胆碱(上海三爱思试剂有限公司)，戊巴比妥钠(美国Sigma公司)，乙醚(天津市富宇精细化工有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 干寒饲料的制备 在普通鼠饲料中按7∶3的比例加入芫荽籽和大麦，制成颗粒状干饲料，委托新疆医科大学实验动物中心加工。

1.3.2 异常黑胆质模型建立及分组 55只SD大鼠购回后适应性喂养4 d，按体质量随机分为4组：健康对照组(10只)、哮喘组(15只)、异常黑胆质证组(15只)和异常黑胆质型哮喘组(15只)。按照参考文献[2-3]制备大鼠异常黑胆质证模型。采用干寒饲养环境温度[(6±1)℃，相对湿度50%]，每天置气候箱8 h饲养；足底电刺激(第1周电压35/40 V，25 min/次，1次/d；第2周电压40/45 V，35 min/次，1次/d；第3周电压45/50 V，45 min/次，1次/d等多因素复合作用21 d)，建立异常黑胆质证载体动物模型。每日观察动物的行为状态、舌象舌苔、情绪反应、皮肤毛发、兴奋程度、饮食饮水情况、睡眠状态、尿量状态、粪便状态，并定期称量动物体质量、饮食饮水的消耗量等指标[4]，综合判断本研究所建立的维吾尔医异常黑胆质证载体动物模型成功。

1.3.3 哮喘模型建立 在已建立的异常黑胆质证大鼠模型的基础上，于实验第1天腹腔注射1 mL抗原液[含10 mg鸡卵白蛋(OVA)，20%氢氧化铝胶生理盐水溶解]初次致敏，实验第8天重复1次以加强致敏。健康对照组和异常黑胆质证组以生理盐水代替OVA腹腔注射。从实验第15天开始，哮喘组和异常黑胆质型哮喘组大鼠每天置于密封玻璃钟罩内，以3%OVA生理盐水雾化吸入1次，每次30 min，以激发哮喘病动物模型。

1.3.4 气道反应性观察 以OVA雾化激发动物哮喘模型中，待出现挠鼻、烦躁不安、呛咳、张口呼吸、点头呼吸、腹部收缩明显、皮肤瘙痒、行动迟缓、喉中哮鸣有声等症状时，对哮喘模型组模拟气道反应性测定。配制浓度为0、3.14、6.27、12.54、25.09和50.18 mg/mL的氯化乙酰胆碱，分别每组随机取2只动物放于雾化箱中，每个浓度雾化5 min，在雾化过程中观察动物行为状态。

1.3.5 心电图检测 每只大鼠3%戊巴比妥钠生理盐水溶液按0.3 mL/100 g体质量腹腔注射麻醉后将大鼠仰面固定于是手术台，75%乙醇消毒大鼠四肢皮肤，采集大鼠心电图，并分别测量P波时限、P-R间期、QRS时限、Q-T间期。同一心动周期最早的P波起点至最晚的P波终点的间距为P波时限；最早的P波起点至最早的QRS波起点的间距为P-R间期；最早的QRS波起点至最晚的QRS波终点的间距为QRS时限；最早的QRS波起点至最晚的T波终点的间距为Q-T间期。

2 结果

2.1 异常黑胆质证载体模型观察 异常黑胆质证载体动物模型建立过程中大鼠行为特征的变化情况见表1。建模第7天大鼠舌象出现斑点；建模第14天大鼠舌象为舌质淡紫，略干燥，少苔，少量瘀斑；建模第21天大鼠舌象为舌质干，暗紫，苔白，瘀斑范围扩大，且部分有裂痕。

2.2 哮喘模型观察 哮喘组与异常黑胆质型哮喘组大鼠用6.27 mg/mL的氯化乙酰胆碱生理盐水溶液进行雾化时出现点头呼吸、张嘴呼吸、少动几乎不动、腹肌收缩明显且频率较快等现象；雾化浓度增加到12.545 mg/mL时，出现呼吸急促、腹肌收缩频率增快等现象。而健康对照组与异常黑胆质证组雾化浓度达到最大时，均无上述情况出现，与临床上哮喘病检测结果相同，认为哮喘模型激发成功。

2.3 各组大鼠体质量变化 异常黑胆质证组和异常黑胆质型哮喘组大鼠的体质量增长率明显低于健康对照组和单纯的哮喘组大鼠，见表2。

表1 异常黑胆质证载模型状态观察

表2 各组大鼠体质量增长率/%

2.4 各组大鼠心电图变化 异常黑胆质证组和异常黑胆质型哮喘大鼠心电图的P波时限、Q-T间期明显延长，与健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；异常黑胆质型哮喘组大鼠心电图P-R间期延长，与健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；但是异常黑胆质证组大鼠P-R间期无明显改变，与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；各组大鼠QRS时限均无明显改变，与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)；单纯的哮喘组大鼠心电图参数无明显改变，与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，见图1、表3。

A：健康对照组 B：哮喘组 C：异常黑胆质证组 D：异常黑胆质型哮喘组

图1 各组大鼠心电图变化

注：与健康对照组比较，*P<0.05。

3 讨论

维吾尔医学异常体液分型在疾病的诊治过程中起不可替代的作用[5-6]。根据维吾尔医体液学说，正常黑胆质在数量或质量上出现异常，使人体正常气质发生异常变化或失调导致异常黑胆质证，也可以是其他异常体液长期聚集，在机体“热”的作用下形成[7-8]。异常黑胆质作为一种病理产物[8-9]，在体内经常导致哮喘等各种复杂性、难治性疾病[4]。可见，异常黑胆质型体液与其他异常体液质比较，其致病性、危险性、恶性程度是最高的。

在维吾尔医体液轮的现代研究中，首先需要解决不同证候的标准问题，而动物模型是研究证候理论物质基础的重要工具。为了证候理论的研究走向标准化，必然要引入动物模型，尤其是标准化的动物模型是保证维吾尔医药现代化研究结果科学性的主要前提。标准化的动物模型不但可以提高研究结果的准确度和可信度，也可以提高维吾尔医药研究成果的国际认可度。因此，本研究以病证结合的异常黑胆质型哮喘大鼠模型为研究对象，记录模型制备过程中的心电图变化，从而阐述异常黑胆质证与心电图变化之间的相关性，为建立接近临床的、以证候诊断标准为基础的、量化的病证结合动物模型评价体系提供基础。

本研究结果显示，哮喘组、异常黑胆质组、异常黑胆质型哮喘组动物体质量增长速率均缓慢，而异常黑胆质型哮喘组与异常黑胆质组动物体质量增长速率差异无统计学意义，说明异常黑胆质证载模型是模型动物体质量缓慢增长的主导因素。哮喘组的动物体质量增长率前6周与健康对照组差异无统计学意义，于哮喘激发1 w后体质量增长率较健康对照组缓慢，但其增长率幅度与异常黑胆质型哮喘组差异无统计学意义。

异常黑胆质证载模型的建立采用的是三因素法(干寒饲料、干寒环境、电刺激)，尤其是电刺激对心脏也有极大的影响。电击致伤会有一部分电流流经心脏，电流长时间刺激会引起心室颤动。心电图是心脏活动变化的客观反映，是重要的生理指标，是作为心脏疾病最基本的检查方法。从心电图上获得的指标主要有P波时限、 P-R间期、QRS时限、Q-T间期的变化等。P波代表心房肌除极的电位变化，电刺激由窦房结产生，经由节间传导通路而扩散至左、右心房；P-R间期代表心房开始除极的时间；QRS波群代表心室肌除极的电位变化；Q-T间期代表心室肌除极和复极全过程所需的时间。

本研究对哮喘“病证”结合的动物模型在造模过程中电刺激对实验动物心脏的影响。结果显示，异常黑胆质证组和异常黑胆质型哮喘组大鼠心房肌除极的电位均分别与健康对照组和单纯的哮喘组存在明显的差异，异常黑胆质组与异常黑胆质型哮喘组P波时限较健康对照组增宽，也就是说心房肌除极的时间延长，造成左心房肥大可能。异常黑胆质型哮喘组P-R间期较健康对照组延长，表示房室传导阻滞，和心率较慢也有关系。异常黑胆质组与异常黑胆质型哮喘组Q-T间期较健康对照组延长，即心室复极延迟，会引起室上性心动过速，或心室颤动等室性心律失常。从心电图上可以看出异常黑胆质证组和异常黑胆质型哮喘组大鼠与健康对照组比较，图形P波倒置，成Qr型，S-T波段下移造成心肌缺血性改变可能，心脏悸动点由原来的窦房结变为异位，可能由心房/心室交界区发放悸动。QRS波振幅增大，造成心室肥大、心率下降、房性逸挬心率或交界逸挬心率的可能。维吾尔医认为心悸是由异常黑胆质在心及血管形成“沉淀”所造成，这与大鼠模型在造模过程中心脏功能的变化相一致。

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(本文编辑 周芳)

Study of electrocardiogram changes on abnormal Savda rat models with asthma

ZHENG Yulan1, LAN Wei1, Bahaguli Abudureheman2, Mireayi Yalikun2, Batur Mamtimin3

(1CollegeoftraditionalChinesemedicine,2PharmacyDepartment,3CentralLaboratory,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Objective To observe the changes of electrocardiogram (ECG) in abnormal Savda rat models with asthma. Methods 55 SD rats were randomly divided into 4 groups: normal control group, asthma group, abnormal Savda syndrome group and abnormal Savda with asthma group. Electrocardiograms were recorded and the P-wave interval, P-R interval, QRS duration and Q-T interval were examined. The changes of body weight of different groups were also recorded. The difference between different groups was analyzed by t-test. Results The body weight growth of the abnormal Savda syndrome group and the abnormal Savda with asthma group was significantly lower than that of the healthy control group and the asthma group. P wave duration and QT interval of the ECG of the abnormal Savda syndrome group and the abnormal Savda with asthma group were significantly longer than the healthy control group (P<0.05). P-R interval of rats with the abnormal Savda with asthma was significantly higher than that in the healthy control group (P<0.05). However, there was no significant difference in PR interval of the rats with abnormal Savda syndromes (P>0.05). There was no significant difference in QRS duration between each group (P>0.05). The electrocardiographic parameters of the asthma group did not change, and there was no significant difference between the healthy control group (P>0.05). Conclusion The electrocardiogram parameters of rat model of abnormal Savda changed significantly.

abnormal Savda syndrome; asthma; electrocardiogram

国家自然科学基金(81460749)

郑玉兰(1990-)，女，在读硕士，研究方向：证候研究。

巴吐尔·买买提明(1971-)，男(维吾尔族)，博士，教授，研究方向：新疆重大疾病的中维西医结合研究，E-mail：batur72@163.com。

R29

A

1009-5551(2016)12-1503-04

10.3969/j.issn.1009-5551.2016.12.005

2016-09-28]