阜宁县2011～2015年生猪口蹄疫血清抗体监测报告

吴文开

（江苏省阜宁县畜牧兽医站，江苏阜宁 224400）

阜宁县2011～2015年生猪口蹄疫血清抗体监测报告

吴文开

（江苏省阜宁县畜牧兽医站，江苏阜宁 224400）

目的:调查2011年～2015年间阜宁县19个镇（区）口蹄疫疫苗免疫保护率情况，为阜宁地区生猪口蹄疫强制免疫性疾病的免疫方案的制定和完善提供参考。结论:阜宁县生猪口蹄疫抗体阳性率在2011年～2015年间总体效果较好，能达到国家规定的免疫效果，但还没有达到100% 的免疫效率，建议坚持猪口蹄疫疫苗的免疫方案。

阜宁县猪口蹄疫抗体

口蹄疫（Foot-and-mouth disease，FMD）是生猪养殖中重要的传染病[1］。危害严重，死亡率最高的可达25%～50%[2］。这些疫病的存在直接影响了养猪的效益，进而影响到公共卫生的安全。我国在20世纪80年代开始就对猪瘟实行以强制免疫，2002年以后，采取了全面强制免疫与扑杀相结合的综合防控策略来防控猪口蹄疫。如何制定合理的免疫程序，关系着猪场生产稳定与健康发展[3］。通过血清抗体跟踪检测结果，结合生产数据观察，制定合理的免疫程序及调整后的效果，对于养殖场的疾病防控和生产成绩的提高极为有利的。

为了掌握江苏省阜宁县规模猪场和散养农户饲养的生猪猪瘟、猪蓝耳病、猪口蹄疫免疫抗体水平，有重点地开展相应的免疫预防，制定科学合理的免疫程序，分别于2011～2015年每年的5月分5批次采集阜宁县2规模猪场和散户的生猪（50～75kg体重）血样进行生猪口蹄疫血清抗体检测，以指导阜宁县生猪口蹄疫强制免疫方案的制定和实施，最终提高阜宁县生猪的健康生产。

1　材料与方法

1.1主要试剂

猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒购自上海优耐特生物医药有限公司。

1.2主要仪器

DENLEY DRAGON Wellscan MK 3酶标仪，PYX-DHS数字显示隔水式电热恒温培养箱型号，微量反应板及封条，TGL-168离心机型号，10～1000μl移液枪及300μl排枪。

1.3样本来源

分别于2011年～2015年每年5月分5批次采集阜宁县19个镇区（街道）规模猪场和散户的生猪（50～75kg体重）血样进行生猪口蹄疫血清抗体检测，累计采集样品数量为6409份，其每个镇区（街道）的采集数量详见表1。

表1　2011年～2015年5批次血清样品采集记录表

1.4全血采集后处理

每次抽血后，斜45°室温放置30min后立即放入有冰块的疫苗运输箱内带回阜宁县畜牧兽医站实验室，将血清倒入2mlEP管中，5000r/min离心10min，吸取上清移入另一干净的2ml EP管中，做好标记，放于-20℃冰箱保存备用。

1.5血清抗体检测

每批次样品全部采集完后，严格按相应试剂盒的操作说明进行猪口蹄疫的血清抗体ELISA检测。

1.6FMD抗体ELISA法检测

使用上海优耐特生物医药有限公司的猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒检测。使用前所有试剂应恢复至室温（18℃～25℃）。浓缩洗涤液用蒸馏水10倍稀释成洗液工作液。ELISA操作步骤如下：

（1）取出试剂盒中的样品是稀释板。选择两个阴性对照和两个阳性对照孔。

（2）在稀释板的各孔中加入200μl样品稀释液，在相应的孔中分别加入10μl对照血清或被检测血清，加样器重复吹洗3次。

（3）取出抗原包被板，分别从稀释板上取稀释后的对照血清和被检血清各100μl，加入至抗原包被板的相应孔中，加盖封膜，37℃恒温培养箱中孵育60min。

（4）吸取各孔的液体弃去。300 μl洗涤工作液洗涤板孔3次。每次洗涤后应吸去孔内的液体，在最后一次洗涤液吸去后，将每块板中残留的洗涤液扣掉。

（5）酶结合物工作液配制：用酶结合物稀释液将酶结合物作100倍稀释，现配现用。每孔加入100μl酶结合物工作液，封膜后37℃孵育30min。

（6） 重复步骤（4）。

（7）TMB底物A液和TMB底物B液等量混合后每孔加入100μl TMB底物工作液，封膜后37℃孵育15min。

（8） 10min后每孔立即加入100μl终止液终止反应。

（9）测量样品与对照孔在450nm 处的吸光值。

结果有效性判定：阴性对照平均OD值应小于等于0.2，每个阳性对照的平均值应大于0.5且小于等于2.0，则为有效，否则试验无效。临界值=0.23*阴性对照空平均OD值。

结果判定：

被检测样品孔OD值小于临界值时，为阴性，即为抗口蹄疫病毒VP1结构大白白抗体阴性。

被检样品OD值大于等于0.8时，判为阳性。

2　猪口蹄疫抗体检测结果

猪口蹄疫血清抗体流行病学调查结果见表2至表3。阜宁县猪口蹄疫血清抗体阳性率从2011年到2015年间分别为83.9%，86.9%，90.0%，93.8%和94.8%，抗体阳性率较高，且呈逐年升高趋势。说明阜宁县口蹄疫免疫效果良好。

表2　2011年～2015年口蹄疫抗体检测结果

表3　2011年～2015年口蹄疫抗体检测结果

3　讨论

《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）》指出[4］，随着畜牧业生产规模不断扩大，养殖密度不断增加，畜禽感染病原机会增多，病原变异概率加大，新发疫病发生风险增加。

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触性和可快速远距离传播的动物疫病。属牛、羊、猪和骆驼等偶蹄兽急性、热性、高度接触性传染病。现在的FMD已经可以在不同的地区，一年四季皆可发生[5］。口蹄疫病毒在进化过程中变异很大，各亚型之间不一定有交叉保护[6］，对口蹄疫的防治带来了极大的困难。口蹄疫疫苗是通过刺激机体产生特异性的抗体，进而抑制和杀灭口蹄疫病毒达到保护动物健康作用的，在预防和控制动物口蹄疫的发生和流行方面做出了巨大的贡献。为落实《国家疫病防控中长期规划》，促进口蹄疫防控工作开展.自2013年9月1日起. 国家强制免疫用口蹄疫疫苗将逐步执行新的疫苗质量标准，新生产的口蹄疫灭活疫苗及合成肽疫苗效力检验标准由每头份3PD50提高到6PD50：新生产的口蹄疫灭活疫苗内毒素每头份疫苗不超过50EU。所以，对口蹄疫疫苗免疫后的血清抗体监测，有助于口蹄疫的防控。龚小莉[23］对南川地区2012年猪口蹄疫血清抗体进行了检测评估分析，结果平局合格率达到89.7%，按照农业部农医发[2012］1号文件规定的标准，全年各月抗体合格率均超过标准。说明阜宁地区2012-2015年口蹄疫疫苗免疫良好。本研究发现从2011年5月到2015年5月，阜宁县猪口蹄疫血清抗体阳性率分别为83.9%，86.9%，90.0%，93.8%和94.8%，均达到了农业部农医发〔2012〕1号文件规定的标准，且随着时间的推移，到2015年平均阳性率近95%，说明阜宁县最近5年内猪口蹄疫疫苗免疫效果良好，需要坚持执行猪口蹄疫免疫方案。然而近两年来口蹄疫其他毒株如A型毒株的感染率正在升高，必须引起足够的重视。

疫苗免疫的关键在于疫苗的质量和疫苗接种程序及技术。影响疫苗免疫效率主要有：疫苗质量差，滴度不够，过期；疫苗污染；防疫操作不规范，交叉感染意识不强；春、秋防疫措施的缺陷；母源抗体的干扰及免疫程序不合理等。所以一般疫苗免疫需要注意以下几个注意事项：（1）使用正规厂家生产的疫苗；（2）严格按照产品说明书的要求对疫苗和稀释液进行保管、运输和使用；（3）注意疫苗包装完整与过期与否；（4）免疫前注意预免疫猪群的健康状态；（5）选择合适免疫方式及合适的注射针头，做到一畜一针头，避免交叉感染；（6）疫苗接种前、后各一周内，严禁使用抗病毒药物或抗生素。（7）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行消毒处理，严禁随意丢弃。

4　结论

在2011年到2012年期间对江苏省阜宁县19个镇区（街道）内各地区口蹄疫血清学调查发现的猪口蹄疫血清抗体阳性率总体较高，免疫保护力呈逐渐递增趋势，免疫效果良好，但还未达到100%保护率，需坚持执行疫苗免疫方案。

[1]董保豫，犹银俊，周启泽，等.猪瘟、猪口蹄疫、高致病性猪蓝耳病疫苗不同组合免疫效果观察[J］.贵州畜牧兽医，2011，35 （5）：16-18.

[2]Alexandrov T，Stefanov D，Kamenov P，Miteva A，Khomenko S，Sumption K，Meyer-Gerbaulet H，Depner K. Surveillance of footand-mouth disease（FMD）in susceptible wildlife and domestic ungulates in Southeast of Bulgaria following a FMD case in wild boar[J］.Veterinary microbiology，166（1-2）：84-90.

[3]李国友，叶阳.血清抗体跟踪监测蓝耳病苗和猪瘟苗抗体水平及相互影响[J］.今日畜牧兽医，2007，（9）：7-10.

[4]马雪莲.对口蹄疫的综合防治的探究[J］.畜牧兽医，2013，（6）：188.

[5]刘玉梅，赵利平，刘国英，等.应用ELISA方法判定口蹄疫疫苗毒株血清学相关关系[J］.广东畜牧兽医科技，2013，38（3）：29-32.

[6]白晓亮，张庆德.使用口蹄疫疫苗的必备知识[J］.畜牧兽医科技信息，2013，（5）：31.

本项目受2015年省年农业三新项目资助