弥漫性大B细胞淋巴瘤中MYC、Bcl-2阳性表达患者的临床特征差异

糜公仆　王劲　周旭　余昌云

第三军医大学附属大坪医院血液科,重庆400042

弥漫性大B细胞淋巴瘤中MYC、Bcl-2阳性表达患者的临床特征差异

糜公仆王劲周旭余昌云

第三军医大学附属大坪医院血液科,重庆400042

目的探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤中MYC、Bcl-2阳性表达患者的临床特征差异。方法选择2012年1月～2016年1月我院收治的61例弥漫性大B细胞淋巴瘤患者为研究对象,采用免疫组化法检测所有患者的MYC、Bcl-2的阳性表达；观察患者的性别、年龄、原发部位、细胞来源、结外受侵情况、淋巴瘤国际预后指数（IPI)、临床分期、治疗效果及生存情况分布等临床特征；观察比较MYC/Bcl-2阳性表达与阴性表达患者的临床特征差异；观察MYC阳性表达与Bcl-2阳性表达患者的临床特征差异。结果MYC/Bcl-2阳性表达患者性别、年龄、原发部位及细胞来源与MYC/Bcl-2阴性表达患者比较,差异均无统计学意义（P＞0.05)；而MYC/Bcl-2阳性表达患者结外受侵、IPI评分、临床分期、治疗效果及生存情况与MYC/Bcl-2阴性表达患者比较,差异均有统计学意义（P＜0.05)。Bcl-2阳性表达患者性别、年龄、原发部位、细胞来源、结外受侵情况、IPI评分、临床分期、治疗效果及生存情况与MYC阳性表达患者比较,差异均无统计学意义（P＞0.05)。结论Bcl-2或MYC阳性表达与弥漫性大B细胞淋巴瘤患者的病情严重程度及疗效相关,MYC阳性表达与Bcl-2阳性表达患者的临床特征无明显差异。

弥漫性大B细胞淋巴瘤;MYC;Bcl-2;临床特征

弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是弥漫性增生的大B细胞恶性肿瘤,瘤细胞核大于或等于正常巨噬细胞核,或超过2倍正常淋巴细胞,包括纵隔（胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤等。非霍奇金淋巴瘤（nonhodgkin lymphoma,NHL)中最为常见的一种类型,其在组织学、免疫表型、病因学、遗传学、临床病理特征和预后等方面都表现出高度的异质性[1],不同亚类的弥漫性大B细胞淋巴瘤临床过程和预后不尽相同弥漫大B细胞淋巴瘤细胞不同的免疫表型可能与肿瘤的生物学行为和预后有密切关系。“双打击”B细胞淋巴瘤（double-hit lymphoma,DHL)是一种近年来被确认的B细胞淋巴瘤分子分型,主要涉及MYC和Bcl-2基因的重排[2]。近年来,MYC和Bcl-2蛋白的异常表达与弥漫性大B细胞淋巴瘤发生、发展的关系逐渐受到关注,本研究也通过检测MYC和Bcl-2蛋白的表达水平来了解弥漫大B细胞淋巴瘤患者的临床特征,从而判断患者的疗效及预后,可能具有重大的临床意义。同时本研究还通过分析MYC和Bcl-2蛋白阳性表达患者的临床特征差异,以期评估不同MYC或Bcl-2蛋白表达水平患者的疗效及预后。

1　资料与方法

1.1一般资料

回顾性分析2012年1月～2016年1月第三军医大学附属大坪医院收治的61例弥漫性大B细胞淋巴瘤患者的临床资料,所有患者均为首发病例,且临床资料完整,均符合年世界卫生组织制订弥漫性大B细胞淋巴的诊断标准[1]。其中男33例,女28例；年龄45～70岁,平均（62.97±12.42)岁；原发部位:腹股沟淋巴结23例,胃肠道18例,颈部14例,其他6例；细胞来源:生发中心内亚型24例,生发中心外亚型37例；IPI评分0～1分13例,2分17例,3分19例,4～5分12例；临床分期:Ⅰ～Ⅱ期27例,Ⅲ～Ⅳ期34例；缓解40例,未缓解21例；1年总生存51例,3年总生存41例。所有患者均经知情同意并签署知情同意书,本研究经我院医学伦理会审核批准。

1.2检测方法

将患者淋巴结组织蜡块标本经10%中性甲醛溶液固定,常规脱水,石蜡包埋,4 μm厚切片,常规脱蜡水化。0.3%过氧化氢（H2O2)阻断内源性过氧化物酶, 10%小牛血清封闭切片,滴加一抗,4℃过夜。PBS洗后滴加广谱生物素化二抗（1:200,北京中杉金桥生物科技有限公司),SP复合物（1:200),DBA显色（DBA试剂盒购于北京中杉金桥生物科技有限公司),苏木精复染细胞核,脱水,透明,封片。分别设相应阳性、阴性、空白对照。所有病理标本切片用PBS液代替一抗作阴性对照。MYC蛋白主要表达在细胞核和细胞浆, Bcl-2蛋白表达在细胞质,主要表现为棕黄色或棕褐色细小颗粒。400倍高倍镜下对随机选取10个视野,每个视野计数100个细胞,计数阳性率,阳性率＞10%为阳性表达。

1.3观察指标及评价标准

观察患者MYC、Bcl-2的阳性表达率；观察患者的性别、年龄、原发部位、细胞来源、结外受侵情况、淋巴瘤国际预后指数（IPI)评分、临床分期、治疗效果及生存情况分布等临床特征；观察比较Bcl-2/MYC阳性及阴性表达患者的临床特征差异；观察MYC或Bcl-2阳性表达的临床特征差异。国际预后指数（IPI)评价标准:年龄≤60岁=0分,＞60岁=1分；行为状态0、1为0分,2、3、4为1分；Ann Arbor分期Ⅰ或Ⅱ期为0分,Ⅲ、Ⅳ期为1分；LDH正常为0分,高于正常为1分；结外病变受侵部位数＜2个为0分,≥2个为1分。每一个预后不良因素计数为1分,上述5项指标评分的总和即为IPI。疗效缓解评价标准:临床和影像学肿瘤证据治疗前肿瘤相关症状完全消失,非霍奇金淋巴瘤引起的异常生化指标恢复正常。

1.4统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析,计量资料数据用均数±标准差（±s)表示,两组间比较采用t检验；计数资料用率表示,组间比较采用χ2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

表1　Bcl-2/MYC阳性及阴性表达患者的临床特征差异（例)

2.1Bcl-2/MYC阳性与阴性表达患者的临床特征差异

Bcl-2/MYC阳性表达患者性别、年龄、原发部位及细胞来源与Bcl-2/MYC阴性表达患者比较,差异均无统计学意义（P＞0.05)；而Bcl-2/MYC阳性表达患者结外受侵情况、IPI评分、临床分期、治疗效果及生存情况比较,差异均有统计学意义（P＜0.05)。见表1。

2.2Bcl-2阳性与MYC阳性表达患者的临床特征差异

Bcl-2阳性表达患者性别、年龄、原发部位、细胞来源、结外受侵情况、IPI评分、临床分期、治疗效果及生存情况分布相似,差异均无统计学意义（P＞0.05)。见表2。

3　讨论

弥漫大B细胞淋巴瘤作为常见的侵袭性淋巴瘤,是一种起源于淋巴组织的增殖性疾病,其临床疗效及预后的差异性较大。由于其恶性程度较高,发病原因及发病机制不甚明了,且该病常常呈进展性,大多数患者确诊时已为晚期。未予治疗的患者,1年生存率极低,若给予联合利妥昔单抗（美罗华)的方案化疗,可获得较为满意的临床缓解率和较长的无病生存率。但弥漫大B细胞淋巴瘤多发于老年人,本次研究中纳入患者的平均年龄为（58.97±12.42)岁,患者疗效及耐受性均较差,因此治疗前有效评估患者的临床疗效及预后对于临床治疗方案的制订尤为重要。由于IPI综合了年龄、侵犯部位、疾病进展程度和肿瘤负荷等多项参数,长期以来被广泛应用于弥漫大B细胞淋巴瘤患者预后的评估,并一直被用作弥漫大B细胞淋巴瘤判断预后的指标之一[3]。

研究显示,IPI每增加1分,死亡风险增加1.055倍[4]。大量研究发现,遗传学异常多可累及多条染色体,而弥漫大B细胞淋巴瘤常见的发生遗传学改变的基因为MYC、Bcl-2、Bcl-6[5-7]。MYC基因是位于染色体8q24的原癌基因,是一种转录因子,具有重要的细胞功能,对细胞生长、增殖、分化、代谢及促进新生血管形成等发挥重要作用[8]。大量研究表明,c-MYC基因异常与非霍奇金淋巴瘤不良预后相关,c-MYC重排是独立于IPI的不良预后因子[9-12]。Akkaya等[13]研究发现,MYC基因异常与弥漫大B细胞淋巴瘤预后密切相关,可作为预测弥漫大B细胞淋巴瘤的预后因素并指导治疗。c-MYC基因易位引起的重排较少见,淋巴结和结外弥漫大B细胞淋巴瘤中出现c-MYC重排的发生率分别为2%和10%,但胃肠道弥漫大B细胞淋巴瘤可高达28%,且治疗后完全缓解率较高[14-15]。Bcl-2基因易位是滤泡性淋巴瘤的遗传学特征,存在于20%～30%的弥漫大B细胞淋巴瘤患者中,提示肿瘤起自滤泡性淋巴瘤高度恶性转化[16],大量的研究表明Bcl-2蛋白可以作为独立于临床分期和免疫类型的弥漫大B细胞淋巴瘤预后因子[17-20]。弥漫大B细胞淋巴瘤可包括中心母细胞型、免疫母细胞型、富于T细胞/组织细胞型、间变细胞型、浆母细胞型及表达ALK全长型,而常见型有以下3种亚型:①中心母细胞型:最为常见的一种,瘤细胞主要为中心母细胞；②免疫母细胞型:是DLBCL中与免疫母细胞相似的、数量占肿瘤细胞的绝大多数的类型；③间变细胞型:肿瘤细胞胞体大、异形多核。DLBCL变异型较少见,其病变部位可出现黏液间质和原纤维样基质。本次研究中,Bcl-2/MYC阳性表达患者其IPI评分情况总体高于Bcl-2/MYC阴性患者,而缓解率、1年生存率及3生存率均明显低于Bcl-2/MYC阴性患者,差异均有统计学意义（P＜0.05)。

表2　Bcl-2阳性与MYC阳性表达患者的临床特征差异（例)

国外大量研究显示,MYC和Bcl-2高表达,提示弥漫大B细胞淋巴瘤患者预后较差[21-22]。而国内张晓娟等[23]研究也发现,MYC和Bcl-2低表达均可使弥漫大B细胞淋巴瘤患者总生存时间及无进展生存期延长,MYC和Bcl-2的检测对弥漫性大B细胞淋巴瘤患者的预后具有判断价值,可作为判断预后的分子标志物。由此可见,MYC和Bcl-2在弥漫大B细胞淋巴瘤临床治疗效果及预后评估中具有重要的临床价值。Bcl-2和Bcl-6阳性表达提示近期疗效与预后不佳,其水平可被视为独立的弥漫大B细胞淋巴瘤分析因素,对患者治疗过程中病情发展的预测、个体化治疗策略的制订有重要意义[24]。Green等[25]研究发现,免疫组化法检测MYC和Bcl-2共阳性表达患者治疗后完全缓解率低,3年生存期及无进展生存期均短于非共阳性表达患者。但MYC与Bcl-2共存于弥漫大B细胞淋巴瘤的概率并不是很高,多数情况下是MYC或Bcl-2异常表达,有研究者回顾性分析了30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者的临床资料,结果显示MYC、Bcl-2共阳性表达率为30%[26]。目前,关于MYC和Bcl-2的临床价值差异的相关研究极为少见,因此本研究观察比较了MYC阳性表达患者与Bcl-2阳性表达患者的临床特征差异,结果发现Bcl-2阳性表达患者性别、年龄、原发部位、细胞来源、结外受侵情况、IPI评分、临床分期、治疗效果及生存情况分布相似（P＞0.05),尚未发现MYC与Bcl-2异常表达对弥漫大B细胞淋巴瘤在疗效及预后评估方面的价值差异,但本次研究纳入的样本量较少,希望在以后的研究中扩大样本量,以进一步证实。

综上所述,Bcl-2或MYC阳性表达与弥漫性大B细胞淋巴瘤患者的病情严重程度及疗效相关,且MYC阳性表达与Bcl-2阳性表达患者的临床特征无明显差异,提示MYC与Bcl-2在弥漫性大B细胞淋巴瘤中存在相似的临床评估价值。

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Difference of clinical features of diffuse large B cell lymphoma patients with positive expression of MYC and Bcl-2

MI GongpuWANG JinZHOU XuYU Changyun
Department of Hematology,Affiliated Ohtsubo Hospital of the Third Military Medical University,Chongqing400042, China

Objective To explore the diffuse large B cell lymphoma MYC,Bcl-2 positive expression in patients with clinical features.Methods From January 2012 to January 2016,61 patients with diffuse large B cell lymphoma in Affiliated Ohtsubo Hospital of the Third Military Medical University were selected as the research objects,the positive expression of Bcl-2 and MYC was detected by immunohistochemical method;clinical features of patients,such as gender,age,primary site,cell source,outside infringement of lymph nodes,international prognostic index（IPI),clinical staging,therapeutic effect and survival condition distribution were observed;clinical features of patients such as gender, age,primary site,cell source,outside the junction invaded,IPI,clinical stages,therapeutic effect and survival condition distribution were observed;differences of clinical features of patients between positive expression and negative expression of MYC/Bcl-2 was observed and compared;differences of clinical features between patients with positive expression of MYC and Bcl-2 were observed.Results Gender,age,primary site and cells sources in patients with positive expression and negative expression of MYC/Bcl-2 had no statistically significant differences（P＞0.05);and the outside infringement of lymph nodes,IPI score,clinical stags,therapeutic effect and survival situation of patients with positive expression of MYC/Bcl-2 had statistically significant differences（P＜0.05).Gender,age,primary site,outside infringement of lymph nodes,IPI score,clinical stags,therapeutic effect and survival condition of patients with positive expression of MYC and Bcl-2 had no statistically significant differences（P＞0.05).Conclusion The positive expression of MYC and Bcl-2 is associated with the severity and curative effect of patients with diffuse large B cell lymphoma,there is no difference in the clinical features of patients with positive expression of MYC and Bcl-2.

Diffuse large B cell lymphoma;MYC;Bcl-2;Clinical features

R733.4

A

1673-7210(2016)06(b)-0025-04

（2016-03-08本文编辑:任念)