两色金鸡菊醇提物的质量标准研究

邓 凯，李新霞，李琳琳，王 烨，兰 怡，毛新民

(1.新疆医科大学基础医学院，乌鲁木齐 830054；2.新疆医科大学科研中心，乌鲁木齐 830054；3.新疆医科大学附属中医医院，乌鲁木齐 830054；4.新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐 830054)



两色金鸡菊醇提物的质量标准研究

邓 凯1，李新霞2，李琳琳1，王 烨1，兰 怡3，毛新民4*

(1.新疆医科大学基础医学院，乌鲁木齐 830054；2.新疆医科大学科研中心，乌鲁木齐 830054；3.新疆医科大学附属中医医院，乌鲁木齐 830054；4.新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐 830054)

目的 建立两色金鸡菊醇提物的质量标准。方法 通过薄层色谱法(TLC)、水分测定、炽灼残渣测定、紫外分光光度法和高效液相色谱法对两色金鸡菊醇提物进行质量控制。结果 薄层色谱显示供试品与对照品绿原酸斑点在相同的位置上显相同颜色，供试品鉴别分离出马里苷、黄酮奥卡宁和奥卡宁3个主要成分；两色金鸡菊醇提物的水分不得超过15%；炽灼残渣不得超过16%；两色金鸡菊醇提物中绿原酸含量(C16H24O12)不得少于0.8%；flavanomarein含量(C21H22O11)不得少于4%；marein含量(C21H22O11)不得少于8.5%；3，5-二咖啡酰基奎宁酸含量(C25H24O12)不得少于0.5%；总黄酮含量不得低于9%；总酚酸含量不得低于28.0%。结论 根据《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求建立了一套完整的两色金鸡菊醇提物质量标准。建立了TLC可定性鉴别两色金鸡菊醇提物中的各主要成分，通过一测多评法可定量控制两色金鸡菊醇提物中绿原酸、flavanomarein、marein和3，5-二咖啡酰基奎宁酸的含量，建立紫外分光光度法可测定两色金鸡菊醇提物中的总黄酮、总酚酸的含量。

两色金鸡菊;醇提物；质量标准；薄层色谱；紫外分光光度法；高效液相色谱法

A.stract:Objective To set up the quality standards of alcohol extract fromCoreopsistinctoria. Methods The quality control of alcohol extract fromCoreopsistinctoriawas carried out through thin layer chromatography (TLC)，determination moisture， residue of ignition,ultraviolet spectrophotometry and high performance liquid chromatography (HPLC). Results The chlorogenic acid of experimental sample and chlorogenic acid of control sample in TLC showed the same colored spots at the same position，and three main ingredients of flavanomarein， marein，3，5-2 coffee acyl quinic acid were identified and isolated.Coreopsistinctoriamoisture should not exceed 15%；the residue on ignition should not exceed 16%； chlorogenic acid in alcohol extract (C16H24O12) should not be less than 0.8%；flavanomarein (C21H22O11) should not be less than 4%；marein (C21H22O11) should not be less than 8.5%；3，5-2 coffee acyl quinic acid (C25H24O12) should not be less than 0.5%.Flavonoids should not be lower than 9%；Coreopsistinctoriaalcohol extract flavonoids should not be lower than 9%,the total phenolic acid should be not less than 28.0%. Conclusion TLC and HPLC can be used to identify qualitatively the chemical constituents of alcohol extract fromCoreopsistinctoria，ultraviolet spectrophotometry can be used to control the quantity of the flavonoids and total phenolic acid，chlorogenic acid，and HPLC can be used to control the quantity of flavanomarein， marein，3，5-2 coffee acyl quinic acid.The method is simple，accurate with a high repeatability．

两色金鸡菊(CoreopsistinctoriaNutt.)为菊科(Compositae)金鸡菊属(Coreopsis)1年生草本植物，原产于美国，主要作为景观植物栽培，后分布于世界各地。在我国主要分布在新疆南疆地区海拔3 000 m左右的昆仑山区，故又称昆仑雪菊[1]。当地居民多用两色金鸡菊作茶饮，具有清热解毒、活血化瘀、和胃健脾之功效[2]。研究发现，两色金鸡菊中有氨基酸、蛋白质、糖类、黄酮类、生物碱、皂苷、有机酸、酚类、恩醌类、挥发油、油脂、甾体、内酯及香豆素类等成分[3-5]。现代药理学研究发现，雪菊的药理作用主要包括抗炎、降压、降脂、降糖、抗凝血、抗衰老、抗病毒等活性[6]。卢伟等[7]研究发现,两色金鸡菊醇提物可明显降低自发性高血压大鼠的血压；兰怡等[8]研究发现，两色金鸡菊醇提物具有改善糖尿病大鼠血糖血脂紊乱的作用；梁乐等[9]通过建立薄层生物自显影的方法证明两色金鸡菊醇提物具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制作用。古扎力努尔·艾尔肯等[10]采用HPLC法测定了新疆两色金鸡菊中绿原酸与总黄酮的含量并建立了指纹图谱。两色金鸡菊醇提物是由两色金鸡菊的干燥花序经过乙醇回流提取、浓缩并真空干燥所得。在课题组已完成的两色金鸡菊醇提物试工艺中，以柚皮苷为对照品测定醇提物中总黄酮含量可达11%，总酚酸含量可达33%；经大孔树脂纯化后总黄酮含量升至30%。国内外研究均表明，两色金鸡菊具有广阔的开发应用前景，将其开发为经济附加值高、功效好的功能性保健品或药品具有重要意义。因此，建立统一的标准尤为重要，本文对两色金鸡菊醇提物的质量标准进行研究，为更好地控制其质量提供了依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 瑞士卡马半自动点样仪(CAMAG-LINOMAT-5)；瑞士卡马薄层色谱数码成像系统(CAMAG REPROSTAR 3)；硅胶G高效板(青岛海洋化工厂)；超声波清洗器(500 W，40 kHz，昆山市超声仪器有限公司)；分析天平(Mettler-Teledo，d=0.01/0.1 mg)；紫外可见分光光度计(Centra-401，澳大利亚)；高效液相色谱仪(日本岛津，LC-20AB泵，SPD-20A紫外双波长检测器)。

1.2 试药 柚皮苷对照品(批号10722-201312，中国食品药品检定研究院)；没食子酸对照品(批号110831-201204，中国食品药品检定研究院)；绿原酸对照品(质量分数≥98%，上海源叶生物科技有限公司)；聚乙二醇400(天津市百世化工有限公司)；2-氨基乙基联苯基硼酸酯(Sigma公司)；乙腈(色谱纯，Fisher Scientific公司)；甲酸、乙酸乙酯、冰乙酸、甲醇、氢氧化钾、钨酸钠、钼酸钠、硫酸锂、盐酸、磷酸、溴素均为分析纯。两色金鸡菊由新疆雪菊生物科技公司提供，两色金鸡菊醇提物为课题组经乙醇回流提取、浓缩并真空干燥所得。

2 方法与结果

2.1 性状 两色金鸡菌醇提物为黄色至红棕色粉末，气香，味甜，具有吸湿性。

2.2 TLC鉴别

2.2.1 对照品溶液的配制 绿原酸对照品溶液：精密称取绿原酸对照品，加甲醇制成1 mL含0.1 mg的溶液，摇匀，即得。

两色金鸡菊对照药材：将两色金鸡菊药材用粉碎机粉碎，过三号筛，取粉末约1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为60%的乙醇12 mL，密塞，称定质量，超声(500 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用体积分数为60%的乙醇补足减失的质量，摇匀，提取液转移至离心管中，置于离心机中，以10 000 r·min-1离心15 min，取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.2.2 供试品溶液的配制 取本品0.5 g，精密称定，置于10 mL量瓶中，精密加入体积分数为60%的乙醇超声处理，使其溶解并稀释至刻度，取溶液过0.22 μm微孔滤膜，续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 显色试剂的配制 取1.25 g聚乙二醇,置于25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得50 mg·mL-1的聚乙二醇400溶液。取250 mg的2-氨基乙基联苯基硼酸酯，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得质量浓度为10 mg·mL-1的2-氨基乙基联苯基硼酸酯溶液。

2.2.4 两色金鸡菊醇提物的鉴别 按照《中国药典》薄层色谱法(通则0502)实验[11]，吸取绿原酸对照品溶液2 μL、对照药材溶液1 μL、供试品溶液1 μL，分别点于同一硅胶G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶7∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，再依次喷以10 mg·mL-1的2-氨基乙基联苯基硼酸酯和50mg·mL-1的聚乙二醇400，分别置于紫外光灯366 nm处和可见光下检视。

参考葡萄牙文献[12]首先确定提取物中有绿原酸、马里苷、奥卡宁及flavanokanin。参照欧盟药典，以1个对照品的位置确定其他成分的相对位置(Rf)，可以同时确定和鉴别多个化合物斑点。在紫外光灯366 nm下检视，首先确定绿原酸的位置，在绿原酸下方Rf为0.11、显红色的斑点为马里苷(marein)；在绿原酸上方薄层板近1/2处、Rf为0.36、显蓝色荧光斑点为黄酮奥卡宁(flavanokanin)；在薄层板上方Rf为0.75、显橙色的斑点为奥卡宁(okanin)。在可见光下检视，位于薄层板上方(Rf=0.75)的橙色斑点为奥卡宁，下方的紫色斑点(Rf=0.11)为马里苷。见图1～2。

图1 两色金鸡菊醇提物展开后在366 nm下检视1～10.10批醇提物；S1.两色金鸡菊对照药材；S2.绿原酸对照品；A.马里苷；B.绿原酸；C.黄酮奥卡宁；D.奥卡宁

Fig.1 Detection ofCoreopsistinctoriaNutt. alcohol extract under UV 366 nm 1-10.10 batch alcohol extract；S1.CoreopsistinctoriaNutt.reference medicinal materials；S2. chlorogenic acid groups； A.marein；B.chlorogenic acid；C.flavanokanin；D.okanin

图2 两色金鸡菊醇提物展开后在可见光下检视1～10.10批醇提物；S1.两色金鸡菊对照药材；S2.绿原酸对照品；A.马里苷；D.奥卡宁

Fig.2 Detection ofCoreopsistinctoriaNutt. alcohol extract under visible light 1-10.10 batch alcohol extract；S1.CoreopsistinctoriaNutt. reference medicinal materials；S2.chlorogenic acid groups；A.marein；D.okanin

2.3 检查

2.3.1 水分检查 参照《中国药典》2015年版四部(通则0832)水分测定法进行实验，取样品2 g，每批样品平行3份，平铺于干燥至恒质量的扁形称量瓶(60 mm×30 mm)中，厚度不超过5 mm，精密称定，打开瓶盖，在100～105 ℃干燥5 h，将瓶盖盖好，移至干燥器中，冷却30 min，精密称定，在100～105 ℃干燥1 h，冷却，称定质量，至连续2次称定质量差异不超过5 mg为止，根据减失的质量，计算供试品中的含水量。10批样品的水分测定结果为11.0%～12.4%，平均值为11.5%，按照平均值的120%计算，暂定两色金鸡菊醇提物的水分不得超过15%。

2.3.2 炽灼残渣 参照《中国药典》2015年版四部(通则0841)炽灼残渣检查法进行实验，取样品1 g，每批样品平行3份，置于炽灼至恒质量的坩埚中，称定质量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全碳化时，逐渐升高温度至700 ℃，使完全灰化至恒质量。根据残渣质量，计算供试品中残渣的含量。10批样品的炽灼残渣测定结果为11.0%～16.0%，平均值为12.6%，按照平均值的120%计算，暂定两色金鸡菊醇提物的炽灼残渣不得超过16%。

2.4 一测多评法测定两色金鸡菊醇提物中主要成分的含量 一测多评法(QAMS) 是一种应用于多成分质量控制的方法，只测定某个代表性成分(易得、廉价、有效)，同时可计算出其他待测有效成分含量的方法。该方法被《中国药典》2015年版四部收录，方法适用于对照品难得或制备成本高或不稳定的情况下同类多成分同时测定。两色金鸡菊醇提物中flavanomarein、marein和3，5-二咖啡酰基奎宁酸对照品昂贵且难得，课题组张瑞[13]建立了一测多评法来测定两色金鸡菊提取物中的主要成分，故参照其方法进行测定。flavanomarein、marein和3，5-二咖啡酰基奎宁酸的相对保留时间分别为1.497 9，2.668 0和3.020 0；flavanomarein、marein和3，5-二咖啡酰基奎宁酸的相对校正因子为0.669，3.595和0.759。

2.4.1 色谱条件 Shim-pack VP-ODS色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；以5 mL·L-1甲酸为流动相A，以乙腈为流动相B;流速1.0 mL·min-1；检测波长280 nm；柱温35 ℃；进样量10 μL，按照表1进行梯度洗脱。

表1 梯度洗脱程序

Tab.1 The gradient elution program

时间/min流动相A%流动相B%0～6095560～6595→805→2065～7580→1020→9075～8010→9590→5

2.4.2 对照品溶液的制备 取绿原酸对照品适量，精密称定，置于25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度线，摇匀，即得(1 mL含绿原酸400 μg)。

2.4.3 供试品溶液的制备 取本品粉末1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为60%的乙醇12 mL，密塞，称定质量，超声(500 W体积分数，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用体积分数为60%的乙醇补足减失的质量，摇匀，提取液转移至离心管中，置于离心机中，以10 000 r·min-1离心15 min，取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.4.4 线性与范围 精密量取绿原酸对照品溶液0.1，0.2，0.5，0.7和1.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得1 mL含绿原酸10，20，30，40和50 μg的系列质量浓度溶液。按照《中国药典》高相液相色谱法(通则0512)测定，以绿原酸质量浓度(C)为横坐标，以峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程A=13 038C-19 022，r=0.999 1，表明绿原酸对照品溶液质量浓度在4.032～40.32 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.4.5 测定法 分别精密吸取绿原酸对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，以绿原酸的峰面积为对照，分别计算flavanomarein、marein和3，5-二咖啡酰基奎宁酸的含量，用待测成分色谱峰与绿原酸色谱峰的相对保留时间确定，样品色谱图见图3。本品按照干燥品进行计算，以绿原酸计，绿原酸(C16H24O12)含量不得少于0.8%，flavanomarein(C21H22O11)含量不得少于4%，marein(C21H22O11)含量不得少于8.5%，3，5-二咖啡酰基奎宁酸(C25H24O12)含量不得少于0.5%。

图3 样品色谱图

a.绿原酸；b.flavanomarein；c.marein；d.3,5-二咖啡酰基奎宁酸

Fig. 3 Sample chromatograms

a.chorogenic acid；b.flavanomarein；c.marein；d.3,5-dicaffeoylquinic acid

2.5 紫外分光光度法测定两色金鸡菊醇提物中的总黄酮与总酚酸

2.5.1 总黄酮的测定 2015年版《中国药典》收录的总黄酮测定方法是以芦丁为对照，芦丁为黄酮醇苷，而两色金鸡菊中的黄酮类化合物以查尔酮(马里苷，奥卡宁)和二氢黄酮(黄酮奥卡宁，黄诺马苷)为主，所以以芦丁为对照品测定两色金鸡菊醇提物总黄酮含量并不准确。梁乐[14]研究发现，柚皮苷为二氢黄酮类，二氢黄酮在碱性条件下能转变为查尔酮，故以柚皮苷为对照进行两色金鸡菊醇提物中总黄酮测定，该方法测定结果准确可靠。参照其方法对两色金鸡菊醇提物中总黄酮进行测定。

2.5.1.1 显色反应试液的制备 取氢氧化钾5 g，精密称定，置于50 mL量瓶中，摇匀，即得质量浓度为100 g·L-1的氢氧化钾溶液。

2.5.1.2 对照品溶液的制备 取柚皮苷对照品适量，精密称定，置于50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成1 mL含203.6 μg的溶液，即得。

2.5.1.3 样品溶液的制备 取两色金鸡菊醇提物0.1 g，精密称定，置于25 mL量瓶中，加体积分数为60%的乙醇稀释至刻度，精密量取0.5 mL溶液，置于25 mL量瓶中，分别加甲醇10 mL、氢氧化钾0.8 mL，用甲醇稀释至刻度，即得。

2.5.1.4 标准曲线的制备 精密量取柚皮苷对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5和3.0 mL，置于25 mL量瓶中，加10 mL甲醇和质量浓度为100 g·L-1的氢氧化钾0.8 mL，摇匀，用甲醇稀释至刻度，即得质量浓度为4.07，8.14，12.22，16.29，20.36和24.43 μg·mL-1的对照品溶液。按照《中国药典》紫外可见分光光度法(通则0401)，在420 nm波长处测定吸光度。以吸光度值(Y)为纵坐标、柚皮苷质量浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=0.042 9X-0.002，相关系数r=0.999 9，表明柚皮苷对照品溶液质量浓度在4.07～24.43 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.5.1.5 测定法 取样品溶液适量，按照2.5.1.4项下的方法，自“加甲醇10 mL”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中柚皮苷的质量，计算，即得，见表 2。

本品按照干燥品进行计算，黄酮含量以柚皮苷计(C27H32O14)，不得少于9.0%。

表2 样品总黄酮含量

Tab.2 Sample flavonoids content±s，n=3)

2.5.2 总酚酸的测定

2.5.2.1 对照品溶液的制备 取没食子酸对照品12.5 mg，精密称定，置于25 mL棕色量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL溶液，置于50 mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，即得质量浓度为50 μg·mL-1的对照品溶液。

2.5.2.2 供试品溶液的制备 取两色金鸡菊醇提取物0.1 g，精密称定，置于50 mL量瓶中，用水稀释并定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.5.2.3 磷钼钨酸试剂的制备 称取钨酸钠100 g,钼酸钠25 g，加水700 mL使溶解，加盐酸100 mL，磷酸50 mL，加热回流10 h，放冷，再加硫酸锂150 g，水50 mL和溴0.2 mL，煮沸除去残留的溴，冷却，加水稀释至1 000 mL，滤过，得磷钼钨酸试剂，放入冰箱保存。

2.5.2.4 最大吸收波长的确定 精密吸取对照品溶液2 mL和供试品溶液0.2 mL，置于25 mL棕色量瓶中，分别加入1.2 mL磷钼钨酸试剂，再各加入10和11.8 mL的水，摇匀后用质量浓度为290 g·L-1的碳酸钠定容至刻度，避光放置30 min，在400～800 nm波长范围内进行扫描。结果显示，对照品溶液和供试品溶液均在760 nm处有最大吸收峰，故选择760 nm为最佳吸收波长。

2.5.2.5 显色试剂加入量的确定 取供试液0.2 mL，置于25 mL棕色量瓶中，以水代替供试品溶液作为空白对照，分别加入0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2和1.4 mL的磷钼钨酸的试剂和11.8 mL的水，摇匀，用质量浓度为290 g·L-1的碳酸钠溶液定容至刻度，避光放置5 min，显色后在760 nm处测定吸光度。结果显示，显色试剂的加入量为1.2 mL时，供试液的吸光度最大，故选择1.2 mL为显色试剂的加入量。

2.5.2.6 反应时间的确定 取供试品溶液0.2 mL，置于25 mL棕色量瓶中，以水代替供试品溶液作为空白对照，加入1.2 mL的磷钼钨酸试剂和11.8 mL的水，摇匀，用质量浓度为290 g·L-1的碳酸钠溶液定容至刻度，避光放置，分别于0，5，10，15，20，25和30 min测定吸光度，结果显示反应时间在5 min时，吸光度最大，故选择5 min为最佳反应时间。

2.5.2.7 反应温度的确定 精密量取供试品溶液0.2 mL，置于25 mL棕色量瓶中，以水代替供试品溶液作为空白对照，加入1.2 mL的磷钼钨酸试剂和11.8 mL的水，摇匀，用质量浓度为290 g·L-1的碳酸钠溶液定容至刻度，避光放置5 min，分别于25，30，35，40，45和50 ℃测定吸光度，结果显示，当反应温度为25 ℃时，吸光度最大，故选择25 ℃为最佳反应温度。

2.5.2.8 方法学考察

①线性与范围 精密量取没食子酸对照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0和4.0 mL，置于25 mL棕色量瓶中，加入1.2 mL的磷钼钨酸试剂，分别加入11.0，10.5，10.0，9.5，9.0和8.0 mL的水，摇匀，用质量浓度为290 g·L-1的碳酸钠定容至刻度，避光放置5 min，显色后，在760 nm处测定吸光度，以质量浓度X为横坐标、吸光度Y为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=0.102 4X-0.090 7，r=0.999 8，表明没食子酸对照品溶液质量浓度在2.0～8.0 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

②精密度实验 精密量取没食子酸对照品溶液2 mL，置于25 mL棕色量瓶中，按照线性与范围项下方法，自“加入1.2 mL磷钼钨酸试剂”起依法连续6次测定吸光度，测定结果RSD值为0.22%，表明仪器的精密度良好。

③稳定性实验 精密量取供试品溶液0.2 mL，置于25 mL棕色量瓶中，按照线性与范围项下方法，自“加入1.2 mL磷钼钨酸试剂”起依法分别在0，5，10，15，20，25和30 min测定吸光度，测定结果显示，吸光度RSD值为1.97%，即该方法在30 min内稳定性较好。

④重复性实验 取两色金鸡菊醇提物6份，按照线性与范围项下方法，自“加入1.2 mL磷钼钨酸试剂”起依法测定吸光度，计算总酚酸平均含量为34.31%，RSD值为2%，表明该方法重复性良好。

⑤回收率实验 精密量取6份已知含量的供试品溶液0.2 mL，分别加入没食子酸对照品溶液2 mL，按照线性与范围项下方法，自“加入1.2 mL磷钼钨酸试剂”起依法测定吸光度，并计算供试品中总酚酸含量。结果平均回收率为97.40%，RSD值为0.15%，说明该方法准确可靠，可用于两色金鸡菊醇提物总酚酸的含量测定。

⑥样品的含量测定 取样品溶液适量，按照线性与范围项下方法，自“加入1.2 mL磷钼钨酸试剂”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中没食子酸的质量，计算，即得，见表3。本品按照干燥品计算，总酚酸含量以没食子酸(C7H6O5)计，不得少于28.0%。

表3 样品总酚酸含量

Tab.3 The sample total phenolic acid content±s，n=3)

3 讨论

两色金鸡菊中主要含有氨基酸、糖类、挥发油类、黄酮和有机酚酸类等多种成分，其中以黄酮类和酚酸类为代表[15]，具有抗氧化、降压、降脂、降糖以及抗炎等生物活性。采用课题组已建立的两色金鸡菊醇提物实验室工艺，对两色金鸡菊进行放大提取，得出两色金鸡菊醇提物收率为38%，总黄酮含量占11%，总酚酸含量占33%。

本研究参照欧盟药典薄层鉴别方法，以1个对照品的位置确定其他化合物的相对位置，同时鉴别多个化合物，建立了两色金鸡菊醇提物的薄层色谱鉴别方法。鉴别两色金鸡菊醇提物中的绿原酸、马里苷、奥卡宁及flavanokanin。两色金鸡菊中 flavanomarein、marein和3，5-二咖啡酰基奎宁酸对照品缺乏且昂贵，采用课题组已建立的一测多评法[13]，以价廉易得的绿原酸为内标，对flavanomarein、marein和3，5-二咖啡酰基奎宁酸进行测定，可以对两色金鸡菊进行更全面的质量控制。

2015年版《中国药典》收录的总黄酮测定方法大多是以芦丁为对照品，芦丁为黄酮醇苷，而两色金鸡菊中的黄酮类化合物以查尔酮(马里苷，奥卡宁)和二氢黄酮(flavanokanin，黄诺马苷)为主[16]，因此以芦丁为对照品测定两色金鸡菊醇提物总黄酮含量不太适宜。柚皮苷为二氢黄酮类，二氢黄酮在碱性条件下能转变为查尔酮，故以柚皮苷为对照品测定两色金鸡菊醇提物中总黄酮更为科学。

[1] 毛新民，卢伟，李琳琳，等. 两色金鸡菊化学成分和药理作用研究进展[J]. 中国药物应用与监测，2014，11(4)：235-239.

[2] 刘伟新，邓继华，徐鸿. 一种金鸡菊花的生药学研究[J]. 中国民族医药杂志，2009，15(1)：24-25.

[3] 木合布力· 阿布力孜，张兰，张敏. 昆仑雪菊中氨基酸的含量分析[J]. 医药导报，2011，30(4)：431-432.

[4] 张彦丽，阿布都热合曼·合力力，阿依吐仑·斯马义. 苯酚-硫酸法测定维吾尔药昆仑雪菊多糖含量的研究[J]. 药物分析杂志，2010，30(11)：2205-2207.

[5] 赵军，孙玉华，徐芳，等. 昆仑雪菊黄酮类成分研究[J]. 天然产物研究与开发，2013，25(1)：50-52.

[6] 潘英，李宁，倪慧，等. 金鸡菊属植物化学成分和药理活性研究进展[J]. 现代药物与临床，2012，27(5)：512-518.

[7] 卢伟，马晓丽，兰怡，等. 两色金鸡菊醇提物对自发性高血压大鼠尿液的代谢组学研究[J]. 中国药理学通报，2014，30(9)：1311-1315.

[8] 兰怡，卢伟，李琳琳，等. 两色金鸡菊醇提物对实验性糖尿病大鼠血糖血脂的影响[J]. 中国药物应用与监测，2014，11(5)：272-275.

[9] 梁乐，李琳琳，古扎力努尔·艾尔肯，等. 薄层生物自显影技术筛选两色金鸡菊中的活性成分[J]. 药物分析杂志， 2015，35(3)：425-429.

[10]古扎力努尔·艾尔肯，李新霞，毛新民，等．新疆两色金鸡菊中绿原酸与总黄酮含量测定及指纹图谱的建立[J]．西北药学杂志，2013，28(3)：248-251．

[11]国家药典委员会．中国药典2015年版 [S].四部．北京:中国医药科技出版社，2015：57-59.

[12]Dias M T M F.Phytochemical study of coreopsis tinctoria and evaluation of its antidiabetic properties[D].Lisboa:Universidade de Lisboa Faculdad de Farmacia,2011.

[13]张瑞. HPLC法测定两色金鸡菊提取物中Flavanomarein和Marein的含量[J].安徽农业科学,2015,43(6):73-74.

[14]梁乐. 两色金鸡菊提取工艺及调血脂作用研究[D].乌鲁木齐：新疆医科大学，2015.

[15]张媛，屠鹏飞. 两色金鸡菊头状花序的化学成分研究[J].中国中药杂志，2012，37(23)：3581-3584.

[16]崔庆玲，倪慧，潘英妮，等. 维药两色金鸡菊花化学成分的分离与鉴定[J].沈阳药科大学学报，2015，32(1):14-17.

Quality standards for alcohol extract of Coreopsis tinctoria

DENG Kai1，LI Xinxia2，LI Linlin1，WANG Ye1，LAN Yi3，MAO Xinmin4*

(1.Basic Medical College，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China；2.Research Center，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China；3.Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine,Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China；4.College of Traditional Chinese Medicine Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China)

Coreopsistinctoria;alcohol extract；quality standards；thin layer chromatography；UV spectrophotometry；HPLC

NSFC-新疆联合基金重点项目(编号:U1303223)

邓凯，男，硕士研究生

*通信作者：毛新民，男，教授，博士，博士生导师

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.06.002

R282

A

1004-2407(2016)06-0554-07

2016-01-14)