转化生长因子—β3与纤维连接蛋白在子宫肌瘤及子宫肌层内的表达水平与生物学意义

潘伟 汪海霞 刘霞

【摘要】目的：探讨转化生长因子（TGF）-β3与纤维连接蛋白（FN）在绝经或未绝经妇女子宫肌瘤及子宫肌层中表达的水平变化及其意义。方法：采用免疫组化法（SP）检测40例绝经后子宫肌瘤妇女（绝经组）、40例未绝经子宫肌瘤妇女（未绝经组）肌瘤组织及肌壁组织中的TGF-β3、FN的表达差异，同时将绝经组妇女根据肌瘤是否发生萎缩分为萎缩组（17例）、未萎缩组（23例）并进行上述指标的比较。结果：绝经组的肌瘤组织、肌壁组织中的TGF-β3表达评分分别为（3.11±0.78）分、（1.85±0.69）分均显著的低于未绝经妇女的（3.98±0.67）分、（2.31±0.82）分（P<0.05）；两组妇女肌瘤组织和肌壁组织中的FN表达评分差异不显著（P>0.05）。子宫肌瘤萎缩和未萎缩患者的子宫肌瘤组织、肌壁组织中TGF-β3、FN表达在两组间差异均不显著（P>0.05），萎缩组和未萎缩组的肌瘤组织TGF-β3表达分别为（2.90±0.65）分、（3.32±0.74）分均显著的高于本组肌壁组织中的（1.85±0.67）分、（2.25±0.61）分（P<0.05）；两组肌瘤和肌壁组织中的FN表达差异不显著（P>0.05）。结论：TGF-β3表达可能与患者绝经前后的激素水平改变有关。

【关键词】转化生长因子-β3；纤维连接蛋白；绝经；子宫肌瘤；子宫肌层

Expression and biological significance oftransforming growth factor-β3 and fibronectin in uterine myoma and uterine muscle layerPAN Wei1， WANG Haixia2， LIU Xia2. 1. Department of Gynecology， Huangshi Central Hospital， Huangshi 435000， Hubei， China； 2. Department of Obstetrics， Huangshi AiKang Hospital， Huangshi 435000， Hubei， China

【Abstract】Objectives： To discuss the expression and biological significance of transforming growth factor-β3 and fibronectin in uterine myoma and uterine muscle layer. Methods： Using immunohistochemical method （SP）， 40 cases of postmenopausal uterine leiomyoma （postmenopausal group） and 40 cases of premenopausal uterine leiomyoma （premenopausal group） were selected. Different expression of TGF- beta-3 and NF on leiomyoma tissue and muscle tissues were detected. At the same time， postmenopausal group was divided into atrophy group （17 cases） and non-atrophy group （23 cases）. The above indexes of the two groups were compared. Results： The TGF- beta-3 expression scores of premenopausal group in muscle tissue and leiomyoma wall were （3.11±0.78） and （1.85± 0.69） points， which were significantly lower than these of premenopausal group （3.98 ± 0.67， 2.31 ± 0.82） （P<0.05）； FN expression score of two groups in leiomyoma tissue and muscle tissues had no significant difference （P>0.05）. TGF- beta-3 and FN expression of atrophy group and non-atrophy group in uterine fibroids and uterine tissues had no significant difference （P>0.05）. TGF- beta-3 expression of atrophy group and non-atrophy group in uterine fibroids were （2.90±0.65） and （3.32±0.74）， which were both significantly higher than these in uterine tissues of （1.85± 0.67） and （2.25± 0.61） （P<0.05）； FN expression of the two group in fibroids and muscle tissues did not show significant difference （P>0.05）. Conclusion： TGF- beta-3 expression of premenopausal patients is significantly higher than that of postmenopausal patients； TGF- beta-3 expression of atrophic group and non-atrophy patients in leiomyoma is higher than that in muscle wall tissue， without significant difference. TGF- beta-3 expression may be associated with hormone level changes in postmenopausal patients.

【Key words】Transforming growth factor beta-3； Fibronectin； Menopause； Uterine myoma； Uterine muscular layer

【中图分类号】R737.33【文献标志码】A

子宫肌瘤作为女性生殖系统常见的良性肿瘤，其发病率约占全部女性生殖系统疾病的25%～30%，是导致女性子宫全切的重要原因。其发病机制与卵巢分泌的雌、孕激素对局部生长因子的自分泌和旁分泌调节，从而影响肌瘤细胞的生长和分化有关[1]。转化生长因子-β3（transforming growth factor-β3， TGF-β3）与纤维连接蛋白（fibronectin ，FN）等多种生产因子均会对子宫肌瘤的生长、发展产生重要作用，从而出现肌细胞异常增殖以及细胞外基质聚集等[2，3]。为此，本研究针对TGF-β3以及FN在绝经或未绝经妇女子宫肌瘤及子宫肌层中表达的水平变化及其意义进行探讨。现将研究结果总结报道如下。

1材料与方法

1.1一般材料

随机选取我院妇科2013年1月至2013年12月收治的经病理检查证实的80例子宫肌瘤患者作为研究对象，绝经组40例，年龄46～78岁，平均年龄（58.4±5.9）岁，绝经时间（4.4±2.5）年，肌瘤最大径4～8cm，平均（5.2±1.2）cm；未绝经组40例，年龄33～52岁，平均年龄（44.5±6.1）岁，肌瘤最大径3～8cm，平均（5.3±1.1）cm。两组患者年龄差异显著（P<0.05），肌瘤平均最大径大小差异不显著。

纳入标准：经B超、术后标本活检确诊为子宫肌瘤患者；近3个月内未服用激素类药物；均获得研究知情同意。

排除标准：合并子宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌等恶性妇科疾病；合并严重内分泌性疾病；未进行病理组织学或活检确诊；病历资料不完整。

1.2检查方法

于患者入院后，取清晨空腹肘静脉血5mL，注入到不抗凝试管凝固后，以3000r/min的速度离心15min，提取血清置于-70℃的冰箱中保存；采用免疫组化（SP）法对TGF-β3与FN含量进行检测，免疫组化试剂盒由上海前尘生物科技有限公司生产（货号：PK-6100），检测程序严格按照试剂盒说明书进行操作。

将采集到的患者子宫肌瘤样本制成腊块并进行连续切片，将2张厚约4μm的组织切片进行染色后置于江苏捷达科技有限公司生产的JD801计算机分析系统图像分析仪中，对染色后的细胞膜、细胞质以及细胞间质的组织染色强度进行观察，以其中存在棕黄色颗粒为阳性标准。每张切片随机选取5个视野，并将每个视野的阳性细胞数进行记录，计算其平均值。

1.3分组及读片标准

将绝经组妇女根据肌瘤是否发生萎缩分为萎缩组（17例）、未萎缩组（23例）；子宫肌瘤萎缩的判定标准：子宫肌瘤在绝经前出现，绝经后逐渐缩小，患者的临床症状不明显，常在体检或其他检查中发现。

采用已知的阳性切片作为对照（TGF-β3采用胎盘组织，FN采用肾组织），以PBC代替一抗作为阴性标准，阳性染色主要为细胞膜、细胞质、间质为棕褐色染色，TGF-β3主要表现与细胞质，NF主要表达与细胞外基质和细胞内，根据作色强度和作色面积进行综合评分。无着色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别为0、1、2、3分；作色面积按照无着色、着色面积<25%、25%～50%、51%～75%、>75%分别记分为0、1、2、3、4分；两项评分之积为最终评分，作为TGF-β3、NF的表达标准。

1.4统计学分析

统计分析在SPSS17.0中进行。计量资料以（±s）表示，采用两样本独立t检验、组内比较采用配对t检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2结果

2.1绝经和未绝经妇女子宫肌瘤组织和肌壁组织中的TGF-β3、FN表达差异绝经组的肌瘤组织、肌壁组织中的TGF-β3表达评分均显著的低于未绝经妇女（P<0.05）；两组妇女肌瘤组织和肌壁组织中的FN表达评分差异不显著（P>0.05）。见表1。

2.2子宫肌瘤萎缩与未萎缩组妇女的TGF-β3、FN表达差异

子宫肌瘤萎缩和未萎缩患者的子宫肌瘤组织、肌壁组织中TGF-β3、FN表达在两组间差异均不显著（P>0.05），萎缩组和未萎缩组的肌瘤组织中的TGF-β3表达均显著的高于本组肌壁组织（P<0.05）；两组肌瘤和肌壁组织中的FN表达差异不显著（P>0.05）。见表2。

3讨论

子宫肌瘤作为女性生殖系统的常见恶性肿瘤，临床上多采用促性腺激素释放激素进行治疗，大部分患者经治疗后或者绝经后子宫肌瘤会发生相应的萎缩，但少数患者的肌瘤会继续生长，甚至引发临床症状[4]。子宫肌瘤的发病机制与卵巢分泌的雌、孕激素对局部生长因子的自分泌和旁分泌调节有关，从而影响肌瘤细胞的生长和分化[5，6]。Kulshrestha等 [7]针对绝经前子宫肌瘤的研究表明，TGF-β3与FN等多种生长因子会通过促进子宫肌细胞的生长从而促进肌细胞异常增殖以及细胞外基质聚集等，在宫肌瘤的生长、发展产生重要作用。

TGF-β3作为一种具有结构相关性的多功能细胞因子，主要在细胞质中表达，且具有较好的生物学活性。TGF-β3能够促进细胞外基质的形成，加快其血管化进程，并促进细胞的创伤修复过程，参与了多种肿瘤的发病[8，9]。本研究结果显示，绝经组的肌瘤组织、肌壁组织中的TGF-β3表达评分均显著的低于未绝经患者，表明绝经前子宫肌瘤组织中的TGF-β3表达明显高于正常肌壁组织，而且TGF-β3会以自分泌和旁分泌的方式抑制正常的子宫细胞增殖，增加细胞外基质的成分胶原蛋白、纤维连接蛋白以及蛋白聚糖的表达，并且促进子宫肌瘤细胞的增殖。另外，本研究中子宫肌瘤萎缩和未萎缩患者的子宫肌瘤组织、肌壁组织中TGF-β3表达在两组间差异均不显著，但萎缩组和未萎缩组患者肌瘤组织TGF-β3表达均显著高于本组肌壁组织，显示绝经后的非萎缩性肌瘤中的TGF-β3含量虽然与绝经后的萎缩性肌瘤以及肌壁组织含量相近。绝经后的非萎缩性肌瘤中的TGF-β3含量却明显高于正常肌壁组织，绝经后妇女的萎缩性肌瘤中的TGF-β3含量表达却与肌壁间相似，表明TGF-β3是导致绝经后子宫肌瘤继续生长的重要因素之一。Plewka等[10]研究表明，促性腺激素释放激素类似物治疗后患者的子宫肌瘤在缩小的同时，TGF-β3含量并未较治疗组有所降低，因此推测促性腺激素释放激素类似物的治疗可引起患者血清中雌激素以及孕激素的表达水平有关。

FN作为细胞外基质的重要成分，是存在于以血浆为主的体液、多数基膜中的以及软组织基质的大分子非胶原蛋白，主要在细胞内以及细胞外基质中表达，并在多种肿瘤的发生发展过程中起到重要作用[11-13]。FN与体内的大分子相互作用，并参与细胞骨架的形成、细胞的迁移以及分化，并参与细胞的癌性转化[14，15]。本研究结果显示，两组妇女肌瘤组织和肌壁组织中的FN表达评分差异不显著。另外，子宫肌瘤萎缩和未萎缩患者的子宫肌瘤组织、肌壁组织中FN表达在两组间差异均不显著，且子宫肌瘤和肌壁组织中的FN表达差异不显著。可能与本研究例数较少有关，需加大样本量进行下一步的研究。

综上所述，未绝经的子宫肌瘤患者的TGF-β3表达显著高于绝经患者，萎缩组、未萎缩组患者的肌瘤组织TGF-β3表达高于肌壁组织，组间比较差异不显著，TGF-β3表达可能与患者绝经前后的激素水平改变有关。

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