TGF-β1在食管鳞癌脑转移瘤中的表达及意义

王延朋 刘丽娜 尹先哲

河南南阳市第二人民医院肿瘤科 南阳 473000



TGF-β1在食管鳞癌脑转移瘤中的表达及意义

王延朋 刘丽娜 尹先哲

河南南阳市第二人民医院肿瘤科 南阳 473000

目的 检测转换生长因子β1蛋白(TGF-β1)在食管鳞癌脑转移瘤组织中的表达，探讨其在食管鳞癌脑转移中的作用。方法 选择食管鳞癌脑转移瘤组织，采用免疫组化检测TGF-β1的表达水平。结果 TGF-β1在食管鳞癌脑转移瘤组织中的阳性表达率比瘤旁组织和正常脑组织明显增高，提示TGF-β1的表达量在食管鳞癌脑转移的组织中明显增加。结论 TGF-β1的阳性表达率与食管癌细胞含量的多少有关，与临床病理特征无关。

食管鳞癌；TGF-β1；免疫组化；脑转移

转换生长因子β1蛋白(TGF-β1)于1983年被发现。几乎在所有细胞中均有TGF-β1异构体的表达，并与多种蛋白结合成复合体被分泌到细胞外基质。研究发现，TGF-β信号通路影响细胞增殖、分化、迁移、黏附、细胞凋亡，胚胎发育，甚至参与人类疾病，包括心血管、纤维化、生殖、受伤等疾病和癌[1]。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选择2006-01—2014-12南阳市第二人民医院神经外科经手术切除的12例食管鳞癌脑转移瘤手术标本，诊断均有病理检查支持，男8例，女4例；年龄61～72岁。所有患者术前均未放疗。病理诊断和分级按2011年中国抗癌协会食管癌专业委员会制定的食管癌规范化诊治指南标准确定：12例病例均为食管鳞癌Ⅳ级。另选取12例同期住院的经手术切除的正常脑组织的患者(正常脑组织组)，男7例，女5例；年龄23～47岁。标本切除离体后，病理科常规石蜡包埋切片。

1．2 方法

1．2．1 常规HE染色：脱蜡，按下面步骤依次进行：二甲苯15 min，二甲苯15 min；无水乙醇5 min，无水乙醇5 min，95%乙醇 5 min，95%乙醇 5 min，80%乙醇 5 min，水洗，苏木精染核 5 min，流水稍洗1～3 s，1%盐酸酒精分化，0.5%伊红液染色 5 min，水洗，80%乙醇5 min，95%乙醇5 min，95%乙醇5 min，无水乙醇 5 min，95%乙醇5 min，二甲苯5 min，二甲苯5 min，中性树胶封片。

1．2．2 免疫组织化学染色：首先将组织切片进行脱蜡、水化处理，抗原修复，封闭，置于PBS中10 min，一抗(兔IgG)4℃过夜，TBS漂洗10 min，二抗孵育10～30 min，PBS漂洗3次，3 min/次，DAB显色，蒸馏水漂洗，苏木素复染，脱水，透明，封片，显微镜下观察。

1．2．3 判定免疫组化的结果：组织切片在光学显微镜下进行观察，由本院两位病理科医师进行双盲阅片，每张切片随机取6个高倍视野(×400)。对视野内阳性细胞计数，表达阳性细胞的判断标准：①完全没有着色 0分，轻度淡黄色着色 1分，中度棕黄色着色 2分，3棕褐色着色 3分。判断阳性范围：0分<5%，1分5%～25%，2分26%～50%，3分51%～75%，4分>75%；最终判定结果为二者相加分数：阴性(-)<2分，弱阳性(+)2～3分，中度阳性(++)4～5分，强阳性(+++)6～7分。

1．3 统计学处理 采用SPSS 16.0软件进行数据分析。采用Wilcoxon秩检验比较配对设计的等级资料。

2 结果

2．1 TGF-β1表达的检测结果 根据免疫组织化学染色的结果显示，细胞染色定位于胞质内，呈棕黄色，弥漫状分布为TGF-β1表达阳性。食管鳞癌脑转移瘤组织中TGF-β1总阳性表达率和强阳性表达率分别为100.00%(12/12)、50.00%(6/12)；食管鳞癌脑转移瘤瘤旁组织为58.3.00%(7/12)、0；正常脑组织为 41.7%(5/12)、0。根据Wilcoxon秩检验结果看出食管鳞癌脑转移瘤、瘤旁组织及正常脑组织中TGF-β1的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 12例患者TGF-β1表达情况

注：与瘤旁组比较，*P<0.05；与正常组比较，#P<0.05

2．2 TGF-β1的表达与临床病理特征二者之间关系 不同肿的瘤转移部位、分化程度、肿瘤的体积、转移个数等对TGF-β1的表达显示无显著性差异(P>0.05)。

3 讨论

恶性肿瘤出现脑转移几率为 15%～40%，食管癌脑转移比较少见，仅为 1.4%～1.7%[1]。 我院 8 a间共收治食管癌脑转移患者 12 例，占同期食管癌患者的 2.03 %。国内外尚无大宗临床报道。肿瘤脑转移多出现在食管癌诊断后1 a内。食管癌脑转移的诊断主要依据病史、症状、体征以及影像学检查。患者多于发病前出现颅内压增高的表现和运动障碍，如头晕、头痛、恶心、呕吐及步态不稳等。CT或MRI检查显示单发或者多发的颅内占位性病变，且多伴明显的瘤周水肿，增强显示病灶被强化。最终诊断可经活检证实。在我国食管癌脑转移者多见于食管鳞癌患者，与我国食管鳞癌高发一致。食管癌脑转移患者男性居多，且发病年龄较大，中位年龄60岁。Wadhwa等[2]报道食管癌脑转移患者，临床分期较差。本组患者均为IV 期，与报道相符。

1983年人们发现了转换生长因子β1(TGF-β1)，现在经过大量研究人们发现TGF-β信号通路影响细胞增殖、分化、迁移、黏附、细胞凋亡，胚胎发育，甚至参与人类疾病，包括心血管、纤维化、生殖、受伤等疾病和癌[3]。几乎在所有细胞中都有TGF-β1异构体的表达，并与多种蛋白结合成复合体被分泌到细胞外基质。目前人们并不十分清楚TGF-β是如何激活下游信号通路，但我们知道TGF-β配体通过与细胞表面受体结合调节细胞生命过程[4]。TGF-β受体Ⅱ型(TGF-βRII)招募TGF-β受体I(TGF-βRI)，然后组装异二聚体受体复合体。TGF-βRII磷酸化TGF-βRI，然后依次磷酸化R-Smads(受体调控的Smads，包括Smad2 和 Smad3 蛋白)。磷酸化的Smad2和Smad3与Smad4形成一个复合体，然后转移至细胞核内，在细胞核内它们结合转录活化因子或转录抑制因子来调节目标基因的转录[5]。

本研究发现，在食管癌脑转移组织中TGF-β1表达量明显比癌旁和正常脑组织中增高，说明TGF-β1表达量与食管癌脑转移的发生有一定的相关性。且TGF-β1表达量的多少与组织中食管鳞癌细胞的含量有一定关系。进一步的研究一方面可以围绕食管鳞癌原发灶中TGF-β1表达量与脑转移的的关系展开，另一方面可以在食管癌细胞系中进行功能学研究，证实TGF-β1与食管癌细胞侵袭和转移的关系。

[1] Yoshida S．Brain metastasis in patients with esophageal carcinoma[J]．Surg Neurol，2007，67(3)：280-290．

[2] Wadhwa R，Taketa T，Correa AM，et al．Incidence of brain metastases after trimodality therapy in patients with esophageal or gastro-esophageal cancer：implications for screening and surveil-lance[J]．Oncology，2013，85(4)：204-207．

[3] Sakaki-Yumoto M，Katsuno Y，Derynck R．TGF-β family signaling in stem cells[J]．Biochim Biophys Acta，2013，1 830(2)：2 280-2 296．

[4] Elliott RL，Blobe GC．Role of transforming growth factor beta in human cancer[J]．J Clin Oncol，2005，23(9)：2 078-2 093．

[5] Feng XH，Derynck R．Specificity and versatility in TGF-β signaling through smads[J]．Annu Rev Cell Dev Biol，2005，21：659-693．

(收稿2015-11-25)

R735.1

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1673-5110(2016)21-0099-02