HPLC法测定虾康健中虎杖苷的含量

2016-12-02王志萍米惠广西中医药大学530001南宁市明秀东路179号

广西中医药 2016年4期

关键词：康健虎杖中医药大学

张波王志萍米惠广西中医药大学530001南宁市明秀东路179号

冯桥广西壮族自治区民族医药研究院530001

王勤王孝勋广西中医药大学530001

·中药方剂·

HPLC法测定虾康健中虎杖苷的含量

张波王志萍*米惠广西中医药大学530001南宁市明秀东路179号

冯桥广西壮族自治区民族医药研究院530001

王勤王孝勋广西中医药大学530001

目的：建立虾康健中虎杖苷的含量测定方法。方法：采用HPLC法，以岛津InertsilODS－3柱为色谱柱（5μm，4.6mm×250mm），流动相为乙腈∶水（22∶78），体积流量为1ml／min，检测波长为306nm，柱温为30℃。结果：虎杖苷进样量在0.015～1.600 μg范围内与峰面积呈良好线性关系，Y＝3×106X－69 226，r2＝0.99952；平均加样回收率为98.95%，RSD＝1.23%（n＝6）；三批虾康健的虎杖苷含量分别为0.7991mg／g、0.7943mg／g、0.7911mg／g。结论：本研究建立的HPLC法可用于虾康健中虎杖苷的含量测定及质量控制。

HPLC；虾康健；虎杖苷；含量测定

虾康健是本课题组研究开发的中药新制剂，由板蓝根、虎杖、茵陈、罗汉果等组成，试用于南美白对虾的人工养殖，结果能显著提高南美白对虾的存活率，同时能促进对虾生长。由于汤剂使用不便，本课题组对方中的中药进行提纯并制成粉剂。虎杖为方中的主要药材之一，其主要成分虎杖苷具有活血定痛、清利湿热、抗菌、抗炎、促进微循环作用［1－4］。因此，本研究选择虎杖苷作为含量测定指标，参考相关文献［5－6］，采用HPLC法测定虾康健中虎杖苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器Waters e2695高效液相色谱仪（沃特世公司）；EL104电子天平（梅特勒－托利多仪器上海有限公司）。

1.2 试药虾康健由广西中医药大学制药厂生产，批号分别为20150722、20150723、20150724；虎杖苷标准品由中国药品生物制品检定所提供，批号为111575－200502，纯度≥98%；乙腈色谱纯为默克股份两合公司产品；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱为岛津Inertsil ODS－3色谱柱（5 μm，4.6 mm× 250mm），流动相为乙腈∶水（22∶78），体积流量为1 ml／min，检测波长为306 nm，柱温为30℃，进样量为10 μl；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥24 h的虎杖苷对照品适量，精密称定，置于10 ml棕色量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，制备对照品储备溶液，然后稀释成0.0150 mg／ml虎杖苷对照品溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备取虾康健约1 g，精密称定，置于25 ml具塞锥形瓶中，加甲醇溶解，称重，超声处理（300 W，40 kHz）使充分溶解，放冷，加甲醇补足减失重量，过0.45 μm滤膜，取续滤液，即得。

图1 高效液相色谱图

2.4 阴性对照溶液的制备按虾康健处方比例称取缺虎杖的其他药材，根据虾康健生产工艺制备成缺虎杖药材的阴性对照制剂。再按2.3项供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μl进样测定，色谱图见图1。虎杖苷与相邻峰完全分离，分离度均大于1.5，保留时间为9.1 min左右，阴性无干扰，理论塔板数不低于3 000。

2.5 线性关系考察取对照品溶液及对照品储备溶液适量，分别制备0.0015 mg／ml、0.0030 mg／ml、0.0060 mg／ml、0.0120 mg／ml、0.0225 mg／ml、0.0300 mg／ml、0.0800 mg／ml、0.1600 mg／ml的对照品溶液。按照2.1项色谱条件进样测定，各个浓度对照品溶液分别进样10 μl进行测定，以进样量X（μg）为横坐标，对应峰面积为纵坐标，计算出标准曲线为：Y＝3×106X－69 226，r2＝0.99952。结果表明，虎杖苷进样量在0.015～1.600 μg范围内线性关系良好。

2.6 重复性试验分别按照2.3项方法制备6份供试品溶液，按2.1项方法进样10 μl测定含量，记录峰面积，按标准曲线计算出供试品溶液中虎杖苷的含量为0.0381 mg／ml，RSD＝0.92%（n＝6），表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验对同一供试品溶液分别于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h分别进样，按2.1项方法进样10 μl，结果虎杖苷平均峰面积为885 446，RSD＝1.43%（n＝8），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.8 加样回收率试验取已知虎杖苷含量的虾康健样品（批号：20150722）6份，每份约4 g，精密称定，再分别精密量取虎杖苷对照品储备液适量，按2.3项方法制备供试品溶液，再按2.1项方法进行测定，计算出平均回收率为98.95%，RSD＝1.23%（n＝6），结果见表1。表明本方法的准确度符合要求。