产前B族链球菌筛查对新生儿影响*

唐敏儿，邓志声，黄冬梅，江新湄，覃丽军

(广东省佛山市南海经济开发区人民医院检验科 528222)



·论 著·

产前B族链球菌筛查对新生儿影响*

唐敏儿，邓志声，黄冬梅，江新湄，覃丽军△

(广东省佛山市南海经济开发区人民医院检验科 528222)

目的 探讨孕期进行B族链球菌(GBS)筛查并进行治疗对新生儿GBS发病率及临床表现的影响。方法 选取孕晚期经过常规筛查GBS阳性结果并给予抗菌药物治疗，分娩时诊断为胎膜早破的47例孕妇作为实验组；选取孕晚期未经过常规GBS筛查和治疗，分娩时诊断为胎膜早破的73例孕妇作为对照组，观察2组新生儿的临床表现，并收集咽拭子标本，采用PCR方法检测GBS。结果 实验组无新生儿发生GBS感染、呼吸困难、青紫、发热，对照组有7例GBS感染，2例呼吸困难，2例青紫，4例发热。2组新生儿各指标比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 孕期行GBS筛查与治疗，可有效降低新生儿GBS感染的发病率。

B族链球菌； 抗菌药物； 胎膜早破

B族链球菌(GBS)是 β溶血性的革兰阳性菌，为兼性厌氧菌，也称为无乳链球菌。GBS是条件致病菌，多存在于机体下消化道及泌尿生殖道。孙自镛等[1]报道，妊娠女性GBS携带率为10%～30%，GBS导致围产期孕妇严重感染。在发达国家GBS列入围产期感染的首要致病菌[2]。美国CDC《妊娠期GBS疾病预防(2010年版)》对GBS产期筛查及预防作出了相关规定[3]。GBS常见传播途径为母婴传播，定植在生殖道的GBS可以逆行性感染引起宫内感染。此外在分娩过程中，新生儿可能因羊水吸入产道而感染GBS，表现为肺炎、败血症、脑膜炎等[4]。根据发病时间可分为早发型GBS疾病(GBS-EOD)和晚发型GBS疾病(GBS-LOD)，GBS-EOD的病死率高达20%～50%[5-6]。早发型GBS为新生儿出生后1周内(0～7 d)发病，主要表现为爆发性肺炎、败血症，少部分为脑膜炎。产时抗菌药物预防性治疗(IAP)可有效降低GBS-EOD的发病率[7]。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2015年1～12月该院诊断为胎膜早破的孕妇47例作为实验组，35～37孕周常规筛查GBS，阳性者给予IAP治疗。选取2010年1月至2014年12月该院诊断为胎膜早破(PROM)，即在临产前膜自发性破裂者[8]，73例孕妇作为对照组。2组新生儿均分别在产后24 h内、第7天进行咽拭子采样，采用PCR方法检测GBS，结果阳性者判定为新生儿GBS感染。2组临床资料包括孕妇年龄、胎膜早破时的孕周、孕妇体质量、新生儿出生体质量、新生儿性别，以及新生儿身体状况观察指标[如1 min阿氏(Apgar)评分、2 min Apgar评分、呼吸困难、青紫、发热等]。实验组纳入标准：(1)出现胎膜早破。(2)筛查GBS阳性并进行预防性抗菌药物。(3)临产时，进行预防性抗菌药物的孕妇，且用药时间长于4 h。(4)无其他感染性疾病或带菌。(5)孕妇无青霉素过敏和耐药。(6)使用青霉素进行IAP治疗。(7)单胎妊娠。(8)胎膜早破小于或等于18 h。排除标准：(1)非经阴道分娩。(2)新生儿出现败血症、脑膜炎、发热等，但非GBS感染，GBS培养呈阴性。对照组纳入标准：(1)出现胎膜早破。(2)孕妇孕期未进行抗菌药物治疗。(3)孕妇无其他感染性疾病或带菌。(4)单胎妊娠。(5)胎膜早破小于或等于18 h。(6)孕期未筛查GBS。排除标准：(1)非经阴道分娩。(2)新生儿出现败血症、脑膜炎、发热等，但非GBS感染，GBS培养呈阴性。

1.2 仪器与试剂 细菌鉴定采用生物梅里埃公司ATB Expression 1200细菌鉴定仪；GBS核酸检测探针、引物使用福建泰普生物科学有限公司产品；GBS核酸检测应用ABI 7500荧光定量PCR仪。

1.3 方法 (1)35～37孕周筛查GBS，外阴消毒，无菌棉签在阴道下1/3和肛周2～5 cm分别取样。将标本种植于爱德华培养基中，培养12 h后均与涂在哥伦比亚血琼脂平板上再培养，置于37 ℃孵育箱进行培养，培养24 h后再观察培养结果。如果未发现可疑菌落则培养至72 h，无可疑菌落为阴性结果。如果发现可疑菌落，则做革兰染色并转种血平板进一步培养观察，使用ATB Expression 1200细菌鉴定仪(生物梅里埃公司)作细菌鉴定，同时接种M-H血平板做药物敏感试验。(2)筛查GBS阳性且在筛查后5周内胎膜早破的孕妇，且对青霉素无过敏反应，给予IAP治疗。青霉素G首次剂量480万单位静脉滴注，然后240万单位/4 h直至分娩。(3)胎膜早破孕妇，分娩后2组新生儿均进行咽拭子采样，使用PCR方法检测GBS。以GBS特异性保守序列(编码CAMP蛋白)作为靶序列、设计引物和探针。将标本用清洗液洗去杂质，采用加热变性法破坏细菌并分离DNA。PCR反应条件：第1步94 ℃ 2 min 1个循环；第2步94 ℃ 20 s，55 ℃ 45 s，在每次55 ℃ 45 s步骤结束时收集荧光信号，第2步反应 40个循环。PCR试剂组分包括GBS特异引物、内参照引物；FAM荧光标记的GBS特异探针、Texas Red荧光标记的内参照探针。每次上机检测均设置阳性与阴性对照。内参照引物探针的作用是监测PCR反应体系的正常运行。实验结果判读原则：因模板之间的竞争性反应，标记FAM荧光的GBS阳性时，标记为Texas Red荧光的内参照可显示为阳性或阴性；当GBS阴性时，内参必须为阳性才能保证阴性结果的准确性。对传统培养方法为阴性而PCR结果为阳性的不相符标本，以编码CMAP蛋白，但不同于GBS荧光PCR产物的序列作为靶序列设计引物并进行扩增，2%琼脂糖凝胶电泳鉴定产物(260 bp)进行桑格(Sanger)测序，测序产物进行序列比对分析，鉴别GBS序列，确定荧光PCR结果的准确性[9]。

2 结 果

2.1 2组研究对象一般临床资料结果比较 2组孕妇和新生儿的年龄、体质量等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 2组研究对象的一般资料结果比较±s)

2.2 2组新生儿GBS感染结果比较 实验组胎膜早破孕妇GBS阳性并进行青霉素预防性治疗，对照组胎膜早破孕妇孕期未进行IAP治疗。实验组新生儿出生后第7天进行随访登记数据，实验组无新生儿感染GBS，但对照组有7例阳性，感染率为9.5%，2组GBS感染率比较，差异有统计学意义(P<0.05)。实验组无新生儿出现呼吸困难、青紫、发热，对照组发生呼吸困难2例，青紫2例，发热4例，发病率分别为2.7%、2.7%、5.5%。2组1 min和2 min Apgar评分比较，差异有统计学意义(P<0.05)，实验组1、2 min Apgar评分分别是(9.2±0.1)、(9.5±0.4)分，对照组1、2 min Apgar评分分别是(9.1±0.2)、(9.3±0.2)分。孕期进行IAP治疗，可提高新生儿Apgar评分。见表2。

表2 2组新生儿GBS感染结果比较

3 讨 论

《胎膜早破的诊断与处理指南(2015年版)》指出GBS是产时和产褥期感染、胎儿宫内感染、新生儿感染的重要病原菌，应重视GBS感染的防治[8]。预防新生儿早发型GBS疾病，主要预防措施是孕妇在孕期进行GBS筛查，阳性孕妇分娩时给予IAP治疗，减少宫内感染[10]。本研究实验组运用IAP进行预防，而对照组则未进行IAP预防，2组新生儿各观察指标差异均有统计学意义(P<0.05)。美国CDC指南中建议GBS带菌孕妇分娩时进行IAP治疗，可减少新生儿在分娩过程中感染GBS引发早发型GBS疾病。

本研究孕妇是通过肉汤增菌培养方法进行判断是否感染GBS，无法判断受GBS感染的孕妇是否重度定植，GBS重度定植是指在普通培养皿进行细菌培养则可以培养出GBS，而不需要用特殊的选择性肉汤培养基进行培养[11]。选择肉汤培养基进行培养GBS，可提高GBS检出率。GBS可定植于一半新生儿的呼吸道或消化道，但一般不发病，只有1%～2%感染GBS的新生儿会发展为侵袭性感染进而成为早发型GBS疾病或晚发型GBS疾病。

有研究表明妊娠33周前出现的早产儿早发GBS疾病的病死率高达30%，足月新生儿的病死率仅为2%～3%[3]。实验组无33周前胎膜早破的病例，所以未出现新生儿感染GBS，一方面与分娩时运用IAP有关，另一方面与病例组成有关，无法判断孕周是否为早发型GBS疾病的影响因素。

本研究结果表明，建议产科门诊可将GBS筛查作为常规筛查，对于有合并症、感染、可疑胎膜早破的情况可将筛查时间提前，如孕28周，便于细菌培养和药敏试验，给予产科住院部IAP治疗指导，减少新生儿GBS感染率。

[1]孙自镛．经产道感染B群链球菌的预防和控制[J]．中华检验医学杂志，2009，32(7)：834-836．

[2]何国才．妊娠晚期孕妇B族链球菌感染的研究状况[J]．医学综述，2012，18(14)：2255-2257．

[3]Verani JR,Mcgee L,Schrag SJ,et al.Prevention of perinatal group B streptococcal disease-revised guidelines from CDC,2010[J].MMWR Recomm Rep,2010,59(RR/10):1-36.

[4]黄树峰，朱艳宾，薛凤霞．孕晚期女性感染B族链球菌对新生儿影响的研究[J]．中国妇幼保健，2014，29(21)：3415-3417．

[5]Bjrklund V,Nieminen T,Ulander VM,et al.Replacing risk-based early-onset-disease prevention with intrapartum group B streptococcus PCR testing[J].J Matern Fetal Neonatal Med,2016,25(3):1-6.

[6]邓江红，姚开虎，胡惠丽，等．新生儿肺炎死亡病例中B族链球菌的检测[J]．中华儿科杂志，2006，44(11)：850-854．

[7]Ohlsson A1,Shah VS.Intrapartum antibiotics for known maternal Group B streptococcal colonization[J].Cochrane Database Syst Rev，1994，10(6)：51-52．

[8]蔡晓沂，钟镐镐，王秀艳，等．快速、准确的B族链球菌检测——即时荧光探针核酸扩增技术的应用[J]．现代预防医学，2013,20(13)：2533-2535．

[9]Taminato M,Fram D,Torloni MR,et al.Screening for group B Streptococcus in pregnant women:a systematic review and meta-analysis[J].Rev Lat Am Enfermagem,2012,19(6):1470-1478.

[10]Lo JY.Early-onset group B streptococcus neonatal disease:a target for prevention?[J].Hong Kong Med J,2009,15(6):412-413.

[11]Madzivhandila M,Adrian PV,Cutland CL,et al.Serotype distribution and invasive potential of group B streptococcus isolates causing disease in infants and colonizing maternal-newborn dyads[J].PLoS One,2011,6(3):e17861.

The influence of group B streptococcus screening to newborns*

TANGMiner,DENGZhisheng,HUANGDongmei,JIANGXinmei,QINLijun△

(DepartmentofClinicalLaboratory,People′sHospitalofNanhaiEconomicDevelopmentZone,Foshan,Guangdong528222，China)

Objective To explore the influence of group B Streptococcus screening during pregnancy and the incidence of the early-onset GBS disease for newborns.Methods Totally 47 cases of pregnant women with premature rupture of membranes (PROM),which were GBS positive and accepted antibiotic treatment,who were chosen as the experimental group.While 73 cases of pregnant women with premature rupture of membranes (PROM),which were not accept GBS screening and antibiotic treatment,were chosen as control group.The neonatal clinical manifestations were observed.The swab specimens were collected from throat and detected of GBS by using PCR method.Results The experimental group showed no occurrence of neonatal group B streptococcal infection,dyspnea,cyanosis and fever.Totally 7 cases of the control group had group B Streptococcus infection.Totally 2 cases had dyspnea and 2 cases had cyanosis.Totally 4 cases had fever.The neonatal research indicators of these two groups were statistically significant differences (P<0.05).Conclusion The group B Streptococcus screening during pregnancy would effectively reduce the incidence of neonatal infection of group B Streptococcus.

group B Steptococcus; intrapartum antibiotic prophylaxis; premature rupture of membranem

广东省佛山市卫生和计生局医学科研课题(2015278)。

唐敏儿，女，主管技师，主要从事临床检验研究。△

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.019

A

1673-4130(2016)20-2852-03

2016-04-21

2016-07-11)