牛奶黄曲霉毒素的检测方法

杨 洁 田 梅 赵兴鑫 崔荣飞

（石家庄市畜产品质量监测中心，河北石家庄 050000）

牛奶黄曲霉毒素的检测方法

杨 洁 田 梅 赵兴鑫 崔荣飞

（石家庄市畜产品质量监测中心，河北石家庄 050000）

黄曲霉毒素（Aflatoxin，AF）是一类化合物，化学结构类似，是二氢呋喃香豆素的衍生物，由黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生。寄生曲霉菌产生黄曲霉B1、B2、G1和G2，其中黄曲霉毒素B1是强致癌物质。黄曲霉毒素能破坏细胞膜的稳定性，损害人畜的肝脏和肾脏。可导致人患肝癌甚至死亡，使畜禽减少增重，降低免疫力，减少繁殖率。

黄曲霉毒素已证实是人类癌症的一个重要的致癌源，1993被世界卫生组织（WHO）列为I类致癌物。至今已分离出的黄曲霉毒素及其衍生物有20多种，主要是B1、B2、G1、G2及其代谢产物M1、M2。在天然食物中以黄曲霉毒素B1最为多见，危害性也最强，黄曲霉素M1、M2是黄曲霉毒素B1的代谢产物，是从牛奶中发现。

由于谷物很容易被黄曲霉毒素污染，尤其是玉米和花生，因此各个国家对饲料中的黄曲霉毒素B1和牛奶中的黄曲霉毒素M1都规定了限量值，却不能要求完全不可检出。

动物食用含有黄曲霉毒素的饲料后，一部分蓄积在动物的体内，另一部分进入乳汁和尿液中，转化率一般3.45%～11.39%。因此，为了保证牛奶中的黄曲霉毒素M1不超过0.5μg/kg，美国食品与药品监督管理局（FDA）规定饲料中的黄曲霉毒素B1不得超过30μg/kg。

我国GB 13078-2001《饲料卫生标准》对饲料中的黄曲霉毒素限量也有着严格要求。牛奶中黄曲霉毒素M1的限量，我国与美国、日本一致，都是0.5μg/kg，欧盟成员国以及与欧盟有贸易的非洲、亚洲、拉丁美洲部分国家相对严格，为0.05μg/kg，而欧盟对婴幼儿配方食品，包括婴幼儿配方牛奶则限量0.025μg/kg。

表1 主要国家乳及乳制品中AFM1限量标准

全世界每年大约有25%的谷物受到霉菌毒素的影响，FAO/ WHO明确规定：谷物中黄曲霉素B1的含量不得超过20μg/kg，否则禁止投放市场。

黄曲霉毒素M1结构稳定，一旦产生便很难被破坏，牛奶常见的三种消毒方法（巴氏消毒法、高温快速（HTST）的巴氏消毒、超高温（UHT）灭菌）都无法破坏其结构。因此，牛奶中黄曲霉毒素M1的含量测定十分重要。

1 酶联免疫吸附法（ELlSA）

该法利用酶联免疫竞争原理，首先将抗AFM1抗体包被于固相的聚乙烯微孔上，加入作为抗原的AFM1标准品或含AFM1的样品，同时加入AFM1酶结合物，与抗体进行免疫竞争反应，经洗板后，多余的AFM1-酶标抗体结合物被除去，再加入显色剂进行显色，通过标准品孔、样品孔的吸光度值比较来确定样品中是否含有AFM1。

此法快速简便，但只能作定性检测，检出限是0.5μg/kg，如需进行定量检测，则需选择其他方法，如：高效液相色谱法、薄层色谱法。

2 高效液相色谱法

该法利用免疫亲和柱中含有的能够与AFM1特异性结合的单克隆抗体来吸附样品中的AFM1，再用乙醚等洗脱剂洗脱出吸附在免疫亲和柱中的AFM1，再加入三氟乙酸，最后用高效液相色谱仪进行检测。

此法检测限低，液态乳为0.008μg/L，乳粉为0.08μg/kg，可对牛奶进行定量检测。但免疫亲和柱成本较高，所以应用受限。

3 薄层色谱法

首先制备能够吸附AFM1的平板，将活性物质均匀涂成0.25mm的薄层，将浓缩的待检样品点在薄层板上，放入展开缸进行展开，样品出现分层后，用365nm紫外照射，利用荧光强度得到AFM1的浓度。

此法操作简便，可对AFM1进行定量检测，但灵敏度较差，有待进一步改进。

［1］王蕾.牛奶中黄曲霉毒素M1检测方法的建立及饲料中黄曲霉毒素对牛奶品质的影响［D］.河南农业大学，2008.

［2］张宗城.乳与乳制品中黄曲霉毒素M1的限量确定及测定方法［J］.农产品质量与安全，2010，（6）：36-39.

［3］翟红艳，黄天壬.黄曲霉毒素与肝癌关系研究现况［J］.医学研究杂志，2008，（1）：93-95.