滩湖后代和双胎滩公羊多羔主效基因FecB检测试验

马吉锋 王建东 张俊丽 梁小军 （宁夏农林科学院草畜工程技术研究中心 750002)

滩湖后代和双胎滩公羊多羔主效基因FecB检测试验

马吉锋 王建东 张俊丽 梁小军 （宁夏农林科学院草畜工程技术研究中心 750002)

通过对滩羊公羊、湖羊母羊，滩湖F1代公羔、母羔、滩湖F2代公羔、母羔共96只羊进行了FecB检测，结果表明，滩湖F1代公羔中测定的15只羊中有14个B+型，1个BB型，滩湖F1代母羔中测定的15只羊中有14个B+型，1个BB型，滩湖F2代公羔中测定的9只羊中有3个B+型，滩湖F2代母羔中测定的13只羊中有6个B+型，10只滩羊双胞胎公羔中有1个B+型。通过对FecB检测，为下一步滩羊多胎品系选育提供理论依据。

滩羊；多胎品系；杂交育种；主效基因；检测

世界绵羊品种库现有的近700个品种中，仅少数具有产羔数多、性成熟早和常年发情的特点，其余多属季节性发情和一胎单羔。因此，如何有效地提高绵羊的繁殖力成为育种学家最关注的热点之一[1]。Booroola（FecB）基因是在绵羊中识别出的第一个高繁殖力主效基因[2]，具有稳定的多胎性。该突变基因被绵羊和山羊遗传命名委员会正式定名为FecB基因 （Fecundity Booroola），FecB基因存在3种基因型，相应的产羔数BB型 （突变型）＞B+型＞++型 （野生型）。直到2001年，3个研究团队 （Mulsant et al，2001；Souza et al，2001；Wilson et al，2001）才将该突变定位于绵羊第6号染色体BMPR1B基因，该基因编码区内部高度保守的胞内激酶信号区域发生了A746G突变，引起谷氨酰胺变成精氨酸，最终导致绵羊排卵数增加。当前大部分研究都集中在不同绵羊品种中FecB位点的检测。已证实该突变存在于我国的小尾寒羊和湖羊等。目前，FecB突变作为高产羔数的分子标记已广泛应用于绵羊育种改良中。2015年10月，滩羊多胎品系选育课题组，采集了育种群中的滩羊公羊、湖羊母羊，滩湖F1代公羔、母羔、滩湖F2代公羔、母羔进行了FecB检测，旨在通过检测滩湖后代是否携带高繁殖力主效基因 （FecB），可以加速滩羊多胎品系的选育步伐。

1 材料

测定羊96只，采血注射器，真空抗凝采血管 （塑料），DNA提取试剂盒，Tagman MGB探针，2×Master Mix，FecB正向引物，FecB反向引物，去离子水。

2 方法

采用颈静脉法采血2～5ml，置于真空抗凝采血管中。对所采集的血液使用DNA提取试剂盒法提取对应羊只的DNA样。FecB引物和探针由英潍捷基公司合成，采用购自ABI公司的universal Master Mix，PCR仪型号为ViiA·7实时荧光定量PCR系统。

反应体系：以提取的DNA为模板，以上述合成的探针在荧光定量PCR系统中进行以下扩增 （6μl反应体系）：1μl的基因组 DNA，3μl的 2×Master Mix，10μmol/L 正向引物0.3μl，10μmol/L 反向引物 0.3μl； 10μmol/L探针 P-G 0.15μl，10μmol/L探针 P-A 0.15μl，去离子水补齐至 6μl。 具体步骤如下。

设置一个空白对照NTC，设置两个已知GG型绵羊基因组对照，一个已知AG型绵羊基因组对照，一个已知AA型绵羊基因组对照。

向384孔板或96孔板加入上述反应体系。

完成后用封口膜封口，平板离心机离心。

开启ABI ViiA·7实时荧光定量PCR系统，设置参数，反应条件如下：95℃10min，95℃30s，60℃1min，40个循环。

3 分析结果

应用ViiA7_v1_1 Software进行数据分析。根据对照扩增结果，分型产生3种基因型，见附图。

附图

4 讨论与小结

增加产羔率是提高繁殖效率的重要方式，自2000年之后，我国陆续对地方品种及引进的绵羊品种开展FecB基因相关研究，已在多个地方品种中发现含有FecB突变基因。绵羊多胎基因 （FecB）的位点，被定位在第6号染色体上，具有提高排卵和产羔的生物学作用。通过BMPR-IB分子标记辅助选择，可以提高对选择多胎母羊的准确性。其效应表现为：纯合型 （BB）多产1.5只羔羊；杂合型 （B+）多产1.0只羔羊；野生型 （++）与地方品种接近。本l试验测定表明，滩湖F1代公羔中测定的15只羊中有14个B+型，1个BB型，滩湖F1代母羔中测定的15只羊中有14个B+型，1个BB型，滩湖F2代公羔中测定的9只羊中有3个B+型，滩湖F2代母羔中测定的13只羊中有6个B+型，10只滩羊双胞胎公羔中有1个B+型。钟发刚[3]等以BMPR-IB基因作为多胎性能的候选基因，检测结果表明，多胎性状由多胎基因（FecB）控制，通过 （BMPR-IB）基因分子标记辅助选择，可加快育种工作进程。史洪才等[4]试验表明，BMPR-IB基因FecB突变显著影响了策勒黑羊的产羔数，是策勒黑羊多胎性能的主效基因之一。陈晓勇等[5]，王金文等[6]均在培育新品种过程中将FecB基因作为多胎候选基因应用到育种实践中，提高了育种群母羊产羔数。

附表 检测结果

近几年来，由于FecB突变能提高绵羊产羔数，通过检测绵羊是否携带高繁殖力主效基因 （FecB），可以加速绵羊的选育步伐。FecB基因标记技术应用到育种领域，将FecB基因通过分子标记选择技术导入到新培育品种 （系）。杂合型母羊不仅可以留作种用，而且可优先选配带多胎基因的公羊，这为加快育成滩羊多胎品系开辟了新途径。

[1]储明星.绵羊高繁殖力主效基因的研究及应用[J].农业生物技术学报,2008,16（1):1-9.

[2]Piper LR，BM Bindon.The Booroola Merino and the performance of medium non-Peppin crosses at Armidale[J].CSIRO，Melbourne，1982:9-19.

[3]钟发刚,王新华,李辉.绵羊BM PR-IB基因作为多胎性能的候选基因在肉用多胎品种 选育中的应用研究[J].中国草食动物，2005,25（4):6-7.

[4]史洪才,牛志刚,白杰,等.BMPR-IB基因突变对策勒黑羊产羔数的影响及其遗传规律的研究[J].中国畜牧杂志,2012,48（3):14-17.

[5]陈晓勇,敦伟涛,田树军,等.肉羊繁育关键技术研究示范及应用[J].黑龙江动物繁殖,2012,20（1):1-5.

[6]王金文,崔绪奎,王德芹,等.鲁西黑头肉羊多胎品系培育[J].中国草食动物,2011,31（1):13-17.