rhG—CSF对大鼠急性缺血性脑梗死的保护及治疗作用机制研究

付宏亮

【摘要】目的 分析rhG-CSF对大鼠急性缺血性脑梗死的保护及治疗作用机制。方法 选取健康雌性SD大鼠12只，采用线拴法建立大鼠急性缺血性脑梗死模型（MCAO），分别纳入研究组和对照组，研究组皮下注射rhG-CSF。TTC染色、流式细胞仪及免疫组织化学方法检测梗死体积、凋亡细胞、CD34+细胞及神经上皮干细胞蛋白的表达。结果 研究组大鼠脑梗死灶体积明显小于对照组，且Garcia神经功能评分更高，脑梗死部位出现CD34+细胞及nestin阳性细胞浸润。结论 rhG-CSF可以减轻大鼠急性缺血性脑梗死程度，减小脑梗死体积，其机理可能是rhG-CSF对缺血神经元具有保护作用，减少细胞凋亡，并动员骨髓干细胞，促进神经细胞再生。

【关键词】急性缺血性脑梗死；重组人粒细胞集落刺激因子；CD34+细胞；nestin阳性细胞

【中图分类号】R743.3 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2016.16..02

在临床上，急性缺血性脑梗死非常常见，具有比较高的致残率和致死率，严重影响着人们的身体健康和生活质量，甚至生命安全[1]。随着急性缺血性脑梗死发病率的逐年升高，如何提高脑卒中患者的疗效、改善其预后成为临床不断研究的重要问题之一。近年来，不断有研究认为人重组粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）有被应用在急性缺血性脑梗死治疗中的可能性，且对于缩小急性缺血性脑梗死患者的梗死面积、恢复急患者的神经功能等具有一定的作用。本研究通过进行分组研究，rhG-CSF对大鼠急性缺血性脑梗死的保护及治疗作用机制进行研究，以期能够提供一定的参考依据。

1 材料与方法

1.1 一般材料

选取健康雌性SD大鼠13只，参照Koizumi等建立的方法建立MCAO模型。将其分别纳入研究组和对照组，各6只。按Garcia等的方法对大鼠术后进行神经功能评分，采用TTC染色、流式细胞仪及免疫组织化学方法检测梗死体积、凋亡细胞、CD34+细胞及nestin的表达。

1.2 统计学方法

采用SPSS 18.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以“x±s”表示，采用t检验；以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组Garcia神经功能评分在不同时间点的对比

2.2 两组在急性缺血性脑梗死后大鼠脑梗死体积上的对比

2.3 两组在急性缺血性脑梗死后神经细胞、新生血管内皮细胞增殖上的对比

研究组大鼠的手术侧脑组织在给药后24 h有CD34+单个核细胞存在，且在给药后48 h、1 w，所检测到的CD34+单个核细胞出现浸润且数量增加趋势明显，而对照组大鼠未发生这种情况。

对照组nestin只在个别区域（如室管膜区、室管膜下区等）有所表达，且表达呈低水平状态，呈稀疏排列。表达nestin的细胞在脑梗死后24 h稍微有所增加，在脑梗死后48 h持续增加，在脑梗死后1 w时达到最大数量。研究组nestin阳性细胞1 w时，在梗死灶周围（CD34+细胞分布区）检测到有一定数量的存在。所具有的规律为：表达nestin的细胞如果距离梗死灶比较近，则数量会比较多，反之，数量会比较少。

3 讨 论

急性缺血性脑梗死后，自身动员和修复的效率很低，在局部无法产生显著性的效果[2-3]。骨髓干细胞动员可以使外周血干细胞的数量得以明显的增加，继而对脑组织的自然修复过程可以起到良好的促进作用。通过进行分组研究，笔者对rhG-CSF大鼠急性缺血性脑梗死的保护机制有一定的推测，即：（1）当局灶性脑梗死发生时，人重组粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对受损细胞起到保护作用，使脑细胞坏死得以减少，对神经修复速度起到良好的促进作用。（2）作为骨髓干细胞的强有力动员剂，人重组粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）可以对骨髓干细胞起到调动作用，经破坏的血脑屏障，到达脑梗死及其周围，这样可以往神经细胞及血管内皮细胞分化，对神经细胞、血管的再生起到促进作用，使脑梗死的体积得以缩小，对脑梗死后神经功能的修复起到良好的促进作用。

此外，还有研究认为，骨髓干细胞接受动员后，能够同脑组织彼此发挥作用，进而增加自分泌和旁分泌神经营养因子，可以对受到损伤的神经元的再生起到良好的促进作用，可以使神经元的病理状态得以有效的改善，有助于保护缺血后神经损伤，并对此加以有效的修复[4-5]。

本次研究中研究组大鼠脑梗死灶体积明显小于对照组，且Garcia神经功能评分更高，脑梗死部位出现CD34+细胞及nestin阳性细胞浸润。

综上所述，rhG-CSF可以减轻大鼠急性缺血性脑梗死程度，减小脑梗死体积，其机理可能是rhG-CSF对缺血神经元具有保护作用，减少细胞凋亡，并动员骨髓干细胞，促进神经细胞再生。

参考文献

[1] 程元元，刘瑞珍，任建宏，等.rhG-CSF联合胞磷胆碱处理对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2，Bax的影响[J].中国医疗前沿，2012，（02）：16-17.

[2] 方 立，王雪晶，荆 婧，等.rhG-CSF对大鼠缺血缺氧神经元巨自噬水平的影响[J].郑州大学学报（医学版），2013，（11）：42-46.

[3] 田 沈，林佳才，张朝东.RhG-CSF对糖尿病及非糖尿病大鼠缺血性脑卒中预后及神经生长因子表达的影响[J].华西药学杂志，2012，（08）：61-63.

[4] 邓文静，李东瑞，楚广磊，滕军放.重组人粒细胞集落刺激因子对脑缺血再灌注大鼠的神经保护和血管再生作用[J].中国实用神经疾病杂志，2015，（08）：15-17.

[5] 辛国栋，鲍月宁.重组人粒细胞集落刺激因子佐治急性脑梗死40例疗效观察[J].疑难病杂志，2011，（01）：62-64.

本文编辑：吴宏艳