猪高致病性和普通蓝耳病病毒混感的实验室诊断报告

2016-11-24张迪李超倪宏波

畜牧兽医科技信息 2016年11期

关键词：病料耳病致病性

张迪，李超，倪宏波*

（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆　163319）

猪高致病性和普通蓝耳病病毒混感的实验室诊断报告

张迪，李超，倪宏波*

（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆163319）

黑龙江省大庆市某猪场连续3头母猪出现初生仔猪流产、死胎和木乃伊胎，伴有皮下出血、淤血等临床特征，采用PCR方法对送检胎儿采集的样品进行病原检测，结果显示：送检胎儿发生了猪高致病性和普通蓝耳病病毒混合感染。

猪；高致病性蓝耳病；普通蓝耳病；混合感染；诊断

猪蓝耳病又称猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS），是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起猪的一种高度传染性疾病，病猪和带毒猪是本病的主要传染源，主要经消化道传播，仔猪和育肥猪是PRRSV的主要贮存宿主。随着养殖业的不断发展，我国的养猪业发生了很大的变化并具一定规模，大部分猪病由原来的单一病原转变为多因子协同作用。OIE将猪繁殖与呼吸综合征列为B类动物传染病。该病最早于1987年在美国中西部发现，我国台湾省1991年出现此病，日本1994年暴发PRRS。PRRSV只感染猪，分为两个型，即美洲型和欧洲型，具有变异性，欧洲和美洲分离毒株之间存在显著的抗原差异性，有很少的交叉反应。我国大陆在1995年首次发生，现称为普通蓝耳病，我国的PRRS分离毒株均属美洲型，迄今还没有发现欧洲型毒株，2007年确认该病毒出现高致病性变异，现已在猪场广泛存在，给养猪业造成巨大的经济损失。

2016年5月，黑龙江省大庆市某养殖户饲养24头母猪，连续3头母猪出现初生仔猪流产、死胎和木乃伊胎,将死亡胎儿送检，经实验室诊断确诊为猪高致病性和普通蓝耳病病毒混合感染，现将结果报告如下：

1　材料与方法

1.1病料的采集

无菌采集送检胎儿的肝脏、肺脏、肾脏和淋巴结等病料。

1.2试剂

DNA提取试剂盒和PCR试剂（TaqDNA聚合酶、dNTP等）购于北京天根生化科技有限公司；RNA快速提取试剂盒

购于北京博凌科为生物科技有限公司。

表1　引物序列

1.3引物设计

根据GenBank中已发表的伪狂犬病病毒、高致病性蓝耳病病毒、普通蓝耳病病毒、猪瘟病毒、细小病毒和流行性乙型脑炎病毒等的基因序列设计特异引物，并送上海生工生物工程技术服务有限公司合成。序列见表1。

2　结果

2.1临诊症状

妊娠母猪病初精神沉郁，食欲不振，体温升高，随着病程加重，发生流产、早产，产死胎和木乃伊胎。幸存仔猪表现为呼吸困难，肌肉震颤，呼吸麻痹，共济失调，有的仔猪耳朵和躯体末端皮肤发绀等现象。

2.2剖检变化

流产胎儿皮肤出血，脐带周围的皮肤广泛出血；脐带发生出血性扩张和坏死性动脉炎；可见肺脏组织学病变，如大理石样，肺脏间质水肿，肺小叶隆起，肺泡间质增厚，表面有淤血点；肝脏变性坏死，质脆，呈暗红色；切面三界不明显，质脆，肾囊出血性水肿，肾脏实质严重出血；肾淤血肿大，水肿样。

2.3实验室检测

2.3.1细菌检测在无菌条件下分别剪取一小块深部组织脏器，接种涂抹于5%兔血脂培养基上和营养琼脂培养基上，分别做需氧和厌氧培养，置37℃恒温箱中培养24h，观察菌落形态和溶血情况等，所有的病料均未分离到细菌。

2.3.2病毒检测将送检来的肝脏病料洗净，取0.5g于研磨器中进行研磨，加入1.5mL的pH值为7.2的PBS液研磨，用AXYGEN试剂盒进行DNA和RNA的提取，通过对RNA的反转录得到cDNA，并以此为模板（其中细小病毒以DNA为模板、高致病性蓝耳病病毒及普通蓝耳病病毒以cDNA模板、日本乙型脑炎以RNA为模板、伪狂犬病病毒以DNA为模板），分别选用所合成的各种特异性引物进行PCR扩增，扩增结果经1%琼脂糖凝胶电泳分析，结果可知：第2孔道420bp左右有一条条带，与高致病性蓝耳病病毒片段相符；第3孔道在372bp左右有一条条带，与普通蓝耳病病毒片段相符，其它均无扩增结果，因此可确定该病为高致病性蓝耳病和普通蓝耳病混合感染所致。如图1所示。

3　讨论

3.1发病原因

猪场养殖方式落后，管理不当及防疫意识淡薄，防疫机制不健全是发生猪蓝耳病的重要原因，该猪场设施落后陈旧，卫生环境较差，母猪只进行了猪瘟和伪狂犬病疫苗免疫，平时的消毒操作不规范，而且没有严格按照规定执行。

3.2防治措施

加强饲养管理，尤其是加强卫生管理，制定并执行严格的消毒方案，完善防疫措施，调整免疫程序，补充猪高致病性蓝耳病、普通蓝耳病和细小病毒疫苗免疫，对全场母猪进行猪高致病性蓝耳病和普通蓝耳病疫苗紧急接种。育肥猪舍做到“全进全出”，空栏期进行严格消毒处理，坚持自繁自养，对后备猪进行伪狂犬病野毒抗体的监测，淘汰阳性猪，建立稳定的母猪群。