黄连对脾虚大鼠胃肠运动功能及胃动素、胃泌素的影响

杨红莲 段玉红 钱笑音

摘要：目的 观察黄连对脾虚大鼠胃肠运动功能及胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）的影响，探讨其“健胃”“败胃”的量效机制。方法 采用劳形与劳神制作劳倦过度脾虚模型。60只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性药组和黄连大、中、小剂量组，每组10只。各给药组给予相应药液灌胃，空白对照组和模型组给予生理盐水灌胃，每日1次，连续14 d。观察各组脾虚大鼠一般情况、胃肠运动功能及MTL、GAS含量。结果 与空白对照组比较，模型组大鼠胃内残留率明显升高，小肠推进率、MTL和GAS含量明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，黄连小剂量组胃内残留率明显降低，小肠推进率、MTL和GAS含量明显升高（P<0.05，P<0.01）；黄连大剂量组小肠推进率、MTL含量明显降低（P<0.05）。结论 黄连大剂量“败胃”、小剂量“健胃”，其量效机制可能与直接调节胃肠运动，或通过调节胃肠激素的分泌调节胃肠运动有关。

关键词：黄连；脾虚；胃肠运动；胃动素；胃泌素；大鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.11.018

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）11-0075-03

Abstract： Objective To observe the effects of Coptidis Rhizoma on gastrointestinal motility functions， MTL and GAS in spleen-deficiency rats； To explore the dose-effect mechanism of “invigorating stomach” and “spoiling appetite”. Methods Fatigue and troublesome were used to establish exhausted spleen-deficiency models. 60 SD rats were randomly divided into blank control group， model group， positive medicine group， Coptidis Rhizoma high-， medium- and low-dose groups， with 10 rats in each group. Each medication group received relevant medicine for gavage， while the blank control group and model group received normal saline for gavage， once a day for 14 d. The general gastrointestinal motility functions， MTL and GAS of rats in each group were observed. Results Compared with blank control group， the gastric residual rate of model group was significantly higher； small intestinal propulsion rate， MTL， and GAS were significantly lower （P<0.05， P<0.01）. Compared with model group， the gastric residual rate in Coptidis Rhizoma low-dose group was significantly lower； small intestinal propulsion rate， MTL and GAS increased significantly （P<0.05， P<0.01）； small intestinal propulsion rate and MTL in Coptidis Rhizoma high-dose group were significantly lower （P<0.05）. Conclusion High-dose Coptidis Rhizoma leads to “spoiling appetite”， and low-dose Coptidis Rhizoma leads to “invigorating stomach”， which may be related to adjusting gastrointestinal motility directly or adjusting the secretion of gastrointestinal hormones.

Key words： Coptidis Rhizoma； spleen deficiency； gastrointestinal motility； MTL； GAS； rats

黄连始载于《神农本草经》，性味苦寒，其单方、复方及主要提取物被广泛用于治疗脾胃病。然而黄连治疗脾胃病又有“小剂量健胃，大剂量败胃”之说。黄连的“健胃”“败胃”主要来自于“苦寒健胃”“苦寒败胃”的说法。中医认为小量苦寒药能健益脾胃，使脾胃功能正常发挥。由于苦能燥湿，燥伤阴，阴伤则胃无以受纳；寒能伤阳，阳伤则脾的运化功能受损。因而，大剂量苦寒药可导致脾胃功能失调。以往的药理研究结果表明，黄连“健胃-败胃”的量效关系主要与其对胃肠动力的调节有关[1-2]。本实验采用劳形与劳神法复制脾虚模型，探讨不同剂量黄连对脾虚大鼠胃肠动力的影响，揭示黄连“健胃”“败胃”量效的部分本质，为临床合理运用黄连提供初步的实验依据。

1 实验材料

1.1 动物

2月龄SPF级健康SD雄性大鼠60只，体质量为（200±10）g，长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，合格证号SCKK（吉）2014-0004，饲养于湿度45%～55%、室温（23±2）℃环境下。

1.2 药物

黄连，通辽市药材公司，批号分别为20140612、20131209。黄连水煎液制备：精密称取500 g黄连放入圆底瓶，加10倍量水，浸泡30 min，电热套加热，武火煮沸后文火煎煮1 h，收集上清液，药渣加8倍量水煎煮1 h，收集上清液，药渣加6倍量水，再煎煮1 h，收集上清液，合并滤液，旋转蒸发仪减压浓缩至500 mL，即药液浓度为100%（相当1 g原药材/mL）；多潘立酮片，西安杨森制药有限公司，批号20120328。

1.3 主要试剂与仪器

胃动素（MTL）试剂盒，北京北方生物技术研究所；胃泌素（GAS）试剂盒，北京北方生物技术研究所。r-911全自动放免技术仪，中国科技大学中佳公司；TGL-20B型离心机，上海安亭科学仪器厂；电子天平，沈阳龙腾电子有限公司。

2 实验方法

2.1 造模

参照文献[3]方法，采用劳形与劳神制作劳倦过度脾虚模型。大鼠每日游泳至力竭，同时剥夺睡眠时间5 h，连续12 d。实验期间观察大鼠毛色、精神状态、饮食、大便等一般情况，隔日称重1次。

2.2 分组及给药

大鼠适应性喂养1周，按体质量随机分为空白对照组、模型组、阳性药组及黄连大、中、小剂量组，每组10只。黄连大、中、小剂量组分别给予黄连药液20、10、5 g/kg灌胃，阳性药组给予多潘立酮水溶液5 g/kg灌胃，空白对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。给药体积均为10 mL/kg，每日1次，造模后第13日开始用药，连续14 d。

2.3 指标检测

2.3.1 大鼠胃内残留率及小肠推进率测定 末次给药后，所有大鼠禁食不禁水24 h，随后用含5%炭末和2%CMC-Na的炭末混悬液2.5 mL灌胃，30 min后每只大鼠用1%戊巴比妥钠1.2 mL麻醉，腹主动脉采血3 mL，分别用于制备血清和血浆。脱颈处死大鼠，剖开腹腔，将幽门至回盲部的一段肠管取出并测量其长度，此即小肠的总长度，然后测出炭末推进长度，即幽门部到炭末前沿的长度，计算小肠推进率（幽门部到炭末前沿的长度/小肠总长度×100%）；然后将大鼠胃贲门和幽门部两端分别结扎并称取胃全重，将胃体剪开（沿胃大弯），将胃内残留物洗净，滤纸拭干称重，此即胃净重，用胃全重减去胃净重即得胃内残留物质量，计算胃内残留率[4][（胃全重-胃净重）÷炭末混悬液灌胃总质量×100%]。

2.3.2 胃动素和胃泌素水平测定 大鼠腹主动脉采血4 mL，置于2只试管中，第1只管2 mL，3000 r/min离心10 min，分离血清，置于-20 ℃冰箱保存，待测血清GAS；第2只管预先加入10%EDTA-K2 30 μL、抑肽酶1000 U抗凝，2 mL血加入其中混匀，4 ℃、3000 r/min离心15 min，分离血浆，置于-20 ℃冰箱保存，待测血浆MTL。

3 统计学方法

采用SPSS16.0统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示，多组间比较采用方差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。

4 结果

4.1 一般状况

空白对照组大鼠精神状态良好，毛色有光泽，活动度佳，食量正常、大小便正常；模型组大鼠出现活动减少，拱背、眯眼、被毛散乱无光泽、大便稀、摄食量减少、体质量减轻等脾虚症状；黄连大、中剂量组大鼠上述脾虚症状加重；阳性药组和黄连小剂量组大鼠则食量增加，精神好转，体质量增加。

4.2 黄连对脾虚大鼠胃内残留率和小肠推进率的影响

与空白对照组比较，模型组胃内残留率明显升高、小肠推进率明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，阳性药组和黄连小剂量组胃内残留率明显降低（P<0.01），小肠推进率明显升高（P<0.05），黄连大剂量组小肠推进率明显降低（P<0.05）。结果见表1。

4.3 黄连对脾虚大鼠胃动素和胃泌素水平的影响

与空白对照组比较，模型组GAS、MTL水平明显下降（P<0.01）；与模型组比较，阳性药组和黄连小剂量组GAS、MTL水平明显升高（P<0.05，P<0.01），黄连大剂量组MTL明显降低（P<0.05），黄连中剂量组MTL、GAS有下降趋势，但差异无统计学意义（P>0.05）。结果见表2。

5 讨论

脾虚证指脾气不足、失其健运所表现的证候，是脾胃证候中的常见证型，多因素体脾虚、饮食不节、劳累过度、情志不遂或久病耗伤脾气所致。脾气虚证以食少、腹胀、大便溏薄、神疲、肢体倦怠、舌淡脉弱等为常见证候[5]。根据其病因，目前造模方法很多，如苦寒泻下法、饮食不节法、劳倦过度法、外湿困脾法。用大黄苦寒泻下虽能塑造脾虚模型，但考虑苦寒药物黄连对脾胃功能的影响，恐对实验结果造成影响，故选用劳形与劳神相结合的劳倦过度法。此方法简单易操作，且模型动物出现的症状与脾虚患者临床表现相似。

近年来，已经有关于黄连“健胃”“败胃”的实验研究，如杨氏等[6]连续14 d给大鼠灌胃生黄连和黄连不同炮制品，结果显示，生黄连组动物饮水量、饮食量、体质量均低于对照组，认为与黄连过服久服损伤脾胃有关。也有学者对黄连“健胃”“败胃”的机理进行了探讨，如有研究发现过量使用黄连组动物的胃排空及胃肠推进较正常动物减慢[1]。有学者用大剂量黄连给予大鼠连续灌胃，发现动物胃黏膜组织MTL含量显著降低[2]。上述研究表明，黄连“健胃”“败胃”与胃肠运动功能密切相关。胃排空实验和小肠推进实验是研究胃肠运动功能的基本实验方法，胃内残留率、小肠推进率及炭末排出时间是反映胃肠运动功能的基本指标。胃肠激素在调节胃肠运动中起重要作用。MTL属消化间期激素，其生理功能是促进消化道运动，加速胃排空，对胃肠运动尤其消化间期移行复合运动有调节作用[7]。GAS主要促进胃酸分泌、胃窦收缩；促进胃蛋白酶和内因子分泌，对胃黏膜细胞有营养及增殖作用[8]。本实验结果表明，模型组胃内残留率明显升高，小肠推进率明显降低，MTL和GAS水平明显降低；黄连大剂量组脾虚症状加重，胃内残留率有升高趋势，小肠推进率明显降低，MTL显著降低，黄连小剂量组脾虚大鼠精神状态好转，体质量增加，MTL、GAS显著升高。本研究提示，黄连大剂量“败胃”、小剂量“健胃”，其量效机制可能与直接调节胃肠运动，或通过调节胃肠激素的分泌间接调节胃肠运动有关。

参考文献：

[1] 邱赛红.常用苦寒药过量使用对胃粘膜屏障功能影响的实验研究[J].中国医药导刊，2007，9（2）：140-142.

[2] 李飞艳，邱赛红，尹健康，等.常用苦寒药对大鼠胃肠激素影响的研究[J].湖南中医药大学学报，2007，27（1）：9-11.

[3] 胡琳琳，高云芳，何志仙.三种脾虚证模型小鼠消化吸收功能改变的比较研究[J].中国中西医结合杂志，2005，25（9）：813-816.

[4] 刘芬，刘艳菊，田春漫.苍术提取物调节脾虚证大鼠胃肠动力障碍的作用机制研究[J].北京中医药大学学报，2014，30（12）：825-829.

[5] 国家技术监督局.中医临床诊疗术语[M].北京：中国标准出版社，1997：23-24.

[6] 杨伟鹏，王怡薇，王彦礼，等.吴茱萸汁炮制对黄连抗炎药效和苦寒药性的影响[J].中国中医药信息杂志，2013，20（8）：42-44.

[7] 周吕，柯美云.胃肠动力学[M].北京：科学出版社，1999：29-31.

[8] 朱宪彝.临床内分泌学[M].天津：天津科技卫生出版社，1993：63.