口蹄疫、猪瘟和高致病性猪蓝耳病三种疫苗同步两点免疫新技术研究与应用

2016-11-16周建国张应国段博芳杨余山罗曼榕濮永华匡继才刘绍阳彭正啟黄

中国畜牧兽医文摘 2016年7期

关键词：免疫抗体耳病活疫苗

周建国张应国段博芳杨余山罗曼榕濮永华匡继才刘绍阳彭正啟黄杰

（1.云南省动物疫病预防控制中心，云南昆明　650051；2.保山市动物疫病预防控制中心，云南保山　678000；3.云南省兽医生物制品研制中心，云南保山 678000；4.施甸县动物疫病预防控制中心，云南施甸 678200）

口蹄疫、猪瘟和高致病性猪蓝耳病三种疫苗同步两点免疫新技术研究与应用

周建国1张应国1段博芳1杨余山1罗曼榕1濮永华2匡继才2刘绍阳3彭正啟3黄杰4

（1.云南省动物疫病预防控制中心，云南昆明650051；2.保山市动物疫病预防控制中心，云南保山678000；3.云南省兽医生物制品研制中心，云南保山 678000；4.施甸县动物疫病预防控制中心，云南施甸 678200）

本研究采用猪口蹄疫（FMD）灭活疫苗和合成肽疫苗、猪瘟（CSF）脾淋活疫苗和高致病性猪蓝耳病（HPPRRS）活疫苗同步两点免疫技术，对被免疫猪只分别进行了小组试验、免疫持续期观察等试验研究，并用ELISA方法定期对各阶段血清抗体进行检测，旨在探索一种适合基层应用的FMD、CSF、HPPRRS三种疫苗同步分点注射免疫技术，提高免疫密度和免疫效果，降低基层防疫人员劳动强度，提高工作效率，破解基层强制免疫工作难题。本研究得出下列结论:（1）建立了口蹄疫、猪瘟和高致病性猪蓝耳病三种疫苗同步两点免疫技术方法并证明了其临床应用的可行性与科学性。（2）口蹄疫、猪瘟和高致病性猪蓝耳病三种疫苗同步两点免疫证明了三种疫苗同步分点免疫相互间未出现免疫干扰现象。同时，对应用三种疫苗同步两点免疫技术中各病种免疫效果的同步评估需在免疫后35～40d期间进行监测为佳。（3）三种疫苗同步两点免疫技术列入云南省2013年重大动物疫病免疫方案，在全省范围内推广应用至今。本研究证明了三种疫苗同步分点注射的可行性和科学性，并将三种疫苗同步两点免疫技术大面积应用于免疫工作，解决了困扰基层临床免疫的难点问题，为其临床应用提供了科学依据和数据支持，在生产实际的临床应用中具有重要意义。

口蹄疫猪瘟蓝耳病疫苗两点免疫技术研究与应用

口蹄疫（Foot-and-mouth Disease，FMD）、猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS），又称“蓝耳病”、猪瘟（Swine Fever；Hog Cholera，CSF）是近年来危害养猪业的主要传染病，世界动物卫生组织将口蹄疫、猪瘟列为 A 类家畜传染病，将蓝耳病列为B 类传染病，并将这三种疾病列为世界范围内重要传染病研究病种[1-5］。我国对上述三种疫病采取强制免疫和扑杀相结合的综合防控措施，国家发布的免疫计划中，高致病性猪蓝耳病、口蹄疫和猪瘟的免疫程序是散养生猪每年春秋两季各免疫1次，规模养殖场按程序化进行免疫，三种疫苗要分3个阶段3次注射免疫，每次免疫间隔一定时间。随着这3种疫病陆续纳入国家重大动物疫病强制免疫病种，基层防疫员按传统方免疫式每季防疫要完成3种动物疫病的免疫任务需要分3个阶段开展强制免疫工作，免疫周期长达60～75d，工作量较以往呈几何倍数增加，劳动强度非常大，工作效率低、疫苗利用率低。为探索一种适合基层生猪口蹄疫、猪瘟和高致病性猪蓝耳病同步免疫的新技术，优化免疫程序，降低基层防疫人员劳动强度，提高工作效率，提高免疫质量，破解强制免疫工作中的难点问题，本研究在猪口蹄疫（灭活疫苗、合成肽疫苗）、猪瘟脾淋活疫苗高致病性猪蓝耳病活疫苗三种疫苗同步三点免疫技术研究与应用[6］基础上，采用三种疫苗同步两点免疫新技术，通过小组试验、免疫持续期观察试验研究，建立了适合临床操作且免疫效果理想的生猪三种疫苗同步两点注射一次完成的免疫技术方法（生猪“321”免疫新技术）。

1　材料与方法

1.1实验动物和疫苗

选取45～60日龄断奶仔猪，且满足口蹄疫、猪瘟和高致病性猪蓝耳病基础抗体和病原同时为阴性，试验地点为云南省兽医生物制品研发中心。

猪O型口蹄疫合成肽疫苗为申联生物医药（上海）有限公司产品，批号20111001。猪O型口蹄疫灭活疫苗为中牧实业股份有限公司产品，批号20120303001。猪瘟活疫苗（脾淋源）为云南生物制药有限公司产品，批号20120302。高致病性猪蓝耳病活疫苗（猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗NVDC-JXA1株）为洛阳普莱柯生物工程股份有限公司产品，批号1202021。

1.2试剂和仪器

口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒（阻断ELISA）为韩国金诺（北京金诺百特科技有限公司）产品，批号107SD298。猪瘟病毒抗体检测试剂盒（阻断ELISA）为韩国金诺（北京金诺百特科技有限公司）产品，批号107SD340。LSI猪繁殖和呼吸综合征抗体检测试剂盒（间接ELISA）为北京天之泰生物科技有限公司产品，批号5—VE7PRA—024。

酶标仪为安图实验仪器（郑州）有限公司产品，型号：PHOMO

1.3免疫试验分组与免疫方法

为确保各免疫组免疫剂量，各病种疫苗免疫剂量均为1.2头份。

第1组，30头，口蹄疫合成肽疫苗、猪瘟和高致病性猪蓝耳病三种疫苗同步两点免疫注射组，即口蹄疫合成肽疫苗于颈部左侧注射，在同等规格下将猪瘟疫苗和高致病性猪蓝耳病疫苗用猪瘟稀释液按1：1：1比例进行稀释后于颈部右侧注射。

第2组，30头，口蹄疫灭活疫苗、猪瘟和高致病性猪蓝耳病三种疫苗同步两点免疫注射组，即口蹄疫灭活疫苗于颈部左侧注射，在同等规格下将猪瘟疫苗和高致病性猪蓝耳病疫苗用猪瘟稀释液按1：1：1比例进行稀释后于颈部右侧注射。

第3组，17头，口蹄疫合成肽疫苗单苗免疫对照组，颈部左侧深部肌肉注射。

第4组，18头，口蹄疫灭活疫疫苗单苗免疫对照组，颈部左侧深部肌肉注射。

第5组，18头，猪瘟疫苗单苗免疫对照组，颈部右侧深部肌肉注射。

第6组，21头，高致病性猪蓝耳病疫苗单苗免疫对照组，颈部深部肌肉注射。

第7组，21头，免疫效果持续期观察试验组，即口蹄疫、猪瘟和高致病性猪蓝耳病三种疫苗同步两点免疫效果持续期观察免疫组，即口蹄疫合成肽疫苗于颈部左侧注射，猪瘟疫苗和高致病性猪蓝耳病疫苗用猪瘟稀释液按1：1：1比例进行稀释后于颈部右侧注射。

1.4抗体检测和观察

第1～7组免疫后每15d采集1次血清，进行各组相应病种免疫抗体转阳情况检测，其中1～6组检测4次。第7组检测8次。

各组实施免疫后观察24h，主要观察精神、饮食和排泄物等有无异常情况。

1.5统计学分析

采用SAS 8.0统计分析软件进行卡方检验。P≥0.05为差异不显著，0.01≥P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。

2　结果

到并高于国家要求，至免疫后60d监测时仍高于国家要求以上。统计学分析，免疫后15～60d第1组与第6组之间、第2组与第6组之间的差异极显著（P＜0.01），而30～60d抗体转阳率第1组与第6组之间、第2组与第6组之间的差异不显著（P≥0.05）。（见表1）

2.1试验免疫效果

2.1.1免疫抗体

第1组、第2组与第5组猪瘟免疫抗体转阳率结果相比较，三组均于免疫后15d达到并高于国家要求，3个试验组免疫抗体转阳率至免疫后60d监测时转阳率仍保持100%。统计学分析，免疫后15～60d第1组与第5组、第2组与第5组之间的差异不显著（P≥0.05）。（见表1）

王加启等[38]利用瘤胃持续模拟装置研究了日粮精粗比为7∶3、1∶1和3∶3时对NDF降解率的影响，结果表明日粮精粗比为1∶1时，NDF降解率最高，当精粗比增加到7∶3时，NDF降解率降低。赵祥等[39]报道，绵羊瘤胃中不同精粗比TMR的NDF有效降解率随精料水平提高而降低。胡琳等[40]研究了以木薯茎叶为粗料、不同精粗比全混合日粮养分在山羊瘤胃中的降解率，结果表明日粮精粗比为5∶5时NDF有效降解率显著高于精粗比为2∶8、3∶7、4∶6、6∶4和7∶3的实验组（P＜0.05）。

第1组、与第3组口蹄疫合成肽疫苗免疫抗体转阳率相比较，两组均于免疫后30d达到并高于国家要求，并至免疫后60d监测仍高于国家要求以上。统计学分析，免疫后15～60d两组之间差异极显著（P＜0.01），而30～60d两组之间差异不显著（P≥0.05）（见表1）

第2组、第4组口蹄疫灭活疫苗免疫抗体转阳率结果相比较，两组于免疫后45d达到并高于国家要求，至免疫后60d时检测抗体转阳率仍高于国家要求。统计学分析，免疫后15～60d两组之间的差异极显著（P＜0.01），而45～60d两组之间差异不显著（P≥0.05）。（见表1）

第1组、第2组、第6组高致病性猪蓝耳病免疫抗体转阳率结果相比较，三组高致病性猪蓝耳病免疫抗体转阳率均于免疫后30d达

表1 各免疫组免疫抗体转阳率

2.1.2免疫抗体持续期效果

猪瘟和高致病性猪蓝耳病均在免疫后30d达到国家要求标准，口蹄疫于免疫后45d达到国家要求标准以上，且三种疫病有效免疫抗体维持期长，至免疫后120d时口蹄疫与猪瘟免疫抗体转阳率仍为100%，高致病性猪蓝耳病免疫抗体转阳率仍为77.78%。（见表2）

表2　免疫抗体持续期抗体转阳率

2.2免疫应激反应

各试验组在免疫后24h内均未出现精神沉郁、饮食减退、呕吐、腹泻和死亡等免疫应激反应情况。

3　讨论

综合分析，采用“321”免疫技术的第1组、第2组各病种各阶段免疫抗体产生的规律特点，猪瘟活疫苗、口蹄疫合成肽疫苗、口蹄疫灭活疫苗、高致病性猪蓝耳病活疫苗分别于免疫后15d、30d、45d、30d达到国家要求，免疫抗体持续期至免疫后120d以上，三种疫苗同步两点免疫未表现各疫苗间相互干扰现象，且可同步产生有效免疫抗体，扩大应用试验与小组试验免疫抗体产生规律较为一致，无论是免疫效果还是实际可操作性均优于与之前报告[6］的三种疫苗同步三点免疫，更适用于基层防疫推广应用。同时，研究结果提示，对三种疫苗同步两点免疫有效抗体的同步评估需在免疫后35～40d期间为佳。无论是免疫效果还是实际可操作性均优于三点免疫。

对应用三种疫苗同步两点免疫技术中各病种免疫效果的同步评估需在免疫后35～40d期间进行监测为佳。

本研究结果表明，“321”免疫技术适用于基层防疫推广应用，可提高防疫工作效率，缩短免疫周期和免疫空白期，降低基层防疫成本和疫病发病风险。