红豆杉组织培养基筛选试验

2016-11-25宋金萍

农业科技与装备 2016年7期

宋金萍

摘要：以曼地亚红豆杉为试验材料，切取不同植株嫩芽进行红豆杉植株培养试验，确定最佳培养基配方及抑制褐化成分。试验结果表明：最适培养基的配方为1/2MS+KT 1.0 mg/L+IBA 0.1 mgL，添加琼脂粉6.0 g、蔗糖30 g、活性炭粉0.3 g、抗氧化VC 0.3 g；最佳抗氧化试剂成份为VC 0.3 g、活性炭0.3 g。

关键词：培养基；曼地亚红豆杉；褐化；抗氧化试剂

中图分类号：S791.49 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2016）07-0011-02

红豆杉是常绿乔木，小枝秋天变成黄绿色或淡红褐色，叶条形，雌雄异株，种子扁卵圆形。种子用来榨油，也可入药。红豆杉的药用价值主要为其提取物—次生代谢衍生物—紫杉醇。紫杉醇最早是从短叶红豆杉种皮中分离出来的抗肿瘤活性成分，是治疗转移性卵巢癌和乳腺癌的最好药物之一，且对肺癌、食道癌有显著疗效，同时对肾炎及细小病毒有抑制作用。

因为红豆杉树皮有抗癌物质——紫杉醇，所以有许多人进林中剥树皮，使得红豆杉的数量急剧下降。为此，以曼地亚红豆杉为试验材料，切取不同植株的嫩芽进行植株培养，探讨其对不同培养基的适应情况，筛选出最适培养基。

1 材料与方法

1.1 材料处理

采用盘锦博亚惠农科技有限公司18 曼地亚红豆杉母株作为组培试验材料。取嫩枝上的嫩芽作为组培材料，用洗衣粉洗净芽上残留物后，再用自来水冲洗30 min后拿出，用0.1%升汞浸泡10 min，75%酒精浸泡30 s。然后用无菌水冲洗4次，使外植体变成无菌植株，接入灭菌培养基中，在23 ℃下培养。要求光照强度2 500 lux。

1.2 初代培养基选配

选择1/2MS培养基，对不同浓度的细胞分裂素与生长素进行对比试验。采用细胞分裂素6-BA，KT，TDZ，ZT，以及生长素NAA，IBA做不同浓度对比试验。试验数据显示：1/2 MS+6-BA 0.10 mg/L+IBA 0.05 mg/L为最适宜的诱导培养基。

1.3 试验方法

1.3.1 培养基筛选不同浓度的细胞分裂素类激素与生长素互相配合，有利于选出适宜的增殖培养基与生根培养基。增殖培养基和生根培养基不同激素对比试验设计见表1，其中1—4号为增殖培养基，5—6号为生根培养基。

将红豆杉小芽分别接种到编号为1，2，3，4的培养基中，置于培养室进行恒温增殖培养。小芽对光有一定需求，因此将光照强度由原来的2 000 lux增加到2 500 lux。瓶苗1.5～2.0个月重新继代一次。

生根小苗在培养室培养1.5个月长出新根后，移到日光温室进行驯化培养。在3～4 d后打开瓶盖，将小苗移栽到配比好的基质上，判断其在各基质上的生长情况，筛选适于生长的基质。基质共有3种：1为草炭1份+珍珠岩0.5份+壤土2份；2为草炭1份+蛭石0.5份+壤土2份；3为草炭1份+蛭石0.5份+壤土2份+珍珠岩0.5份。

1.3.2 抑制褐化浓度选择杉属植物在进行组织培养时，常发生褐化现象。因此在培养基中添加不同的抗褐化试剂，利于红豆杉增殖、继代与生根培养。主要添加的褐变抑制剂有抗氧化剂Vc、ppo抑制剂、PV、硫脲、二氨基二硫代甲酸钠等。可溶性聚乙烯吡咯烷酮（pvp）是酚类物质的专一性吸附剂。

活性碳是抑制褐化最好的吸附剂，吸附褐化物质时也吸附细胞分裂素和生长素。配制培养基时，若培养基里有活性炭成分，应适当增加细胞分裂素和生长素的浓度。

1 L培养基中添加的抗褐化试剂量见表2。

2 结果与分析

2.1 最适增殖培养基

增殖培养结果表明：在培养基1和4中，红豆杉小苗长势比较好，生长比较旺盛。红豆杉小苗在培养基2表现为愈伤长势比较旺盛，诱导丛生小苗比较困难，但愈伤上有小苗长出，长势不太好，不利于生根。红豆杉小苗在培养基3表现为有愈伤，随着培养时间延长愈伤慢慢枯死，最后导致小苗萎蔫死亡。

根据试验结果可知，培养基1和4适宜进行红豆杉增殖培养。

2.2 最适生根培养基

生根对比试验中，20%>5号生根率>50%，30%>6号生根率>70%，5号比6号生根数量少。

2.3 最适基质

生长情况表明，基质3的栽植成活率最高，达到90%以上。

2.4 抑制褐化浓度