卵母细胞培养时间对单精子胞浆内注射胚胎质量及妊娠结局的影响分析

曹森杨，李采霞，王杜娟，温开群，毕 红

（盐城市妇幼保健院，江苏 盐城 224002）

卵母细胞培养时间对单精子胞浆内注射胚胎质量及妊娠结局的影响分析

曹森杨，李采霞，王杜娟，温开群，毕 红

（盐城市妇幼保健院，江苏 盐城 224002）

目的 分析探讨卵母细胞培养时间对单精子胞浆内注射胚胎质量及妊娠结局的影响，探寻最佳单精子胞浆内注射时机。方法 选取2012年1月～2015年12月我院收治的接受单精子胞浆内注射治疗的患者63例为研究对象，根据取卵结束到开始进行单精子胞浆内注射将患者分为两组，Ⅰ组30例为2～3 h内注射，Ⅱ组33例为4～5 h内注射，对比观察两组胚胎质量及妊娠结局。结果 Ⅱ组患者卵母细胞核成熟率90.4%、胚胎植入率24.7%、妊娠率42.4%均显著高于Ⅰ组卵母细胞核成熟率80.7%%、胚胎植入率12.1%、妊娠率23.3%，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 卵母细胞体外培养4～5 h然后进行单精子胞浆内注射治疗，可获得理想的胚胎质量与临床结局。

卵母细胞；单精子胞浆内注射；培养时间；胚胎质量；妊娠结局

单精子胞浆内注射被广泛地应用到辅助生殖领域中，是男性不育的一种重要方法。当获得卵母细胞后何时进行单精子胞浆内注射并无统一的标准[1]，基于此，本研究分析探讨了卵母细胞培养时间对单精子胞浆内注射胚胎质量及妊娠结局的影响，探寻最佳单精子胞浆内注射时机。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年1月～2015年12月我院收治的接受单精子胞浆内注射治疗的患者63例为研究对象，纳入标准：单纯因男方因素实施单精子胞浆内注射，年龄均在35岁以下，基础内分泌无异常，根据取卵结束到开始进行单精子胞浆内注射将患者分为两组，Ⅰ组为2～2 h内注射（30例），Ⅱ组为4～5 h内注射（33例）。Ⅰ组平均年龄（30.5±3.3）岁，平均获卵数为（9.5±3.8）个，平均移植胚胎数（2.2±0.5）个；Ⅱ组平均年龄（30.3±3.8）岁，平均获卵数为（9.5±4.2）个，平均移植胚胎数（2.2±0.4）个；两组患者年龄、平均获卵数、移植胚胎数，差异均无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 超促排卵

使用达必佳（促性腺激素释放激素的类似物）进行垂体降调节，实施果纳芬（注射用重组人促卵泡激素）促排卵，并根据患者情况给予hMG（人绝经期促性腺激素），采用B超检测患者情况结合血清E2水平对药物的用量进行调节，在目标卵泡直径达到18～20 mm时给予5000～10000 IU hCG（人绒毛膜促性腺激素）肌肉注射，于34～36 h后取卵（取卵当天视为0 d）。将获得的卵冠丘复合体移植到G-IVF（受精）培养基进行体外培养，培养时间为2～5 h。

1.2.2 单精子胞浆内注射

取卵后2 h～5 h将冠丘复合体置于80 IU/mL透明质酸酶清洗，除去颗粒细胞，然后将卵母细胞转移到新鲜G-MOPS（操作培养基）微滴中，然后根据标准方法[2]进行单精子胞浆内注射，完成单精子胞浆内注射后讲卵母细胞转移到G1（卵裂）培养基中，培养到第3 d。

1.2.3 胚胎培养

胚胎体外培养采用G5系列，第0 d脱颗粒、单精子胞浆内注射采用G-MOPS培养基，0 d胚胎培养采用G-IVF培养基，1～3 d胚胎培养采用G1培养基，胚胎移植采用G1培养基。培养温度为37℃，6%CO2与5%O2。各种培养基中均添加10%人血清替代蛋白，覆盖石蜡油，置于培养箱提前平衡过夜。

1.2.4 胚胎评估、移植及妊娠确认

在受精后16～18 h（第1 d），按照Scott原核评分对卵母细胞受精情况进行评估，此次研究中的所有胚胎均来源于正常受精卵。于第3 d按照Veeck胚胎评分标准评估胚胎卵裂球数、形态与碎片化比例，达到胚胎卵裂球数6个及以上，形态基本对称具有折光性；胚胎碎片比例在10%以下则为优质胚胎。在第3 d，将2～3枚胚胎连同G1培养基10～15 μL一起移植到导管中，然后移入患者子宫。所有患者从取卵当天开始给予黄体酮支持，于移植后第14 d进行血hCG检查，对阳性结果者于移植后28 d行B超监测孕囊，以确定是否临床妊娠。

1.3 统计学方法

运用SPSS 19.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以“±s”表示，采用t检验，计数资料以百分数（%）表示，采用x2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 卵母细胞体外培养时间对单精子胞浆内注射胚胎质量的影响

Ⅰ组、Ⅱ组患者卵母细胞核成熟率分别为80.7%，90.4%，Ⅱ组患者卵母细胞核成熟率显著高于Ⅰ组，差异有统计学意义（x2=10.86，P＜0.05）；两组间受精率、卵裂率与优质胚胎率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 卵母细胞体外培养时间对单精子胞浆内注射胚胎质量的影响 [n（%）]

2.2 三组患者胚胎植入率与妊娠结局比较

Ⅱ组胚胎植入率显著高于Ⅰ组，差异有统计学意义（x2=4.92，P＜0.05）；Ⅱ组妊娠率显著高于Ⅰ组，差异有统计学意义（x2=4.78，P＜0.05）。见表2。

表2 三组患者胚胎植入率与妊娠结局比较 [n（%）]

3 讨 论

人卵母细胞经核成熟、胞质成熟才能够完成受精与胚胎发育。临床上辅助生殖治疗促排卵药物使用目的是改变卵泡幕集模式，取卵泡后将获得不同程度的卵母细胞，其细胞核、细胞质成熟度可能存在差异[3]。当前，针对卵母细胞体外培养时间对单精子胞浆内注射治疗结局的影响有不同的报道，相关研究指出，通过卵母细胞体外培养可对单精子胞浆内注射受精率、胚胎质量、妊娠结局起到改善作用[4]，也有研究指出卵母细胞体外培养时间并不会影响胚胎质量与妊娠结局[5]。

本次研究结果显示，Ⅰ组、Ⅱ组患者卵母细胞核成熟率分别为80.7%，90.4%，Ⅱ组患者卵母细胞核成熟率显著高于Ⅰ组，由于卵母细胞体外培养细胞质迟于细胞核成熟，这可能是造成Ⅰ组患者植入率、妊娠率下降的原因。两组间受精率、卵裂率与优质胚胎率比较无显著性差异，而Ⅰ组患者植入率、妊娠率显著更低，这预示着卵母细胞体外培养时间对单精子胞浆内注射治疗的影响，并非在胚胎发育早期阶段产生显著作用，而是在囊胚形成、胚胎植入（后期阶段）发挥显著的作用[5]。结果提示，卵母细胞需要体外培养4 h然后进行单精子胞浆内注射治疗，可获得理想的胚胎质量与临床结局，且4～5 h可维持较为理想的水平。

[1] 顾亦凡,陆长富,龚 斐,等.卵母细胞体外培养时间对单精子胞浆内注射临床结局的影响[J].中国现代医学杂志,2010,20(22): 3364-3367.

[2] 乜照燕,吴海峰,张 娜,等.卵母细胞培养时间对单精子胞浆内注射胚胎质量及妊娠结局影响[J].中国男科学杂志,2015(1):28-31.

[3] 粱 琳,陈秀娟.观察体外受精中卵泡液的抗氧化能力及其对卵母细胞质量和胚胎发育的影响[J].生殖医学杂志,2015,24(7):532-537.

[4] 张 巍,周 玮,赵军招,等.自然周期未成熟卵体外培养卵母细胞成熟率与临床结局的关系[J].浙江医学,2012(17):1420-1423.

[5] 鹿 群,陈 曦,沈 浣,等.卵母细胞激活技术在卵细胞质内单精子注射受精失败或低下患者中的应用[J].中国妇产科临床杂志,2014(2):109-113.

本文编辑：鲁守琴

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ISSN.2095-8803.2016.13.084.02