高效液相法测定薏苡中各部位薏苡素的含量
2016-11-12黄克俊裴学海蒋让勇陈治明
黄克俊,裴学海,蒋让勇,洪 亮,陈治明*
(贵州师范大学化学与材料科学学院,贵州贵阳 550001)
高效液相法测定薏苡中各部位薏苡素的含量
黄克俊,裴学海,蒋让勇,洪 亮,陈治明*
(贵州师范大学化学与材料科学学院,贵州贵阳 550001)
使用HPLC法测定薏苡中各部位薏苡素的含量,测定部位分别是根、茎、叶、种。在检测中所用的色谱柱型号是C18phenomenex250×4.60mm 5 micron,高效液相色谱仪型号为LC2000;流动相是乙腈:0.1%磷酸水溶液(25∶75),流速设为0.743/min;色谱柱温度为30℃,检测器波长为232nm。测定结果显示,各部位薏苡素含量从大到小的依次是根>叶>种>茎,其中根的含量为46mg/100g,叶的含量为21mg/100g,种的含量为0.8mg/100g,茎的含量约为2mg/100g。因此,建议多以根、叶作为药用部位。
薏苡;薏苡素;根;径;叶;种
在医学上,薏苡素是具有重要意义的药物之一。薏苡为禾本科植物,亦称“薏米”,味甘、淡、性微寒。薏苡在禾本科植物中首屈一指,被誉为“世界禾本科植物之王”[1]。薏苡是食药两用的物质,现代中西医临床试验结果表明,薏苡中有效成分是薏苡素,亦称为薏苡内脂。薏苡素对肌肉具有收缩作用[2],对中枢神经系统具有镇静、抑制、镇痛及降温与解热作用。在人们追求美的背景下,充分发挥薏苡的美容功效。最新研究发现[6],薏苡仁中的薏苡仁酯(CXL)被认为是抗癌的有效成分,CXL最大功效是抑制癌细胞的异常性繁殖,并通过新陈代谢来改善体质。20世纪中期[7],U-kita(日本)等分离出薏苡仁酯,这是世界上第一次从薏苡仁中提取得到薏苡素,不久之后,便使用人工合成薏苡素,减少对薏苡植株的依赖,通过进一步研究,将薏苡素作为薏苡中抗击癌细胞的主要成分。Hu[8]运用超临界流体萃取方法,在薏米中提取出薏苡仁酯以及薏米油,提取效率相对于常用化学方法,比较可靠科学。国内对薏苡研究用的方法主要有分光光度法、高效液相色谱法等,如李厚聪等[3],张明昶等[4],吴英梅等[5]都用的是高效液相色谱法,但是他们都用的索氏提取法,加热时间长,有机溶剂多,样品前处理复杂,本实验经过探索用浸泡超声法进行前处理,不仅缩短时间也不浪费溶剂,操作简单且实验效果显著。
1 实验方法
1.1 仪器与试剂
仪器:高效液相色谱仪LC-2000(日本)、LC-2050溶剂箱、LC-2030紫外可见检测器、LC-输液泵,色谱柱为C18phenomenex250×4.60mm 5 micron,以及烘箱、粉碎机、超声仪、有机膜、天平(感量为0.000 1g)。
试剂:超纯水、甲醇为色谱纯、丙酮、0.1%磷酸、乙腈以上试剂均为分析纯。
1.2 标准溶液的配制
标样的配备:称量大约1g薏苡素于250mL三角瓶中。加入25mL甲醇,浸泡过夜(24h以上),再超声45min,然后用有机膜过滤,最后取滤液于20mL试管中上机备用。
1.3 仪器条件
流动相∶乙腈∶0.1%磷酸水溶液=25∶75,流速为0.7mL/ min。色谱柱温度为30℃,每次取样为20μL,检测波长为232nm。
1.4 实验方法
1.4.1 样品的制备
称取已混合均匀的粉末试样约1g(精确到0.1mg)于250mL洁净三角瓶中,将三角瓶一一贴标签,再往其中加入25mL甲醇使其充分混合均匀。(注:薏苡素的试样需要同时做回收率实验)。
1.4.2 待测液的制备
将装有处理的试样溶液的三角瓶放入冰箱内保存,使之过夜至次日,且必须保证甲醇浸泡24h以上;再将其放置超声仪中,频率调至100Hz,时间调至45min,使其在超声过程中充分混合、充分提取薏苡素。然后再将试样取出,用有机膜进行抽滤,当然在抽滤之前要充分震荡,使得试样混合更充分,取一定量滤液于20mL试管中,同样对试管进行贴相应标签。将装有试样的试管放入冰箱,且调节温度至零下20℃存放。
1.5 标准曲线的制备
1.5.1 薏苡素标准曲线的绘制
用甲醇处理的标样样品,使薏苡素浓度为 0.012mg/mL。高效液相色谱法进行测定,进样量为20μL,绘制谱图,见图1、图2。
图1 薏苡素对照图
1.5.2 线性关系
精密量取1、2、4、6、8、10、12、15、20μL薏苡素对照品溶液,进样并计算出峰面积。以对照品溶液进样量为横坐标、峰面积为纵坐标进行线性回归,计算得线性回归方程为:A=63 871.015 36+27 458.038 9X(r=0.999 7,n=3)。
The Content of Each Part in Coix Coix by HPLC
Huang Ke-jun,Pei Xue-hai,Jiang Rang-yong,Hong Liang,Chen Zhi-ming
The determination of Coixol in each part that Coix lacryma-jobi L.var.mayuen Stapf by HPLC.The part of determination are root、stem、leaf and seed.The model of chromatographic column si C18phenomenex250×4.60mm 5 micron in detection,The model of high performance liquid chromatography is LC2000;Mobile phase is acetonitrile of 25%、water of 75% and in the water the phosphate solution of 0.1%,Flow rate is 0.7mL/min;The temperature of the chromatographic column is 30℃,The wave length of detector is 232nm.The consequence of determination show the content of Coixol is root>leaf>seed≈stem.and the content of root is 46mg/100g,the content of leaf is 21mg/100g,the content of seed is 0.8mg/100g,the content of stem is 2mg/100g.so I suggest root and leaf serve as medicine of Coix lacryma-jobi L.var.mayuen Stapf.
coix lacryma-jobi L.var.mayuen Stapf;Coixol;root;leaf;seed;stem
O657.72;R284
A
1003-6490(2016)07-0049-02
2016-06-25
受贵州师范大学研究生创新基金资助(NO:研创201517),贵州省自然科学基金(黔科合J字[2009]2021)。
黄克俊(1989—),男,贵州遵义人,硕士,主要研究方向为有机合成。
陈治明(czm000219@163.com)。