猪圆环病毒2型自然感染条件下的猪口蹄疫免疫效果调查

2016-11-28王克才王芳吴新华郭祉岐郑洪玲李晓楠吴运谱

现代畜牧兽医 2016年7期

王克才，王芳，吴新华，郭祉岐，郑洪玲，李晓楠，吴运谱

（1.辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁沈阳110164；2.辽宁辉山集团，辽宁沈阳110164；3.辽宁省朝阳市双塔区动物卫生监督所，辽宁朝阳122000；4.辽宁省辽阳市白塔区动物卫生监督管理中心，辽宁辽阳111000）

王克才1，王芳2，吴新华3，郭祉岐4，郑洪玲1，李晓楠1，吴运谱1

本研究对猪圆环病毒2型自然感染风险条件下的10窝98头仔猪随机分成口蹄疫常规和倍量2个免疫剂量组，另选5头成年母猪作为圆环感染阴性对照，仔猪于35日龄和65日龄进行猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫，并于首免前的28日龄、首免后21 d和二免后的29 d采血，5头成年母猪同期进行采血，分别进行PCV-2核酸、抗体和猪口蹄疫O型ELISA抗体检测。结果显示，成年母猪PCV-2核酸均为阴性，口蹄疫免疫抗体水平均达到≥1∶128；2组仔猪首免后21 d和二免后29 d检测存在不同比率的PCV-2核酸阳性和抗体阳性，猪口蹄疫抗体合格率分别为69%、97.5%和13.8%、25%，提示断奶仔猪可能因感染PCV-2而影响了猪口蹄疫免疫效果。

猪圆环病毒2型；自然感染；猪口蹄疫；免疫；效果

猪2型圆环病毒（Porci ne ci rcovi rus type 2，PCV-2）是现代养猪业十分重要的免疫抑制性病原之一。目前该病毒感染流行十分普遍，由PCV-2感染所引起的断奶仔猪多系统衰竭征（PM W S）和猪呼吸系统综合征（PRDC），对现代养猪业危害较大，而且由于猪在感染PCV-2后产生免疫抑制作用，可能导致对其他猪群疫病免疫造成负面影响，导致猪群疫病防控效果大打折扣，对养猪业健康发展构成了现实威胁。为探究田间状态下的PCV-2自然感染猪群接种猪口蹄疫灭活疫苗的免疫效果，并对指导和评价猪口蹄疫科学免疫提供参考依据，笔者开展了本次试验调查。

1 材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验猪选择具有PCV-2病史的某种猪场2013年6月2～5日出生的10窝105头仔猪群和5头成年母猪，作为备用调查群体。

1.1.2免疫用疫苗猪口蹄疫（O/GX/09-7株+O/XJ/ 10-11株）灭活疫苗，中牧实业有限公司生产，批号：1304003。

1.1.3主要检测试剂PCV-2抗体ELISA检测试剂盒，购自北京世纪元亨生物技术公司，批号：PCV-20130508E；PCV-2核酸荧光PCR检测试剂盒，购自达安基因生物技术公司，批号：2013001、2013002。口蹄疫O型液相阻断ELISA试剂盒，购自中国农业科学院兰州兽医研究所，批号：2013050901。

1.2试验方法

1.2.1试验猪处理选择该场同期分娩的10窝105头仔猪和5头成年母猪作为备用调查试验猪，仔猪28日龄前，死亡7头，其余98头随机分成常规剂量免疫组（58头）和倍量免疫组（40头）。为了便于区分，随机将实行常规剂量免疫的仔猪打上蓝色耳标，将实行倍量免疫的仔猪打上绿色耳标，5头成年母猪记录耳标号，调查试验猪群与场内同期未参加试验的其他仔猪同舍饲养，28日龄断奶。备选试验猪分组情况见表1。

1.2.2参试猪免疫及采样检测程序试验组仔猪达35日龄时，进行猪O型口蹄疫灭活疫苗初次免疫，1～6窝58头仔猪按疫苗说明书，每头仔猪颈部肌肉1 m L（1头份），7～10窝40头仔猪每头颈部肌肉2 m L（2头份），共免疫98头；达65日龄时，按初次免疫方法再进行1次加强免疫；5头成年母猪每隔4个月免疫1次（4 m L/头）并于产前45 d和15 d进行2次PCV-2灭活疫苗免疫。所有参试仔猪分别于28日龄、56日龄和94日龄采血分离血清（1 m L/头），5头母猪进行同期采血分离血清，送省动物疫病预防控制中心实验室分别进行PCV-2核酸检测、PCV-2抗体检测（间接ELISA）和猪O型口蹄疫抗体（液相阻断ELISA）检测。

1.2.3临床观测指标试验期间按该场常规要求实施生物安全及饲养管理措施，每日观察猪群精神状态、采食状况是否正常，生长发育状况是否良好，一旦发现临床发病猪，及时隔离、采样检测。28日龄断奶成活率及个体平均体重，1～3月龄期间发病及死亡数，3月龄时成活率及个体平均体重。

在以往的教学评价中，教学评价缺乏学生的参与，教师和教育主管部门通常是教学评价的主导，这样的评价结果对于学生而言是被动的。学生很难激发出自主学习的主人翁意识，也无法主动反思和调控自己的学习策略，认识自我。教师在评价中占主导地位就会导致学生不能深刻了解评价标准和学习进程，无法发现和分析学习中的具体问题，无法自己探明下一步的努力方向。此外，教师很难做到对每个学生精准地评价。

1.2.4实验室检测程序

1.2.4.1依据PCV-2荧光PCR试剂盒给出的检测方法，分别对采集的猪血清样品进行荧光PCR检测和结果判定。试验成立条件：阳性对照Ct值≤28，阴性对照Ct值应等于none。样品的荧光PCR扩增的Ct值≤35，判定为核酸阳性，否则，均判为阴性。

1.2.4.2依据PCV-2 ELISA抗体检测试剂盒给出的检测方法，分别对采集的猪血清样品进行ELISA抗

体检测和结果判定。试验成立条件：阴性对照平均O D值≤0.15，阳性对照平均O D值≥0.60。计算该次试验的临界O D值=阳性对照平均O D值×0.25，样品O D值≥临界O D值时，样品抗体判为阳性，否则，判为阴性。

表1 备选试验猪分组明细表Table1The list of Pre-selection pigs for testing

1.2.4.3依据猪O型口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒给出的检测方法，分别对采集的猪血清样品进行检测和结果判定。试验成立条件：病毒抗原对照平均O D492nm值在1.0～2.0范围内，阳性对照血清抗体效价在1:1024±1滴度，阴性对照血清抗体效价＜1:4，试验有效；临界值=病毒抗原对照平均O D492nm值×50%；根据临界值判定被检样品的抗体效价，抗体效价≥1:64，99%以上保护；效价≤1:4，不保护；效价在1:4～1:45之间，50%保护。

2 结果与分析

2.1临床观测结果

2.1.2断奶重试验猪断奶时98头称重总重量为727 kg，平均个体重为7.42 kg，死亡率为6.67%。

2.1.3断奶后至3月龄临床指标试验猪达3月龄时，称重总重量为4 021 kg，平均个体重为41.03 kg，临床观察有10头猪疑似感染PCV-2，采集血清样品进行PCV-2核酸检测，结果均为核酸阳性。主要临床监测项目及结果见表2。

表2 临床观察结果统计表Table2Statistical table of clinical observation results

2.2实验室检测结果

2.2.1试验猪28日龄断奶且进行猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫前检测结果2个免疫剂量组PCV-2病毒核酸阳性检出率分别为1.7%和2.5%，抗体阳性率分别为13.8%和12.5%，猪口蹄疫O型抗体效价≥1:64的比率均为100%；母猪的PCV-2病毒核酸阳性检出率为0，抗体阳性率为100%；猪口蹄疫O型抗体效价≥1:64的比率均为100%。检测结果统计详见表3。

2.2.2试验猪56日龄且进行猪口蹄疫O型灭活疫苗初次免疫后21 d检测结果2个免疫剂量组PCV-2病毒核酸阳性检出率分别为12.1%和10%，抗体阳性率分别为96.6%和95%；猪口蹄疫O型抗体效价≥1:64的比率分别为69%和97.5%。检测结果统计详见表3。

2.2.3试验猪94日龄且进行猪口蹄疫O型灭活疫苗二次免疫后29 d检测结果2个免疫剂量组PCV-2病毒核酸阳性检出率均为100%，抗体阳性率均为100%；猪口蹄疫O型抗体效价≥1:64的比率分别为13.8%和25%。检测结果统计详见表3。

2.3结果分析

2.3.1从成年母猪的检测结果来看，成年猪血液中均未检出PCV-2病毒核酸，说明猪在未受到PCV-2自然感染攻击条件下，检测猪口蹄疫免疫效果保持较高水平，也说明口蹄疫疫苗在免疫原性上是可信的。

2.3.2从仔猪28日龄临床观察和采样检测结果来看，①临床上表现为各种原因导致的死亡率为5.71%，在6头发病仔猪中检出1头PCV-2阳性病例，但猪群生长发育总体上相对稳定。②28日龄检测发现，断奶前PCV-2病毒核酸阳性检出率分别为1.7%和2.5%，同时PCV-2初免前7d抗体（母源抗体）阳性率分别为13.8%和12.5%，说明此时大多数仔猪将丧失母源抗体的保护，仔猪群进入PCV-2感染的风险期。③检测猪口蹄疫O型抗体效价≥1:64的比率二组均达到100%，说明被调查的仔猪群在生后4周时母源抗体水平仍维持在较高水平，也间接反映出该场母猪群的口蹄疫免疫水平很高。

2.3.3综合成年母猪的检测结果和仔猪首免后21 d检测结果来看，二组仔猪PCV-2病毒核酸阳性检出率分别为12.1%和10%，自然感染带毒检出率较低，在此时期检测猪口蹄疫O型抗体效价≥1:64的比率二组分别为69%和97.5%，经统计学卡方检验分析，差异极显著（P＜0.01），结合5头成年猪检测结果，说明在PCV-2自然感染带毒率较低时进行猪口蹄疫灭活疫苗免疫，其免疫效果基本未受到影响。

表3 实验室检测结果统计表Table3Statistical table of Laboratory testing results

2.3.4综合仔猪二免后29 d检测结果来看，正常情况下进行口蹄疫疫苗加强免疫后，免疫抗体合格率会较初免后明显提高，然而本次试验中仔猪94日龄检测PCV-2带毒率二组均为100%，同时临床上出现疑似病例，此时检测94日龄猪口蹄疫O型抗体效价≥1:64所占比率二组分别为13.8%和25%，效价在1: 4～1:45之间所占比率二组分别为86.2%和75%，经统计学卡方检验，差异均不显著（P＜0.05），说明二组猪口蹄疫免疫未达到预期效果，最大可能是受到PCV-2高自然感染率的影响。

3 讨论

PCV-2是现代养猪业倍受关注的免疫抑制性疫病。关于PCV-2感染后引起断奶仔猪多系统衰竭综合征、呼吸道病综合征等免疫抑制性综合征的文献报道颇多[1]。任静柏等[2]报道证实引起此类综合征的主要元凶是PCV-2与猪的其他疫病的混合或协同感染；王克才等[3]报道了猪圆环病毒2型存在病毒抗原与抗体在血液中可同时检出现象；史利军等[4]、司兴奎等[5]报道感染PCV-2后对猪的体液免疫和细胞免疫均产生不同程度的抑制作用；高世杰等[6]、吴在玉等[7]、吕六新等[8]、孙宝权等[9]分别报道了口蹄疫母源抗体保护水平的临界点为生后5～7周；王克才等[10]、于长泳等[11]分别报道了断奶仔猪PCV-2自然感染条件下，进行高致病性猪蓝耳病和猪瘟免疫的效果，其中，进行高致病性猪蓝耳病活疫苗免疫后26 d时，抗体合格率未达到国家规定的70%标准，免疫后64 d时，抗体合格率明显高于70%，进行猪瘟活疫苗首次免疫后32 d和二次免疫后39 d的免疫抗体合格率分别为43.4%和38.4%，均未达到国家规定的免疫合格率标准。本试验观察在PCV-2自然感染条件下对仔猪进行猪口蹄疫免疫，二次免疫即使增加免疫剂量，也不会明显提高口蹄疫免疫抗体水平，这与上述文献报道的关于PCV-2具有的免疫抑制作用报道的观点相近或一致。

4 小结

综合上述分析与讨论结果，断奶仔猪在PCV-2自然感染风险条件下进行猪口蹄疫免疫，其免疫效果会受到不同程度抑制或干扰。

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Investigation on immunity effective of Foot and Mouth disease under natural infection of Porcine circovirus type 2 virus

W ang Kecai1,W ang Fang2,W u Xi nhua3,Guo Zhi qi4, Zheng H ongl i ng1,Li Xi aonan1,W u Yunpu1
（1.Li aoni ng Provi nci al Center for Ani m al Di sease Control and Preventi on,Li aoni ngShenyang110164; 2.Li aoni ng H ui shan Dai ry H ol di ngs Co.,Ltd.,Li aoni ngShenyang110164; 3.Shuangta Di stri ct Center of ani m al heal th and producti on,Li aoni ngChaoyang122000; 4.Bai ta Di stri ct Center of ani m al heal th and producti on,Li aoni ngLi aoyang111000）

The 98 pi gl ets from ten l i tters under naturali nfecti ous ri sk condi ti on ofPorci ne ci rcovi rus type 2(PCV2)w ere random l y di vi ded i nto tw o groups,and then i nocul ated i nacti vated vacci ne agai nst sw i ne Foot and M outh di sease(FM D)type O by one dose and tw o doses,respecti vel y.Another fi ve adul t sow s w ere used as negati ve controlgroup.Al lPi gl ets i m m uni zed of the i nacti vated vacci ne agai nst sw i ne FM D type O i n 35,65 days,respecti vel y.Bl ood w as col l ected from al lof the pi gs at 3 ti m e poi nts:28 days before the fi rst vacci nati on,21 days after the fi rst vacci nati on and 29 days after the booster vacci nati on.The testes for detecti ng ELISA anti body of sw i ne FM D O type,vi ral nucl ei c aci d and anti body of PCV2 w ere perform ed.The resul t of the bl ood sam pl es of the adul t sow s for detecti ng vi ralnucl ei c aci d of PCV2 i s negati ve,the ELISA antibody of sw i ne FM D type O of them al labove 1:128.The di fferent posi ti ve rates of vi ralnucl ei caci d and anti body of PCV2 of the sam pl es col l ected fromone dose and tw o doses groups,the qual ifi cati on rate of ELISA anti body of sw i ne FM D type O at the 21 days after the fi rst vacci nati on i s 69%and 97.5%,how ever,the rate at 29 days after the booster vacci nati on i s 13.8%and 25%,respecti vel y.The Resul ts show ed thatthe i m m uni ty effecti ve ofthe i nacti vated vacci ne agai nst sw i ne FM D type O i n the w eaned pi gl ets m ay depressed by i n the i nfecti on of PCV2 i n natural i nfecti on.

Porci ne ci rcovi rus type 2 vi rus;Foot and m outh di sease of type O;Investi gati on; Im m uni ty;N atural i nfecti on

S858.28

1672-9692(2016)07-0040-06

2016-05-19

王克才（1965-），男，汉族，专科，高级兽医师，主要从事动物疫病防控等工作。