湖南永州地区家养犬弓形虫病的血清学调查

廖光宇　刘成　肖建华　陈名海　李阳玉　陈名锋

（1.湖南永州市蓝山县畜牧水产局动物卫生监督所425800；2.湖南永州职业技术学院生物科学技术系刘成425000；3.湖南永州市蓝山县楠市镇动物防疫站425800）

湖南永州地区家养犬弓形虫病的血清学调查

廖光宇1刘成2肖建华3陈名海1李阳玉1陈名锋1

（1.湖南永州市蓝山县畜牧水产局动物卫生监督所425800；2.湖南永州职业技术学院生物科学技术系刘成425000；3.湖南永州市蓝山县楠市镇动物防疫站425800）

为初步调查湖南永州地区家养犬弓形虫感染情况，笔者于2015年5月至2016年4月用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测采集的家养犬血清样本998份，其中，家养犬血清样本896份，流浪犬血清样本102份。检测发现，家养犬弓形虫IgG抗体阳性率23.6%，流浪犬弓形虫IgG抗体阳性率28.43%，平均感染率为24.15%。家养犬弓形虫血清抗体阳性率不同季节间差异显著（P＜0.05），夏季最高，为31.29%；不同性别家养犬弓形虫血清抗体阳性率无显著差异（P＞0.05）。随着年龄增长，家养犬弓形虫抗体阳性率均有明显增长，其中大于5岁的家养犬弓形虫血清抗体阳性率达到了26.16%。本次检测发现，湖南永州地区犬感染弓形虫较普遍，需要进一步提高自身对犬弓形虫病的认识并做好日常防护工作。

弓形虫；血清；检测；犬

弓形虫病是由刚地弓形虫引起的重要人畜共患寄生虫病，以发热、流产、死胎、畸形胎为主要特征，重症者可引起死亡。此外，弓形虫感染与艾滋病（AIDS）有密切的关系。刚地弓形虫是一种呈世界范围分布的能够感染多种动物的寄生性原虫，在我国，1978年崔君兆首次在国内进行流行病学研究，采用统一的正向间接血凝试验（IHA）方法检测全国81963人血清平均感染率为5.17%。与人类关系密切的犬弓形虫感染率也非常普遍，据统计，1985～2006年期间，我国犬弓形虫感染率在0.66%～62.3%之间不等。随着宠物品种和数量的急剧增加，人类与动物接触的日益频繁，通过动物将宠物源人畜共患病传播给人类的风险日益加大，给人类健康和正常生活带来了威胁。因此，无论是就动物本身的健康而言，还是考虑到公众健康，充分了解犬的弓形虫发病及感染情况都具有重要现实意义。为此，笔者于2015年5月至2016年4月运用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法（以下简称ELISA法）对湖南永州地区896只家养犬的弓形虫感染情况进行了调查。

1　材料与方法

1.1.1主要仪器及器材酶标仪（MULTISKAN MK3），购自Thermo公司；台式高速冷冻离心机（5810R），购自德国Eppendorf公司。洗涤器，50ul、100ul精确微量移液器，一次性移液器吸头，稀释样品的U型96孔稀释板等。

1.1.2主要试剂犬弓形虫抗体检测试剂盒，购自广州健仑生物科技有限公司，批号为20141208。试剂盒中包含抗原预包被微孔板条96T、酶结合物（1号液）、洗涤液（2号液）、底物（3号液）、显色液（4号液）、样本稀释液（5号液）、终止液（6号液）、阳性对照血清和阴性对照血清。

1.1.3待检血清采集犬998（1.5ml～2ml/只）只静脉血，3000r/min离心5min，分离血清，置-20℃保存待检。

1.2.1样本稀释用样本稀释液（5号液）将待检血清按1：100稀释。阴、阳对照血清不用稀释，直接加样。

1.2.2加样反应样本检测孔每孔分别加已稀释待检血清100ul。同时设阴性、阳性及空白对照各1孔，取阴性、阳性对照各100ul分别加入反应孔内，空白对照孔仅加入100ul样本稀释液（5号液）。37℃避光反应30min后甩去孔内液体，每孔加洗涤液（2号液）1滴，立即用蒸馏水注满，静置30s后甩去，再直接用蒸馏水洗涤四次，每次均需静置30s，最后一次甩去，拍干。

1.2.3加酶反应除空白对照孔外其余每孔加酶结合物（1号液）2滴，37℃避光反应30min后甩去孔内液体，按1.2.2洗涤步骤进行，拍干。

1.2.4显色反应每孔加底物（3号液）和显色剂（4号液）各1滴，混匀，37℃下避光显色10min，然后加终止液（6号液）1滴，混匀，终止反应（加终止液后蓝色会变为黄色）。

1.3结果判定及统计分析阴性对照接近无色，阳性对照呈明显黄色，表示实验有效。待检孔接近无色表示该标本为阴性，待检孔呈明显黄色表示该标本为阳性。以空白对照调零，用酶标仪（MULTISKAN MK3）于450nm（620nm作参比波长）测定OD450nm值。待检孔OD450nm值大于阴性对照2.1倍者为阳性。当阴性对照OD450nm值低于0.07时按0.07计算。应用SPSS统计分析软件进行统计分析。

2　结果

2015年5月至2016年4月期间，共采集到998份血清样本，其中，家养犬血清样本896份，流浪犬102份，采用ELISA法对犬血清进行了弓形虫IgG抗体的检测，检测结果见表2—1。结果显示，家养犬弓形虫IgG抗体阳性样本212份，阳性率为24.2%，流浪犬弓形虫IgG抗体阳性样本29份阳性率为28.43%，平均感染率为24.15%。

表2—1　永州地区犬弓形虫IgG抗体检测结果

2.2.1不同季节家养犬弓形虫血清抗体阳性率在896份家养犬血清中，不同季节采集的家养犬血清弓形虫抗体阳性率变化较大，检测结果见表2—2。结果显示，夏季弓形虫阳性率最高为31.29%，与阳性率最低的春季15.83%。用配对资料卡方检验分析，二者差异显著（P＜0.05）。

2.2.2不同性别家养犬弓形虫血清抗体阳性率对已知性别的670只家养犬和未知性别的226只家养犬检测结果见表2—3。结果显示，雌性犬血清弓形虫抗体阳性率为25.82%，雄性犬血清弓形虫抗体阳性率为20.53%。用配对资料卡方检验分析，二者差异不显著（P＞0.05）。

表2—2　家养犬血清弓形虫IgG抗体检测结果季节分布

表2—3　不同性别家养犬弓形虫血清抗体阳性率

2.2.3不同年龄段家养犬弓形虫血清抗体阳性率对已知年龄的1474只家养犬的检测结果见表2—4。结果显示，随着犬年龄增长，弓形虫血清抗体阳性率呈逐渐上升趋势。8月龄以内犬弓形虫血清抗体阳性率仅为17.5%，而大于5岁的犬弓形虫血清抗体阳性率达到了26.16%。用配对资料卡方检验分析，两个年龄段之间，犬弓形虫血清抗体阳性率差异显著（P＜0.05）。

表2—4　各个年龄阶段家养犬弓形虫血清抗体阳检测结果

3　小结与讨论

3.1目前弓形虫病免疫预防仍处于实验研究阶段，尚无安全有效、保护力强、持续时间长和易于保存的弓形虫疫苗使用，因此，家养犬的抗体阳性率可以反映出永州地区弓形虫正在感染或曾经感染的状况，具有重要的流行病学意义。本次检测发现，湖南永州地区犬感染弓形虫较普遍，平均感染率为24.15%，这一调查结果应引起宠物主人的高度重视，需要进一步提高自身对弓形虫病的认识并做好日常防护工作。

3.2不同生活习惯犬的弓形虫血清抗体阳性率不同，流浪犬阳性率最高，为28.43%，家养犬为23.6%，可能与犬的饮食有关，流浪犬接触感染源的机会较多，而作为宠物的家养犬，有些是长期生活在室内，饲喂商品犬粮，不接触生肉类，所以感染源的机会较低。另外，家养犬一般都有外出遛的习惯，也可能增加了家养犬感染弓形虫的机会［5］。犬弓形虫病分布于世界各地，感染范围很大，可呈先天性感染或获得性感染。许多学者认为经肠道感染可能是犬天然弓形虫病的主要感染形成。因此，犬主人在携犬外出时，应用引导绳牵引，避免犬在外捡食，同时在家饲喂熟食或成品犬粮，避免犬感染弓形虫病。

3.2检测发现，家养犬弓形虫血清抗体阳性率不同季节间差异显著（P＜0.05），夏季最高，为31.29%；不同性别家养犬弓形虫血清抗体阳性率无显著差异（P＞0.05）；随着年龄增长，家养犬弓形虫抗体阳性率均有明显增长，其中大于5岁的家养犬弓形虫血清抗体阳性率达到了26.16%。建议家养犬外出遛时应避开炎热高温时节。

（略）