利拉鲁肽对离体大鼠胸主动脉环的血管舒张效应及其机制研究

李俊葓+马玉健+夏艳

【摘要】目的 研究利拉鲁肽对离体大鼠胸主动脉环的血管舒张效应及其作用机制。方法 选取SD雄性大鼠68只，分离其胸主动脉环，根据是否去内皮分为内皮完整组40例和去内皮组28例，内皮完整组按随机数字法再分为格列苯脲干预亚组20例和左旋硝基精氨酸甲酯干预亚组20例，格列苯脲干预亚组接受非特异性ATP敏感性钾通道抑制剂格列苯脲的预处理，左旋硝基精氨酸甲酯干预亚组接受一氧化氮合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯的预处理，观察利拉鲁肽对离体大鼠胸主动脉环血管舒张效应。结果 浓度为1*10-5mol/L的利拉鲁肽对内皮完整组和去内皮组大鼠胸主动脉环均有舒张作用，但对内皮完整组大鼠胸主动脉环舒张作用更强（P<0.05）；利拉鲁肽对格列苯脲预处理后胸主动脉环血管舒张幅度与未处理时相比，差异无统计学意义（P>0.05）；利拉鲁肽对左旋硝基精氨酸甲酯预处理后胸主动脉环血管舒张幅度与未处理时相比，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 利拉鲁肽对离体大鼠胸主动脉环血管具有确切的舒张效应，其机制与血管内皮释放的一氧化氮有关。

【关键词】大鼠；血管舒张效应；利拉鲁肽；胸主动脉环

【中图分类号】R965 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2016.15..02

糖尿病是一种内分泌系统疾病，既往大量研究[1-2]证实，其可增加心血管类疾病的发生风险，因此控制血糖不仅对糖尿病本身至关重要，亦对预防心血管类疾病具有重要意义。2010年美国食品药品监督管理局批准将人胰高血糖素样肽-1类似物利拉鲁肽用于治疗糖尿病[3]。既往研究[4]指出，利拉鲁肽对心血管系统具有一定的保护作用，但其潜在的作用机制尚未阐明。本研究通过分组对比，研究利拉鲁肽对离体大鼠胸主动脉环的血管舒张效应及其作用机制，如下报道。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器

乙酰胆碱；左旋硝基精氨酸甲酯；去甲肾上素；利拉鲁肽；Krebs-Henseleit液（11 mol/L PH=7.4的葡萄糖、25 mol/L KH2PO4、14.7 mol/L KCL、2.5 mol/L CaCL2、118 mol/L NaCL、1.2 mol/L MgCL2、25 mol/LNaHCO3）；超级恒温浴锅；计算机生物信号分析系统。

1.2 实验动物与分组

选取SD雄性大鼠68只，体重230～272 g，平均体重（251±22）g，购于中国食品药品检定研究院，分离其胸主动脉环，根据是否去内皮分为内皮完整组40例和去内皮组28例，内皮完整组按随机数字法再分为格列苯脲干预亚组20例和左旋硝基精氨酸甲酯干预亚组20例，格列苯脲干预亚组接受非特异性ATP敏感性钾通道抑制剂格列苯脲的预处理，左旋硝基精氨酸甲酯干预亚组接受一氧化氮合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯的预处理。利拉鲁肽分别作用于预处理过的去甲肾上素预收缩的胸主动脉环。

1.3 胸主动脉环制备方法

迅速分离大鼠胸主动脉，置于Krebs-Henseleit液中，修剪成4 mm左右的血管环，并辅以不锈钢微型挂钩和细钢丝，将血管环横向悬挂于Krebs-Henseleit液浴槽中，在37℃温度下，持续通入5%二氧化碳和95%氧气混合气体，调节静息张力使其为2 g，使用生物机能实验系统记录大鼠胸主动脉环张力变化。为诱发血管环最大收缩幅度，使用浓度为1*10-6mol/L的去甲状腺素预收缩2次，待前后2次最大收缩幅度差低于5%，加入浓度为1*10-6mol/L的去甲状腺素收缩，观察血管环张力变化，若其到达最大舒张幅度，依次加入浓度为1*10-7mol/L、1*10-6mol/L、1*10-5mol/L的乙酰胆碱，观察血管的舒张情况。去内皮实验：修剪胸主动脉环并固定，辅以尺寸相适的棉棒擦过管腔，连续进行2次，再使用浓度为1*10-6mol/L的去甲状腺素刺激，待前后2次最大收缩幅度差低于5%，加入浓度为1*10-5mol/L的乙酰胆碱，舒张幅度低于收缩幅度的5%时可进行下一步实验，说明内皮已去除完全。

1.4 观察指标

测定大鼠胸主动脉环舒张功能，检验内皮完整性后，使用Krebs-Henseleit液对胸主动脉环进行3次清洗，使用浓度为1*10-6mol/L的去甲状腺素诱发其达最大程度收缩，依次加入浓度为1*10-8mol/L、1*10-7mol/L、1*10-6mol/L、1*10-5mol/L的利拉鲁肽，以加入利拉鲁肽后的血管张力幅度与去甲肾上腺素诱发的最大收缩幅度间的张力反映血管张力的变化。

1.5 统计学方法

采用SPSS18.0统计学软件进行数据处理，计量资料以x±s”表示，采用t检验，计数资料以例数（n），百分数（%）表示，采用x2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 利拉鲁肽对去甲状腺素预收缩胸主动脉环的作用

浓度为1*10-5mol/L的利拉鲁肽对内皮完整组和去内皮组大鼠胸主动脉环均有舒张作用，但对内皮完整组大鼠胸主动脉环舒张作用更强（P<0.05）。

2.2 利拉鲁肽对预处理的去甲状腺素诱导收缩的胸主动脉环的舒张作用

未经处理时，利拉鲁肽对大鼠胸主动脉环血管舒张幅度为17%。利拉鲁肽对格列苯脲干预亚组大鼠胸主动脉环血管舒张幅度为14%，利拉鲁肽对格列苯脲预处理后胸主动脉环血管舒张幅度与未处理时相比，差异无统计学意义（P>0.05）；利拉鲁肽对左旋硝基精氨酸甲酯干预亚组大鼠胸主动脉环血管舒张幅度为4%，利拉鲁肽对左旋硝基精氨酸甲酯预处理后胸主动脉环血管舒张幅度与未处理时相比，差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨 论

本研究中加入左旋硝基精氨酸甲酯后利拉鲁肽对大鼠胸主动脉环血管舒张幅度为4%，未经左旋硝基精氨酸甲酯预处理时，利拉鲁肽对大鼠胸主动脉环血管舒张幅度为17%，说明左旋硝基精氨酸甲酯可抑制利拉鲁肽对血管的舒张作用。一氧化氮合成酶可催化L-精氨酸转变为一氧化氮，再转运至血管平滑肌，故一氧化氮合成酶抑制剂可阻断一氧化氮的血管舒张作用[5]。

本研究观察了非特异性ATP敏感性钾通道抑制剂格列苯脲的预处理前后血管的舒张效应，结果显示利拉鲁肽对格列苯脲干预亚组大鼠胸主动脉环血管舒张幅度为14%，未经格列苯脲预处理时，利拉鲁肽对大鼠胸主动脉环血管舒张幅度为17%，格列苯脲预处理后胸主动脉环血管舒张幅度低于未经处理时，差异无统计学意义（P>0.05），说明非特异性ATP敏感性钾通道未参与血管舒张作用。同时本研究是将利拉鲁肽作用于去甲肾上腺素预收缩的血管环，而去甲肾上腺素的收缩机制与血管平滑肌上的α肾上腺素受体有关，其可使钙离子内流，ROC通道开放，进而出现血管收缩反应，整个过程中钙离子通道亦可能参与利拉鲁肽的血管舒张效应中，关于其真实性有待进一步考究。

综上所述，利拉鲁肽对离体大鼠胸主动脉环血管具有确切的舒张效应，其机制与血管内皮释放的一氧化氮有关。

参考文献

[1] 李国娟，陈 宏，董艳华，等.利拉鲁肽对促动脉粥样硬化饮食喂养大鼠大动脉的保护作用及对肝脏PGC-1α表达的影响[J].华中科技大学学报（医学版），2014，43（06）：653-657.

[2] 李 宁，王 雄.利拉鲁肽对离体大鼠胸主动脉环的血管舒张效应及其机制研究[J].中国循环杂志，2015，30（01）：50-53.

[3] 李昊天，赵兴长，孙 平，等.利拉鲁肽对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞自噬与运动功能恢复的作用[J].解放军医学院学报，2015.36（05）：492-496，501.

[4] 杨 力，郭南京，蔡德鸿，等.利拉鲁肽对IGT-OLETF大鼠血清糖基化终末产物及炎症指标的影响[J].解放军医学杂志，2013.38（02）：116-119.

[5] 白 莲，李春君，邢云芝，等.利拉鲁肽激活糖尿病大鼠肾脏内皮源性一氧化氮合酶活性降低尿白蛋白排泄的研究[J].中国糖尿病杂志，2014，22（09）：846-849.

本文编辑：徐 陌