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淄博地区猪源产ESBL大肠杆菌的多重耐药分析

2016-11-10刘军河魏湘璎山东省淄博市动物卫生监督所255000

山东畜牧兽医 2016年10期
关键词:猪源广谱内酰胺酶

刘军河 李 娜 魏湘璎 (山东省淄博市动物卫生监督所 255000)

淄博地区猪源产ESBL大肠杆菌的多重耐药分析

刘军河李 娜魏湘璎(山东省淄博市动物卫生监督所255000)

为了解淄博地区猪源产ESBL大肠杆菌耐药特点,本研究于2016年4月对淄博地区3个养猪场采集猪粪便棉拭子,分离猪源产ESBL大肠杆菌,14种抗生素药敏片进行药敏检测。共收集236份猪粪便棉拭子样本,通过产ESBL确证试验获得94株产ESBL大肠杆菌,占猪源大肠杆菌的39.8%。所有产ESBL大肠杆菌菌株耐药性较强且呈现多重耐药,对碳青霉烯类药物敏感率较高。猪源产ESBL 大肠杆菌分离率高且耐药谱广,给临床中应用抗生素的治疗猪源大肠杆菌病带来很大的障碍。

猪源产超广谱β内酰胺酶大肠杆菌耐药

临床上抗生素的大量使用,导致大肠杆菌耐药性越来越严重[1]。其中产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases, ESBLs)能够水解第一、二、三代头孢菌素及氨曲南,是细菌表现多重耐药的主要机制之一[2]。多重耐药菌的出现使临床上抗感染治疗更加困难[3]。

大肠杆菌病对幼畜或幼禽常造成严重的腹泻和败血症,对猪的危害表现在造成7日龄以内的仔猪黄痢、10日龄-1月龄的仔猪白痢和断奶前后的猪水肿病[4]。因此,了解猪源产ESBL大肠杆菌株的耐药谱,对临床上合理利用抗菌药物、增强抗感染治疗效果意义重大。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1样品来源2015年4月淄博地区三个养猪场采的不同日龄猪的肛门棉拭子。

1.1.2主要试剂伊红美蓝琼脂、麦康凯琼脂、Mueller-Hintion琼脂(MH),细菌基因组DNA提取试剂盒均购自天根生物科技有限公司。

1.1.3药敏纸片头孢他啶(30µg/片)、头孢他啶/棒酸(10µg/片)、头孢噻肟(30µg/片)、头孢噻肟/棒酸(10µg/片)、复方新诺明(25µg/片)、氨苄西林(10µg/片)、氯霉素(30µg/片)、链霉素(10µg/片)、卡那霉素(30µg/片)、庆大霉素(10µg/片)、氟苯尼考(30µg/片)、阿莫西林(20µg/片)、头孢噻吩(30µg/片)、氨曲南(30µg/片)、环丙沙星(5µg/片)、四环素(30µg/片)均购自杭州微生物试剂有限公司。

1.2方法

1.2.1样品分离向猪粪便棉拭子离心管中加入500µL的生理盐水,混匀后,划线接种于含头孢噻肟的伊红美蓝培养基上,37℃培养18h。典型菌落接种于麦康凯培养基上,37℃培养18h。每个平板只挑取一个菌落。

1.2.2大肠杆菌的鉴定PCR扩增大肠杆菌16S rRNA保守区域。引物为27F:5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3',1492R:5'-GGCTACCTTGTTACGACTT-3'[5];PCR扩增产物克隆测序。

1.2.3产ESBL大肠杆菌的确证试验和药敏检测菌液调至0.5麦氏浊度,均匀涂布于M-H培养基上,分别贴头孢他啶、头孢他啶/棒酸、头孢噻肟、头孢噻肟/棒酸4个药敏纸片,37℃孵育18h后观察结果。根据CLSI2009标准,对产ESBL菌株表型确证判定。检测产 ESBL 阳性菌株对其余12种抗生素的敏感性。

2 结果

2.1猪场产ESBL大肠杆菌的分离从236份猪粪便棉拭子中共分离到94株耐头孢噻肟大肠杆菌,这94株菌均为产ESBL阳性,分离率为39.8%(附图)。

附图 产ESBL表型确证试验

附表 猪源产ESBL大肠杆菌菌株耐药率

2.2产ESBL大肠杆菌耐药性94株产ESBL大肠杆菌对很多抗生素均呈现高度耐药性,特别是对青霉素类和第代头孢菌素类抗生素如氨苄西林、头孢噻吩,以及三代的头孢噻肟均100%耐药,对阿莫西林的耐药率高达97.8%,95.7%的菌株对氨曲南表现耐药。但对碳青霉烯类抗菌药物均表现敏感(见附表)。

3 结论

(1)产超广谱β-内酰胺酶的菌株耐药谱广,自1983年首次报道后,在养殖动物和周围环境中检出率越来越高,给临床治疗用药带来极大的困难,并且对人类的健康产生威胁。本研究中采集淄博地区236份猪粪便棉拭子,经分离筛选共获得94株产ESBL大肠杆菌,分离率为39.8%,因此超广谱β-内酰胺酶已经普遍存在。(2)94株猪源产ESBL大肠杆菌对青霉素类、头孢菌素类和单环内酰胺类的耐药性都非常高,耐药率近100%。对磺胺类和四环素类也具有高耐药性,高达96%左右。氨基糖苷类、喹诺酮类和氟喹诺酮类耐药率都在75%以上,所以这三类药物用于治疗大肠杆菌病的效果不佳。所有菌株都对碳青霉烯类抗菌药物表现敏感,这是由于我国禁止将碳青霉烯类药物应用于兽医临床。

总之,淄博地区猪源产ESBL大肠杆菌耐药谱广,均为多重耐药,大部分已经进化出了对新一代头孢类抗生素的耐药性,造成此类菌株形成临床感染治疗上、抗生素的选择将受到更大的限制。因此严格用药是控制细菌产生耐药性的重要方法;控制猪场的养殖环境卫生,加强对猪场养殖环境的监控,净化猪场水源和空气,为防止耐药菌株传播提供保障。

[1] Amyes SGB, Gemmell CG. Antibiotic resistance. J Med Microbiol. 1997, 46∶ 436-470.

[2] 孙长贵, 陈汉美. 超广谱β-内酰胺酶研究进展[J]. 国外抗生素分册,2000, 21(3)∶ 111-115.

[3] 段玉平, 徐兴然, 曾忠良等. 猪源大肠杆菌整合子与耐药性的相关性研究[J]. 中国兽药杂志, 2009, 43(5)∶ 24-26.

[4] 刘峰. 猪大肠杆菌病防治研究进展[J]. 湖南畜牧兽医, 2010, 6∶1-3.[5] 杨滴, 王耀兵等. 粪便中大肠埃希菌的分离鉴定[J]. 微生物学杂志, 2007, 27(3)∶ 1-5.

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