新疆北疆部分地区鸡球虫病病原调查及分类鉴定

王开胜，刘继荣

(1.石河子大学，新疆石河子 832003；2.石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003)



新疆北疆部分地区鸡球虫病病原调查及分类鉴定

王开胜1,2，刘继荣2

(1.石河子大学，新疆石河子 832003；2.石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003)

【目的】调查新疆北疆部分地区鸡球虫病病原分布情况，明确近年来新疆北疆地区鸡球虫病的致病种类情况。【方法】采用定点采样法，从沙湾、石河子、玛纳斯和昌吉等地采集病死禽的肠道直接进行粪便处理和病原学检查，收集新鲜粪样进行鸡球虫卵卵囊分离，进行孢子化卵囊培养和形态学观察，对鸡球虫进行虫种鉴定。【结果】鸡球虫的感染率为100%，共检出6种艾美耳球虫，分别为柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、巨型艾美耳球虫(E.maxima)、堆型艾美耳球虫(E.acervulina)、和缓艾美耳球虫(E.mitis)、哈氏艾美耳球虫(E.hagani)、布氏艾美耳球虫(E.Brunetti)。其中柔嫩艾美尔球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫为新疆北疆地区鸡球虫病病原的优势虫种。【结论】研究对新疆部分北疆地区的鸡球虫原分布及其构成进行了初步确定，了解其病原水平，从而为该病防治中抗球虫药物的选择及代化用药方案提供必要数据，今后北疆地区预防和控制该病提供依据。

鸡球虫；形态学观察；分类鉴定；优势虫种

0 引 言

【研究意义】鸡球虫病是严重危害养禽业的重要寄生虫病之一，其主要由艾美耳属的一种或几种鸡球虫寄生于鸡的肠道而引起的寄生性原虫病。该病分布很广, 世界各地均有发生, 在我国发生也很普遍，对家禽养殖业危害严重，造成了重大的经济损失[1]。目前，在药物防治和免疫预防方面取得了重要突破和研究进展，但由于各种流行因素的存在而致使该病仍然频频爆发[2]。新疆北疆地区鸡球虫病每年均有不同程度的发生，且感染该病原的家禽发病率和死亡率均较高，然而不同鸡球虫种类的致病性存在较大差异。同时，其病原种类常以混合感染致病为主要形式，因此，在治疗和免疫预防方面均要根据当地鸡球虫流行特点制定相应方案，采取相应措施。【前人研究进展】目前，国内的研究主要集中于鸡球虫的分子生物学、免疫学和药物治疗[3-5]，而关于其病原调查的报道较少。关于新疆地区鸡球虫病病原调查的鲜有报道[6-7]，北疆地区仅见段晓琴[6](2003)对昌吉地区鸡球虫流行病学调查的报道。【本研究切入点】近年来，随着新疆北疆地区养鸡业的快速发展，有必要对该地区鸡球虫种类和感染情况进行摸底调查。【拟解决的关键问题】研究通对采集不同地区表现鸡球虫病临床症状的鸡病料，收集、培养卵囊，对其进行卵囊和孢子化卵囊的形态学观察，鉴定该病的病原种类，明确新疆北疆部分地区鸡球虫病病原分布情况，旨在为今后北疆地区预防和控制该病提供依据。

1 材料与方法

1.1 材 料

2013年，选取新疆北疆地区的沙湾、石河子、玛纳斯和昌吉的15家养鸡场和兽医站，其中沙湾县2家种鸡场、2家个体养鸡场，石河子地区3个兽医站、3家个体养鸡场，玛纳斯县3家个体养鸡场，昌吉市2家个体养鸡场。收集确诊为鸡球虫病或疑似球虫病的病鸡，从盲肠或小肠中采集病料，收集其粪样，带回实验室进行虫卵分离和培养。

主要仪器设备：恒温箱、低温冰箱、微量可调加样器、显微镜、多媒体显微摄像仪 、烧杯、纱网等。主要试剂：饱和食盐水、2.5%重铬酸钾溶液等。

1.2 方 法

1.2.1 样品的采集

对调查点发生鸡球虫病后进行检样采集，每个点采集30份新鲜肠内容物和粪便，将每份病料进行分装、标号，共计450份样品，送实验室进行病原学检查和虫种鉴定。表1

表1 各地采集的样品信息
Table 1 The information of samples collected form different areas

地区Area场址Site发病日龄(d)Ageofonset品种Breed鸡群规模Thecrowdsize沙湾Shawan金沟河镇40海蓝褐蛋鸡2100安集海镇30黄羽肉鸡1900石河子Shihezi北泉镇32黄羽肉鸡1300乌兰乌苏镇28芦花鸡800石河子总场32黄羽肉鸡2000148团兽医站17清远麻鸡养殖户零星送检第八师兽医站19白羽肉鸡(科宝)养殖户零星送检玛纳斯Manas玛纳斯县22黄羽肉鸡1000凉州户镇29黄羽肉鸡800包家店镇26清远麻鸡500昌吉Changji园艺场22白羽肉鸡(罗斯308)1500滨湖乡25白羽肉鸡(科宝)1000三工乡62海蓝褐蛋鸡800

1.2.2 卵囊检测、计数、纯化与收集

(1)检测：取各检样肠内容物适量，放于容器内，加适量饱和盐水加水搅匀，过滤后倒入青霉素小瓶，盖上盖玻片，静置0.5 h后，镜检是否有鸡球虫卵囊存在。

(2)计数：取2 g粪便捣碎，放入装有玻璃珠的小瓶内，加入饱和盐水58 mL充分震荡混合，通过粪便筛过滤后。将滤液边摇晃边用吸管吸取少量，加入计数室内，放于显微镜载物台上，静置3 min后，用显微镜将2个计数室内见到的卵囊全部计数，取平均值乘以200，即为每克粪便中的卵囊数(EPG)。

(3)纯化与收集：取滤液分装至离心管中，置于离心机中离心(2 500 h/min，10 min)。弃去上清液，向沉淀物中加饱和盐水至离心管1/2处进行离心漂浮(2 500 h/min，10 min)。吸取上层液，加2倍蒸馏水混匀，离心。连续2～3次洗去饱和盐水，收集卵囊。

1.2.3 初步鉴定

用吸管吸取卵囊进行镜检，观察卵囊的形状、颜色，测量卵囊的大小，并进行显微照相。根据卵囊的形态、大小、颜色，参照图谱和有关文献资料进行初步的虫种鉴定。

1.2.4 卵囊的培养与鉴定[8-9]

将收集到的的卵囊放入盛有重铬酸钾的培养皿中，混匀，置温箱中培养(26～28 ℃)，每1～2 h观察1次，吸出少许进行镜检, 确定卵囊的发育进程, 数码显微照相, 计量单位为微米(μm)。每次观察不少于100个卵囊, 观测的内容包括卵囊的形态、大小、颜色、内部构造、卵膜孔的宽度、孢子囊的形态及孢子化时间，每种卵囊测量约30个。至卵囊孢子化后记录时间，并根据大小、形态、颜色、孢子化时间进行进一步的虫种鉴定。

2 结果与分析

2.1 卵囊计数

此次调查发现各地鸡球虫卵囊数量为467～3 200个/g粪便，且均为混合感染，感染率为100%。

2.2 虫种培养和形态学观察

对采集样品中鸡球虫进行培养和虫种鉴定，结果表明，按寄生部位，柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、哈氏艾美耳球虫寄生部位单一，分别寄生于盲肠、小肠、小肠前段、小肠前段，而堆型艾美耳球虫同时寄生于十二指肠、小肠前段，布氏艾美耳球虫同时寄生于小肠下段、盲肠；卵囊大小，以巨型艾美耳球虫卵囊最大，为23.90 μm×30.76 μm，和缓艾美耳球虫卵囊最小，为15.34 μm×14.3 μm；按颜色，以巨型艾美耳球虫最深，为黄褐色，其它虫种颜色较淡或无色；形成子孢子的时间，以巨型艾美耳球虫最长，为48 h，堆型艾美耳球虫最短，为19.5～24.0 h；孢子囊大小，以布氏艾美耳球虫最大，为25.09 μm×20.2 μm，和缓艾美耳球虫最小，为8.72 μm×5.0 μm；卵囊出现所需的时间，以柔嫩艾美耳球虫最长，为7 d，堆型艾美耳球虫最短，为4 d。表2

表2 虫种培养及其形态学
Table 2 The results of the species' development and their morphological observation

虫种Species寄生部位Parasiticsite卵囊大小Oocystsize(μm)卵囊形态Oocystsfigure形成子孢子时间Theoocystssporulatedtime(h)孢子囊大小Sporangium(μm)卵囊出现所需时间Thetimeneededforoocystappear(d)柔嫩艾美耳球虫Etenella盲肠(250～200)×(200～150)，平均2262×1805卵圆，囊壁淡绿、原生质淡褐195～305(1275～75)×(675～50)，平均623×11477巨型艾美耳球虫Emaxima小肠(400～2175)×(330～175)，平均2390×3076卵圆，黄褐480(175～1175)×(75～575)，平均156×706堆型艾美耳球虫Eacervulina十二指肠、小肠前段(225～150)×(1675～125)，平均188×145卵圆，无色195～240(105～75)×(50～45)，平均97×504和缓艾美耳球虫Emitis小肠前段(195～1275)×(170～125)，平均1534×143近于圆形，无色235～260(100～70)×50，平均872×505哈氏艾美耳球虫Ehagani小肠前段(200～155)×(185～145)，平均1768×1578宽卵圆，无色195～385105×506布氏艾美耳球虫EBrunetti小肠下段、盲肠(303～207)×(242～181)，平均268×217卵圆，淡黄210～480(2175～295)×(16～235)，平均2509×2025

2.3 显微镜下鸡球虫的卵囊的形态学变化

显微镜下鸡球虫卵囊孢子化前后的形态学变化为：(1)柔嫩艾美耳球虫的卵囊呈卵圆形，卵囊淡绿、原生质淡褐色。未见卵膜孔和极帽，卵囊内有1个折光性强的极粒，无卵囊残体。孢子囊呈卵圆形，有1个斯氏体，无内外残体(图1A)；(2)巨型艾美耳球虫的卵囊呈卵圆形，卵囊黄褐色。无卵膜孔，有极粒。孢子囊呈圆形，无内、外残体，有斯氏体(图1B)；(3)堆型艾美耳球虫的卵囊呈长卵圆形，无色。无卵膜孔，有极粒。孢子囊呈卵圆形，无内、外残体，有斯氏体(图1C)；(4)和缓艾美耳球虫的卵囊近于圆形，无色。无卵膜孔，无残体。卵囊内有一圆形的极粒，孢子囊内有1个斯氏体，无内外残体(图1D)；(5)哈氏艾美耳球虫的卵囊呈宽卵圆形，无色。无卵膜孔和卵囊残体, 囊内有1个极粒(图1E)；(6)布氏艾美耳球虫的卵囊呈卵圆形，淡黄色，无卵膜孔和卵囊残体，囊内有1～2个极粒(图1F)。图1

图 1 6种鸡艾美耳球虫孢子化前后卵囊的形态特征
Fig. 1 Representative oocysts sporulated before and after of 6 species of Eimeria from chicken

2.4 新疆北疆地区鸡球虫种类

实验共检出6种艾美耳球虫，分别为柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、巨型艾美耳球虫(E.maxima)、堆型艾美耳球虫(E.acervulina)、和缓艾美耳球虫(E.mitis)、哈氏艾美耳球虫(E.hagani)和布氏艾美耳球虫(E.Brunetti)。其中在沙湾、石河子、玛纳斯，柔嫩艾美尔球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫所占比例均≥19.1%，因此，这3个虫种为这3个地方的优势虫种；在昌吉，柔嫩艾美尔球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫所占比例均≥20%，为昌吉的优势虫种。因此，柔嫩艾美尔球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫新疆北疆地区鸡球虫病病原的优势虫种。表3

表3 新疆北疆地区鸡球虫种类
Table 3 Investigation results of chicken coccidial species

球虫种类Coccidialspecies各虫种所占比例Infectionrate(%)沙湾石河子玛纳斯昌吉柔嫩艾美耳球虫Etenella236250219342巨型艾美耳球虫Emaxima215225275200堆型艾美耳球虫Eacervulina19121420211和缓艾美耳球虫Emitis17317814236哈氏艾美耳球虫Ehagani101826611布氏艾美耳球虫EBrunetti8451100卵囊数EPG2315257810892440

3 讨 论

研究参照了McDougald等[8](1997)的方法，对沙湾、石河子、玛纳和昌吉等新疆北疆部分地区的15个鸡场和兽医站进行了球虫病病原分类与鉴定。根据卵囊形态、大小、最短潜在期，寄生部位、卵囊孢子化时间、病变等具有鉴别意义的特征做综合鉴定。有的种可以根据卵囊形态即可鉴定，如巨型艾美尔球虫，有的种除根据卵囊形态外，还要根据最短潜在期来判断，例如早熟艾美尔球虫和和缓艾美尔球虫。其他的种必须结合寄生部位，典型的病变特征和内生性发育等特征才能鉴定。若卵囊太少，可以通过感染无球虫鸡增殖，再有针对性地鉴定可疑种类。

目前，全世界公认的鸡艾美耳球虫有9种，在我国均存在[2]。在新疆，除了变位艾美耳球虫(E.mivati)，其它种均存在，即柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、布氏艾美耳球虫、哈氏艾美耳球虫、毒害艾美尔球虫(E.necatrix)和早熟艾美耳球虫(E.praecox)。此次共鉴别出6种艾美耳球虫，未见毒害艾美尔球虫和早熟艾美耳球虫，这与段晓琴等[6](2006)的调查有一定差异，其调查发现了5种艾美尔球虫，其中，未发现布氏艾美耳球虫、毒害艾美尔球虫(E.necatrix)，而发现了早熟艾美尔球虫(E.praecox)。造成此差异的原因可能是：(1)该地区这2种类型鸡球虫病不存在或很少发生，因而未检测出；(2)早熟艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫球虫与和缓艾美耳球虫、哈氏艾美耳球虫卵囊大小很接近，测量卵囊大小时存在一定的误差，因此分类时不够精确；(3)病料的采集季节和时间以及被采样鸡群的预防和球虫病的治疗情况均可能对虫种的检出造成一定影响。此次调查显示，整体上柔嫩艾美尔球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫为新疆北疆地区鸡球虫病病原的优势虫种，但同时表现为不同地区所占比例最大虫种也有所不同。

经过调查发现，影响鸡球虫感染的因素很多，包括养鸡规模、饲养密度、饲养方式及卫生条件等。鸡球虫病的发病主要受温度、湿度的影响，如新疆北疆地区鸡球虫病主要集中在3～7月，在此期间气温逐渐升高，多雨湿润，有利于鸡球虫的生长发育。建议各养殖场在此期间应加强卫生管理措施，做好鸡球虫病的预防工作。

4 结 论

北疆地区鸡球虫的感染率为100%，采用传统的形态学分类方法，共检出6种艾美耳球虫，并确定了柔嫩艾美尔球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫为该地区鸡球虫病病原的优势虫种。传统的形态学分类方法仍然是目前鸡球虫病病原分类与鉴定的重要手段。

研究的调查和鉴定结果可为今后新疆北疆地区预防和控制该病提供依据。根据该地区鸡球虫病原构成及其病原水平，进行选择使用抗球虫药；同时及时了解和评价抗球虫药对不同种类的鸡球虫病的防治效果，进而优化用抗球虫药方案。

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Fund project:Supported by NSFC (31060339)

Investigation, Classification and Identification of Coccidial Species in Chickens in Northern Xinjiang

WANG Kai-sheng1,2, LIU Ji-rong2

(1. Shihezi University, Shihezi Xinjiang 832003, China; 2. College of Animal and Science Technology, Shihezi University, Shihezi Xinjiang 832000, China)

【Objective】 The situation of chicken coccidiosis pathogen distribution in Northern Xinjiang was investigated in order to clarify the types of chicken coccidiosis in recent years.【Method】The fixed-point sampling method was adopted to collect the deaths of chickens from Shihezi, Manasi, Shawan and Changji, and the pathology examination of the chicken intestines was done in this experiment. To separate oocysts from the freshly collected fecal samples, sporulated oocysts were cultured and morphological observation was carried out to identify species of chicken coccidiosis.【Result】Chicken coccidia infection rate was 100%, and altogether, there were 6 species of Eimeria,E.tenella,E.maxima,E.acervulina,E.mitis,E.hagani,E.brunetti. TheE.tenella,E.maximaandE.acervulinawere the dominant species in Nortern Xinjiang chicken coccidiosis pathogen. 【Conclusion】The study preliminarily determined the distribution and costitution of the coccidiosis pathogen,and the pathogen level were made clear in morth of Xinjiang .Yhe choice of the anticoccidia drugs and the optimal medication plans shouid offered the necessary data of the study to cure the disease.And the credible identifiable ground was provided to prevent and control the disease in the area.

chicken coccidian; morphological observation; classification and identification; dominant species

10.6048/j.issn.1001-4330.2016.05.023

2015-05-11

国家自然科学基金项目(31060339)

王开胜(1974-)，男，安徽人，博士研究生，研究方向为动物寄生虫学，(E-mail)wkskjc@shzu.edu.cn

刘继荣(1952-)，男，教授，研究方向为动物寄生虫学

S858.31

A

1001-4330(2016)05-0955-06