酒制川麦冬的特征成分变化及含量测定

焦　艳　谢世静　吴　爽　于　娜

(沧州医学高等专科学校，沧州，061001)



酒制川麦冬的特征成分变化及含量测定

焦艳谢世静吴爽于娜

(沧州医学高等专科学校，沧州，061001)

目的：研究川麦冬酒制前后化学成分的变化，建立酒制川麦冬中甲基麦冬黄烷酮A的含量测定方法。方法：取川麦冬生品和酒制品，用水提取，将提取液进行高效液相色谱分析，Waters Symmetry C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱；流动相：乙腈-0.2%磷酸水梯度洗脱；检测波长：296 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL。比较川麦冬生品和酒制品的色谱图。结果：以进样浓度为横坐标，色谱峰面积的积分值为纵坐标，绘制标准曲线，计算得甲基麦冬黄烷酮A的回归方程为Y=15828ρ+42675，r=0.9998，线性范围为4.25～42.5 μg/mL。甲基麦冬黄烷酮A峰面积的RSD值为0.85%。表明该测定方法精密度良好。测得甲基麦冬黄烷酮A含量的RSD值为0.67%，结果表明该方法重复性良好。甲基麦冬黄烷酮A的平均回收率为97.31%(RSD1.54%)。加样回收率在95%～105%范围内，符合要求。川麦冬经酒制后甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B的含量明显提高。酒制品川麦冬化学成分发生了明显的量和质的变化。结论：川麦冬酒制品药性的显著变化正是其化学成分整体变化所导致的，有效成分整体增加，为麦冬的质量评价提供理论依据。

川麦冬；HPLC；化学成分；甲基麦冬黄烷酮A

麦冬为百合科植物麦冬(Ophiopogonjaponicus(Thunb.)Ker-Gawl.)的干燥块根[1]。始载于《神农本草经》，列为上品，历代本草都有记载，亦是历版《中国药典》收载的品种。根据产地命名，产于浙江的麦冬为杭麦冬(浙麦冬)，产于四川的麦冬为川麦冬。传统炮制方法中包括炒制、朱砂拌、酒制等，其中酒制可以降低药物寒性，提高滋补效果[2-3]。《本草从新》中记载：“入滋补药，酒润制其寒”，民间多制麦冬酒作保健之用，临床上也有相关使用。具有养阴生津，润肺清心之功效，临床上常用于肺燥干咳，虚劳咳嗽，津伤口渴，心烦失眠，内热消渴，肠燥便秘等病症[4-6]。麦冬药材主要含甾体皂苷类、高异黄酮类和糖类化合物[7-9]。本研究以川麦冬为例，采用高效液相色谱法来分析研究酒制后整体化学组分的变化，建立药材指标性成分甲基麦冬黄烷酮A的含量测定方法，从而为中药炮制品的临床应用奠定理论基础。

1　资料与方法

1.1一般资料FA-2004型电子分析天平，Waters 2489型高效液相色谱系统(美国Waters公司)，配置四元梯度泵，UV/Visible检测器；Waters Symmetry C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱；BS124S型电子分析天平；微量进样器；KH-3200DB型超声波清洗仪。甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B、6-醛基异麦冬黄烷酮A对照品(供含量测定用，批号110245-201105)，均购于中国药品生物制品检定所；乙腈为色谱纯(天津市光复精细化工研究所)；所用药材生品川麦冬购于沧州同仁堂药店，经过我系于永军老师鉴定为正品，其中酒制品川麦冬是其按照新版中药炮制标准制备得到。

1.2实验方法

1.2.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈(A)-0.2%磷酸水(B)为溶剂系统，梯度洗脱。见表1。柱温30 ℃，流速1.0 mL/min，检测波长为296 nm。进样量20 μL。

表1　液相梯度洗脱条件

1.2.2溶液的制备

1.2.2.1供试品溶液的制备取生品川麦冬粉末，采用水提法进行提取，浸膏进行低温干燥，得到的粉末(过三号筛)约5.0 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，期间振摇数次，微孔滤膜滤过，制得供试品溶液1；取酒制川麦冬粉末，采用水提法进行提取，浸膏进行低温干燥，得到的粉末(过三号筛)约5.0 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，期间振摇数次，微孔滤膜滤过，制得供试品溶液2。将上述1、2号样品依次注入高效液相色谱仪，得色谱图1和色谱图2。

1.2.2.2对照品溶液的制备分别精密称取对照品甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B、6-醛基异麦冬黄烷酮A适量，加甲醇溶解，分别制成每1 mL含甲基麦冬黄烷酮A0.0425 mg、甲基麦冬黄烷酮B0.0431 mg，6-醛基异麦冬黄烷酮A0.0424 mg的3种对照品溶液。将对照品溶液，依照上述色谱条件进行高效液相色谱分析，得对照品色谱图3、图4、图5。

图1生品川麦冬HPLC图

图2　酒制川麦冬HPLC图

图3　甲基麦冬黄烷酮A对照品HPLC图

图4　甲基麦冬黄烷酮B对照品HPLC图

1.2.3线性关系精密吸取上述甲基麦冬黄烷酮A对照品溶液1、2、4、6、8、10 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以进样浓度为横座标，色谱峰面积的积分值为纵座标，绘制标准曲线，计算得甲基麦冬黄烷酮A的回归方程为Y=15828ρ+42675，r=0.9998，线性范围为4.25～42.5 μg/mL。

图5　6-醛基异麦冬黄烷酮A对照品HPLC图

1.2.4精密度试验精密量取上述对照品溶液，重复进样6次，每次20 μL，测定峰面积积分值。结果测得甲基麦冬黄烷酮A峰面积的RSD值为0.85%。表明该测定方法精密度良好。

1.2.5稳定性试验精密吸取同一供试品溶液20 μL，分别于配制后0，2，4，8，16，24 h进样，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。测得甲基麦冬黄烷酮A峰面积的RSD值为0.84%。

1.2.6重复性试验取同一种酒制川麦冬样品，按含量测定项下的方法操作，平行6份，按上述色谱条件测定含量。测得甲基麦冬黄烷酮A含量的RSD值为0.67%，结果表明该方法重复性良好。

1.2.7加样回收率试验及样品含量测定取已知含量的酒制川麦冬样品6份，精密测定，精密填加同量的甲基麦冬黄烷酮A对照品适量，按含量测定方法操作，计算回收率，结果甲基麦冬黄烷酮A的平均回收率为97.31%(RSD1.54%)。加样回收率在95%～105%范围内，符合要求。测定结果见表2。

2　结果

2.1线性关系计算得甲基麦冬黄烷酮A的回归方程为Y=15828ρ+42675，r=0.9998，线性范围为4.25～42.5 μg/mL。

2.2精密度试验结果测得甲基麦冬黄烷酮A峰面积的RSD值为0.85%。表明该测定方法精密度良好。

2.3稳定性试验结果表明供试品溶液在24 h内稳定。测得甲基麦冬黄烷酮A峰面积的RSD值为0.84%。

2.4重复性试验测得甲基麦冬黄烷酮A含量的RSD值为0.67%，结果表明该方法重复性良好。

2.5加样回收率试验及样品含量测定

表2　酒制川麦冬中甲基麦冬黄烷酮A的回收率

注：加入量均为0.0439 mg。

表3　样品含量测定结果(mg·g-1)

2.6酒制品川麦冬与生品川麦冬化学成分的比较分析仔细对比图1生品川麦冬与图2酒制川麦冬的HPLC图，结合紫外线吸收数据，最终确认，5.448 min与5.439 min，18.140 min与18.135 min，24.922 min与24.947 min，53.656 min与53.644 min分别对应同一物质，只是这4种物质在图1中对应吸收峰面积较图2中明显减小；38.535 min与38.540 min，47.450 min与47.425 min，56.208 min与56.189 min对应同一物质，这3种物质在图1、图2中峰面积差别不大；同时，认真比对图1中各吸收峰的紫外线吸收数据，我们发现，在图2中出现了12.147 min、30.775 min处的吸收峰。

对比川麦冬对照品的HPLC图(图3、4、5)，结合紫外光谱数据，可确定色谱图1中保留时间为18.140 min，图2中18.135 min处的吸收峰即为甲基麦冬黄烷酮A的吸收峰；图1中保留时间为24.922 min，图2中24.947 min处的吸收峰即为甲基麦冬黄烷酮B的吸收峰；图1中保留时间为38.535 min，图2中38.540 min处的吸收峰即为6-醛基异麦冬黄烷酮A的吸收峰；图1的川麦冬经酒制后甲基麦冬黄烷酮A、甲基麦冬黄烷酮B的含量明显提高。

辅料黄酒中含有的一些物质也有色谱峰出现，可能会影响到结界的判断，因此在上述数据分析中均已除去了其对应的色谱峰影响。

3　讨论

麦冬药材中，甲基麦冬黄烷酮A虽然含量不高，但是其具有许多重要的药理活性[10]，是麦冬质量控制的重要指标之一，研究其含量测定方法，有助于完善麦冬药材及制剂的质量控制方法，有一定的应用价值[11-13]。在对供试品溶液进行色谱条件摸索时，在190～400 nm进行全波长扫描，其中296 nm波长下检测色谱峰效果最好，因此选296 nm为检测波长。本实验比较了甲醇-0.03%磷酸水溶液、乙腈-水、乙腈-0.2%磷酸水溶液3种不同的梯度洗脱溶剂系统，以乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱溶剂系统所得图谱的峰形较好、分离度良好，所以选用乙腈-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱溶剂系统为本实验的流动相系统。

通过上述数据分析，清楚了川麦冬经炮制后内部化学成分的显著变化，酒制川麦冬样品中有4种物质的含量显著增加，有2种新成分产生。样品中各成分含量的增加，可能是酒制过程使有效成分溶解度变大，导致溶出量增多。但对于其他成分的具体变化情况，还有待于进一步的研究。

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(2016-01-08收稿责任编辑：张文婷)

Composition Changes in Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber After Being Made by Wine and Determination of the Contents

Jiao Yan,Xie Shijing,Wu Shuang,Yu Na

(Cangzhou Medical College in Hebei Province,Cangzhou 061001,China)

Objective:To study the overall change of chemical composition in Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber after being made by wine so as to establish a method for determination of the content of methy lophiopogonanone A in wine made Sichuan Radix.Methods:Fresh Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber and wine made Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber were take to made liquid extraction by water.After that,the extraction was analyzed by HPLC,Waters Symmetry C18column(4.6 mm× 250 mm,5 μm); the acetonitrile-0.2%Phosphoric acid water was used as the mobile phase; the column temperature was 30 ℃; the detection wavelength was set at 296 nm; Flow rate:1.0 mL·min-1; injection volume:20 μL.Results:The standard curve was drafted with sample concentration as abscissa,and chromatographic peak area value of the vertical axis.The regression equation of methyl Radix flavanones A was calculated as Y=15828ρ+ 42675,r=0.9998,with the linear range of 4.25～42.5 μg·mL-1.RSDof Methyl Radix flavanones A peak area was 0.85%,which showed that the methods had good precision.Reproducibility experiment showed theRSDof Methy lophiopogonanone A content was 0.67%,which showed good reproducibility.The average recovery of methyl Methy lophiopogonanone A was 97.31% (RSD1.54%),with the range of 95%～105%.It met the requirement.Comparative analysis of the chemical composition showed that the content of Methy lophiopogonanone A and B in Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber improved significantly after being made by wine.Chemical composition of the wine made Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber undergone significant changes in the quantity and quality.Conclusion:Wine made Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber showed significant changes in the chemical composition because its overall changes of chemical composition and increase in active ingredients,which provides a theoretical basis for quality evaluation of Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber.

Sichuan Dwarf Lilyturf Tuber; HPLC; Chemical composition; Methy lophiopogonanone A

2012年度沧州市科学技术研究与发展指导计划项目(编号：1213145ZD)

焦艳(1983.11—)，女，研究生，讲师，教师，研究方向：药物化学及药物分析检验技术，E-mail：jykycg@126.com

R284.1

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.09.062