某地区无偿献血者中性粒细胞特异性抗体筛查分析*

刘 铮,张伯伟,赵 磊,康轶青,马 茹,杜 鹃,杨贺才,程四国

(河南省红十字血液中心，郑州 450052)



·论 著·

某地区无偿献血者中性粒细胞特异性抗体筛查分析*

刘 铮,张伯伟,赵 磊,康轶青,马 茹,杜 鹃,杨贺才,程四国△

(河南省红十字血液中心，郑州 450052)

目的 探讨河南地区无偿献血者中性粒细胞特异性(HNA)抗体的分布和特异性，分析HNA抗体引起的免疫性输血不良反应。方法 随机收集女性标本156例，男性标本80例，采用LABScreen Multi试剂盒对标本HNA抗体进行检测。结果 236例无偿献血者中，女性HNA抗体检出阳性率为5.77%(9/156)，男性为5.00%(4/80)。其中HNA 1A者7例，HNA 4A者4例，同时检出HNA 1A和HNA 4A、HNA 1A和HNA 1C各1例。结论 HNA抗体分布无性别差异，研究HNA抗体的分布和特异性，可为指导临床用血安全和相关政策的制定提供有力的理论基础。

中性粒细胞特异性抗体； 免疫性输血不良反应； 用血安全

输血是临床不可缺少的治疗手段，但可引起多种不良反应和并发症，因此输血安全是临床输血工作者的研究重点[1-2]。目前输血安全最重要的问题是非感染性输血并发症，其中输血相关急性肺损伤(TRALI)已成为输血相关致死的首要原因[3]。TRALI的发病机制至今仍不十分清楚，普遍认为的理论是“2次打击”学说[4-6]：第1次打击是由于患者自身的各种因素，激活中性粒细胞的NADPH氧化酶，从而引起中性粒细胞活化、聚集并黏附于肺泡毛细血管内皮细胞上[7]；第2次打击就是血液输注，由于患者输入含人类白细胞抗原抗体(HLA-Ⅰ/Ⅱ)或人类中性粒细胞特异性(HNA)抗体的血液，与患者体内相应的抗原发生抗原抗体反应，从而引起中性粒细胞活化，血管内皮损伤，肺毛细血管通透性增加，导致肺水肿等急性肺损伤症状[8]。因此，TRALI与HLA-Ⅰ/Ⅱ或HNA抗体密切相关[9]。有研究报道，不同抗体造成的TRALI严重程度不一致，HNA 3A抗体通常引起严重的TRALI[10]。我国目前对无偿献血者未做出相关规定，也缺乏HLA抗体检测的方法和相关的研究数据。现建立无偿献血者血液HNA抗体检测平台，了解河南地区HNA抗体的分布和特异性，探讨HNA抗体导致的免疫性输血不良反应。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选取河南省红十字血液中心2015年无偿献血者236例，女156例，年龄19～55岁，男80例，年龄18～55岁。抽取所有研究对象的外周血3 mL，EDTA-K2抗凝，离心分离血浆与血细胞，于-20 ℃保存。

1.2 仪器与试剂 配套仪器Luminex 200购自美国Thermo公司。LABScreen Multi(批号# LSMUTR)检测试剂盒进行HNA抗体筛查。

1.3 HNA抗体检测 酶标板每孔中依次加入2 μL微珠，14 μL 1×PBS，7 μL血浆样本，混匀，室温避光孵育30 min。每孔加入180 μL 1×Labscreen 洗液，封口膜封严，混匀器混匀，3 500 r/min离心5 min，离心后检查微球是否沉入孔底，快速将洗液甩入废物箱中，重复2次。每孔加入50 μL 2抗混匀，室温避光孵育30 min。孵育后，杂交板直接3 500 r/min离心5 min，然后将2抗甩至废物箱中，清洗3次。完成后，每孔加入50 μL PBS，使用混匀器混匀标本，将标本转移至读板中，上机读取结果。

1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，计数资料以例数或百分率表示，组间比较使用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 男女性无偿献血者HNA抗体检测结果比较 女性HNA抗体检出阳性率为5.77%(9/156)，男性为5.00%(4/80)。男女性HLA抗体阳性率结果比较，差异无统计学意义(χ2=0.000,P=1.000)。见表1。

2.2 男女性无偿献血者回访结果比较 对HNA抗体阳性献血者进行电话回访，询问女性孕育史和输血史，9例HNA抗体阳性女性中，仅1例孕产史为0，均无输血史。询问男性输血史，4例HNA抗体阳性男性均无输血史。

表1 男女性无偿献血者HNA抗体检测结果比较[n(%)]

2.3 HNA抗体阳性标本HNA抗体的特异性结果比较 HNA 1A有7例，HNA 4A有4例，同时检出HNA 1A和HNA 4A、HNA 1A和HNA 1C各1例。见表2。

表2 男女性无偿献血者HNA抗体特异性结果比较[n(%)]

3 讨 论

TRALI是输血相关病死的首要原因，65%～89%的TRALI患者的成分血中均发现抗白细胞抗体[11]。这些抗体的同源抗原是表达于受血者白细胞的HLA-Ⅰ、Ⅱ类和HNA抗原[12]。其中HNA抗原及其抗体在输血、骨髓移植和新生儿中性粒细胞减少等方面具有重要的临床意义，特别是中性粒细胞抗体在非溶血性输血反应中具有重要的临床价值，抗-HNA不仅可引起发热性非溶血性输血反应，还可造成TRALI[13]。 本研究结果表明，156例女性检出HNA抗体9例，阳性率为5.77%；80例男性检出HNA抗体4例，阳性率为5.00%，男女性HNA抗体阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。对HNA抗体阳性者进行电话回访显示，询问女性孕育史和输血史，9例HNA抗体阳性者仅1例无孕产史，均无输血史；询问男性输血史，4例HNA抗体阳性者均无输血史。提示孕产史与HNA抗体的产生有一定的相关性，但是否有输血史则关系不大，因为每次妊娠过程就是1次免疫刺激，孕妇会产生HNA抗体。

本研究结果表明，9例HNA抗体阳性的女性，有7例为HNA 1A抗体阳性，1例为HNA 4A抗体阳性，1例为HNA 1A和HNA 1C抗体阳性；4例HNA抗体阳性的男性，有3例为HNA 4A抗体阳性，1例为HNA 1A和HNA 4A抗体阳性。有研究报道，涉及TRALI的HNA抗体有HNA 1A、HNA 1B、HNA 2A、HNA 3A等抗体，其中以HNA 3A抗体最为常见[14]。本研究女性检出的HNA抗体中HNA 1A比例较大，可能存在一定的TRALI风险，而男性检出的HNA抗体多为HNA 4A，无相应的危险报道，虽然HNA抗体的检出率与性别无关，但由于女性抗体更有可能导致TRALI发生，因此TRALI的发生率与性别可能有一定的相关性。 欧美等发达国家近年来实施输注非女性血浆策略后TRALI的发生率降低，也间接支持本研究。

目前我国临床HNA相关的TRALI鲜有报道，关于人群中HNA抗体的筛查更是甚少，这是因为与HNA的认识不足及检测手段欠缺有关，随着对HNA分子结构及生物特性的深入了解及检测方法的提高，HNA 将会受到重视。本研究通过对河南地区无偿献血人群的HNA抗体分布进行筛查，了解该地区HNA抗体的分布和特异性，分析HNA抗体引起的免疫性输血不良反应，为指导临床用血安全和相关政策的制定提供有力的理论基础。

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Identification of human neutrophil antibodies among volunteer blood donors in one district*

LIUZheng,ZHANGBowei,ZHAOLei,KANGYiqing,MARu,DUJuan,YANGHecai,HUYingchun,CHENGSiguo△

(HenanRedCrossBloodCenter,Zhengzhou，Henan450012,China)

Objective To elucidate the distribution of human neutrophil (HNA) antibodies among volunteer blood donors in Henan and estimate the risk rate of immune-mediated transfusion related adverse reaction caused by HNA antibodies.Methods 156 females and 80 males were collected randomly from volunteer blood donors in Henan.All the samples′ HNA antibodies were detected using LABScreen Multi kit.Results The data showed that among the 236 volunteer blood donors,the positive rate of HNA antibodies was 5.77%(9/156)in females,while the rates were 5.00%(4/80)for males.Among the positive donors,there were 7 anti-HNA 1A,4 anti-HNA 4A,1 anti-HNA 1A/HNA 4A and anti-HNA 1A/HNA 1C.Conclusion The frequency of HNA antibodies in females is same as the males.Our study is to elucidate the distribution of human neutrophil antibodies among volunteer blood donors in Henan and estimate the risk rate of immune-mediated transfusion related adverse reaction caused by HNA antibodies,therefore it could provide theoretical basis for clinical transfusion safety.

HNA; immune-mediated transfusion related adverse reaction; transfusion safety

河南省2013年科技发展计划项目(134300510068)。

刘铮，女，主管技师，主要从事输血的分子生物学研究。△

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.008

A

1673-4130(2016)20-2823-02

2016-05-16

2016-07-13)