HER-2蛋白、VEGF在胃癌组织中的表达及相互关系

周强,张华勇

(南京鼓楼医院，1. 病理科；2.风湿免疫科,江苏 南京　210008)



HER-2蛋白、VEGF在胃癌组织中的表达及相互关系

周强1,张华勇2

(南京鼓楼医院，1. 病理科；2.风湿免疫科,江苏 南京210008)

目的：探讨表皮生长因子受体(HER)-2蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌组织中的表达及相互关系。方法：收集行胃癌根治术的胃癌患者的石蜡标本共125例为观察组，选取距肿瘤组织>5 cm的癌旁正常组织的石蜡标本50例作为对照组。各组标本分别行HER-2、VEGF免疫组织化学染色，观察染色结果并计算阳性染色率。分析观察组胃癌组织中HER-2与VEGF表达间的关系。结果：观察组HER-2、VEGF的阳性染色率明显高于对照组，经比较差异有统计学意义(P<0.05)。对125例观察组胃癌组织中HER-2和VEGF的表达率进行Spearman等级相关分析，结果显示两者表达呈显著正相关(r=0.231，P<0.05)。结论：HER-2、VEGF可能在胃癌的发生发展中发挥一定的作用，HER-2可能通过上调VEGF的表达促进肿瘤新生血管生成。

胃癌;血管内皮生长因子;表皮生长因子受体-2

胃癌为常见的恶性肿瘤之一，一般确诊时多处于晚期，姑息治疗并不能显著延长患者的生存期。近年来，愈来愈多的学者开始从分子靶向水平来研究肿瘤治疗，探索肿瘤治疗的新手段[1]。正常情况下，人表皮生长因子受体(HER)-2基因仅在胎儿上皮组织表达，当人体受到某些致癌因素刺激后成为激活状态，加速细胞向恶性方向转化，促使癌细胞转移[2-3]。血管生成在肿瘤的发生和发展中发挥着重要的作用，肿瘤局部生长浸润及远处转移均依赖于血管的生成。血管表皮生长因子(VEGF)是目前发现最重要的血管生成刺激因子，在正常组织中不表达或低表达，但在大部分恶性肿瘤中均为过表达状态，并能促进肿瘤细胞的转移[4]。本研究通过研究胃腺癌组织中HER-2、VEGF的表达及相互关系，以期为胃癌的临床诊断、多靶点治疗提供检测指标和分子生物学依据。

1　资料与方法

1.1一般资料

收集2012年5月至2014年12月期间于南京鼓楼医院接受过胃癌根治术的胃癌患者的石蜡标本共125例(观察组)。入组患者均经组织学证实为胃腺癌，术前均未行放化疗，且资料标本完整(有完整原癌病灶、淋巴组织及癌旁组织)。其中男70例，女55例；年龄30～75岁，平均(56.6±5.3)岁。根据Lauren组织学分型：肠型81例，弥漫型38例，混合型6例；根据细胞分化程度，低分化79例，中分化28例，高分化18例；根据TNM分期标准：Ⅰ期36例，Ⅱ期37例，Ⅲ期44例，Ⅳ期8例；有淋巴结转移59例，无淋巴结转移66例。另选取距肿瘤组织>5 cm的癌旁组织50例的石蜡标本作为对照组。

1.2方法

将石蜡标本连续切片(片厚4 μm)，分别行HER-2、VEGF免疫组织化学染色：65℃烤片2～4 h，石蜡切片脱蜡，蒸馏水冲洗，枸橼酸盐缓冲液浸泡修复抗原，蒸馏水冲洗，3%H2O2蒸馏水冲洗3次，PBS冲洗3次，滴加一抗，37℃孵育，PBS冲洗，滴加试剂1，37℃孵育，滴加试剂2，37℃孵育，PBS冲洗，DAB显色5 min，自来水冲洗，苏木素复染，脱水封片。标记抗体购自瑞士Roche公司，由两位病理科医生进行阅片。HER-2阳性染色定位于细胞膜，呈棕黄色颗粒，以已知阳性组织切片为阳性对照，以PBS替代一抗作为阴性对照。以Hercep Test评分系统进行评价[5]：>10%有不完整胞膜染色记为(+)，>10%的肿瘤细胞有较弱至中度完整的膜染色(++)，>10%的细胞有较强的完整膜染色(+++)，≤10%的细胞膜染色记为(一)，(-)和(+)为阴性表达，(++)和(+++)为阳性表达。VEGF阳性物质定位于细胞质，根据染色强度及染色细胞百分比进行联合评分：染色强度无记为0分；染色强度弱记为1分；染色强度中等记为2分；染色强度强记为3分；未见染色，0分；<25%染色，1分；26%～50%染色，2分；>50%染色，3分。两者加和得分0～2分记为阴性，3～6分均记为阳性。

1.3观察指标

观察HER-2、VEGF在胃癌及癌旁组织中的表达，比较各组阳性染色率；分析观察组胃癌组织中HER-2与VEGF表达间的关系。

1.4统计学分析

采用SAS 9.0 软件录入和分析数据，定性资料采用百分比表示，采用卡方检验，四格表资料采用卡方分析，相关性分析采用Spearman等级分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1HER-2蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达

观察组有13例HER-2表达阳性，阳性率为10.4%(13/125)；对照组无HER-2阳性表达病例，两组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。染色切片见图1。

2.2VEGF蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达

VEGF阳性染色主要分布于细胞质，阳性染色为棕黄色颗粒。观察组有78例VEGF表达阳性，47例表达阴性，阳性表达率为62.4%(78/125)；对照组有12例VEGF表达阳性，38例表达阴性，阳性表达率为24.0%(12/50)，两组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。染色切片见图2。

2.3观察组HER-2与VEGF表达间的关系

对125例观察组胃癌组织中HER-2和VEGF的表达率进行Spearman等级相关分析，结果显示两者表达呈显著性正相关(r=0.231，P<0.05)。见表1。

表1　胃癌组织中HER-2和VEGF表达间的关系

3　讨论

人HER-2原癌基因定位于染色体17q21，HER-2蛋白具有酪氨酸蛋白激酶活性，正常成人体内只有极少数组织有少量表达，而在人类恶性肿瘤组织中呈现为不同程度的扩增和过表达。HER-2的基因扩增、过量表达贯穿于肿瘤的发生、发展进程中，过表达的HER-2以聚合在细胞表面的方式激活自身，参与肿瘤细胞的增殖分化、浸润转移以及抗凋亡过程[6]。一般情况下，HER-2基因处于沉默状态，当受到某些致癌因素作用后，其表达成为激活状态，基因扩增失控[7]。研究[8]表明，HER-2基因的异常扩增及过表达与恶性肿瘤的发生发展关系密切，在结肠癌、胃癌、膀胱癌等一些肿瘤中均发现有HER-2蛋白的过表达。免疫组化法或荧光原位杂交技术(FISH)均可用于评估HER-2表达。本研究通过免疫组织化学染色的方法检测到HER-2蛋白在125例胃癌组织中的阳性表达率为10.4%，而癌旁组织中未见表达，提示HER-2主要参与肿瘤细胞的增殖、生长浸润等过程，而非肿瘤的形成机制。马德等[9]报道，胃癌患者HER-2蛋白表达率为10%～30%，本研究表达率为10.4%，与研究结果一致。目前针对乳腺癌HER-2高表达的单克隆抗体Herceptin已在临床上得到了广泛的应用，且效果良好，有研究[10]发现Herceptin在体外实验中能够抑制胃癌细胞生长，《2016年版中国胃癌HER-2检测指南更新》中指出HER-2是胃癌Herceptin治疗的预测因子，经病理确诊的胃癌患者均应接受HER-2检测。因此，可以肯定HER-2检测对胃癌的预后判断及治疗有一定的临床意义。

肿瘤的生长与转移有赖于肿瘤血管新生，肿瘤干细胞转分化为内皮细胞，调控新生血管向肿瘤方向生长，为肿瘤提供氧气及营养物质，并及时运走代谢产物，促使肿瘤快速生长。现一致认为，血管生成对肿瘤的生长尤为重要，其中VEGF是迄今研究证实作用最强的促血管生成因子[11]，其作为一个重要的促血管生成因子，在原位诱导血管生成的作用十分强大，能够特异性引起血管内皮细胞增殖。本研究结果显示，125例观察组有78例VEGF表达阳性，阳性表达率达62.4%，明显高于癌旁组织的24.0%，表明VEGF在胃癌的发生发展中发挥了重要作用。

关于肿瘤中HER-2与VEGF的关系，在某些乳腺癌、鼻咽癌、结肠癌等的研究中有所报道，认为HER-2的表达增加会引起VEGF水平的显著升高[12-13]。在Honma[14]的一项关于胃癌的报道中指出，癌细胞组织中VEGF的血管生成机制可能与HER-2的活性有关，HER-2过量表达能够诱导VEGF的表达，并促进肿瘤微血管的生成，可能存在的机制是：HER-2配体经由P38-MAPK信号通路刺激细胞核因子κB(NF-κB)，引起VEGF上调。沈琳等[15]研究指出，VEGF的表达水平受HER-2信号通路的正性调节影响，抑制HER-2的信号传导通路则能够降低VEGF的表达水平。本研究对125例观察组胃癌组织中HER-2和VEGF的表达率进行Spearman等级相关分析，结果显示两者表达呈显著性正相关，提示HER-2和VEGF可能共同参与胃癌新生血管的调控，过量表达的HER-2可能通过正向调节VEGF的表达以促进肿瘤新生血管的生成，为分子靶向治疗药物在胃癌的应用提供了一定的理论基础。

[1]戴飞飞,池苗苗,王亚坤,等.Her-2阳性进展期胃癌靶向治疗现状[J].中国肿瘤,2015,24(5):408-412.

[2]Rivera F,Carrato A,Grávalos C,etal.Recommendations on current approach to gastric cancer[J].Clin Transl Oncol,2009,11(8):518-525.

[3]王哲近, 麻忠武, 陈峰, 等. 癌组织中Her-2、VEGF-C的表达及意义[J]. 医学研究杂志, 2015, 44(6): 130-133.

[4]Kang YK,Rha SY,Tassone P,etal.A phase IIa dose-finding and safety study of first-line pertuzumab in combination with trastuzumab,capecitabine and cisplatin in patients with HER2-positive advanced gastric cancer[J].Br J Cancer,2014,111(4):660-666.

[5]Hofmann M,Stoss O,Shi D,etal.Assessment of a HER2 scoringsystem for gastric cancer:results from a validation study[J].Histopathology,2008,52(7):797-805.

[6]马莹,宋印利,包颖.EGFR、HER-2、VEGF及IGF-1R在胃癌组织中的表达及其与临床病理参数相关性分析[J].哈尔滨医科大学学报,2014,48(3):191-194.

[7]Satoh T,Xu RH,Chung HC,etal.Lapatinib plus paclitaxel versus paclitaxel alone in the second-line treatment of HER2-amplified advanced gastric cancer in Asian populations:TyTAN-a randomized,phase III study[J].J Clin Oncol,2014,32(19):2039-2049.

[8]高丹丹,刘磊,白玉贤.晚期胃癌化疗及分子靶向治疗研究进展[J].中国肿瘤临床,2012,20(23):1978-1981.

[9]马德,陈静,陆网坤,等.Her-2蛋白在胃癌组织中的表达及其临床病理意义[J].肿瘤药学,2015,5(5):368-371.

[10]Ma L,Zhang G,Miao XB,etal.Cancer stem-like cell properties are regulated by EGFR/AKT/β-catenin signaling and preferentially inhibited by gefitinib in nasopharyngeal carcinoma[J].FEBS J,2013,280(9):2027-2041.

[11]Won E,Janjigian YJ,Ilson DH.HER2 directed therapy for gastric/esophageal cancers[J].Curr Treat Options Oncol,2014,15(3):395-404.

[12]王进,曾祥,胡伟民.IGF-1R、EGFR、VEGF、HER2在胃癌组织中的表达及与其预后的关系[J].实用癌症杂志,2012,27(5):468-471,485.

[13]Palacio S,Loaiza-Bonilla A,Kittaneh M,etal.Successful use of Trastuzumab with anthracycline-based chemotherapy followed by trastuzumab maintenance in patients with advanced HER2-positive gastric cancer[J].Anticancer Res,2014,34(1):301-306.

[14]Honma Y,Shimada Y,Takashima A,etal.Efficacy of S-1 plus cisplatin combination chemotherapy in patients with HER2-positive advanced gastric cancer[J].Int J Clin Oncol,2014,19(5):863-870.

[15]沈琳,徐建明,冯奉仪,等.曲妥珠单抗联合化疗一线治疗人表皮生长因子受体2阳性无法手术的局部进展期或转移性胃或胃食管结合部腺癌的多中心随机对照Ⅲ期临床试验中国亚组报告[J].中华肿瘤杂志,2013,35(4):295-300.

(学术编辑：龙琼先)

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Expressions of HER-2 protein and VEGF in gastric cancer tissues and their mutual relationships

ZHOU Qiang1,ZHANG Hua-yong2

(1.DepartmentofPathology;2.DepartmentofRheumatology,NanjingDrumTowerHospital,Nanjing210008,Jiangsu,China)

Objective：To explore the expressions of human epidermal growth factor receptor 2(HER)-2 protein and vascular endothelial growth factor (VEGF) in gastric cancer tissues and their mutual relationships.Methods：Paraffin samples from 125 patients with gastric cancer who received radical operation for gastric cancer served as observation group,while those from normal tissues >5 cm away from cancerous tissues in 50 patients as control group.Immunohistochemical staining of HER-2 and VEGF were conducted to the samples in both groups to observe the staining results and calculate positive staining rate.And the relationship between HER-2 and VEGF in gastric tissues in observation group was analyzed.Results：Observation group was markedly higher in the positive staining rates of HER-2 and VEGF than control group,and the differences were significant (P<0.05).Spearman rank correlation analysis was performed to analyze the expression rates of HER-2 and VEGF in the gastric tissues in observation group,and the results indicated that HER-2 expression was in positive association with VEGF (r=0.231,P<0.05).Conclusion：HER-2 and VEGF may play certain function in the development and progression of gastric cancer,and HER-2 may increase the tumor angiogenesis by up-regulating VEGF.

Gastric cancer;Human epidermal growth factor receptor;Vascular endothelial growth factor

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.05.019

2016-05-10

周强(1974-)，男，主管技师。E-mail：7591042@qq.com

张华勇，E-mail：13770560567@163.com

时间：2016-10-2511∶31

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20161014.1716.038.html

1005-3697(2016)05-0690-03

R735.2

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