天津某规模化猪场一例仔猪水肿病的诊断分析

杜庆兵，弓建芳，张东超，李小慧，高珂珂，林静，金天明



天津某规模化猪场一例仔猪水肿病的诊断分析

杜庆兵，弓建芳，张东超，李小慧，高珂珂，林静，金天明通信作者

（天津农学院动物科学与医学学院，天津300384）

2015年9月于天津某规模化猪场发现疑似仔猪水肿病病例，经无菌采集病变明显的组织器官，通过细菌分离与培养、镜检、生化鉴定、病毒培养等实验室检测方法进行综合诊断，同时结合病猪的流行病学调查、临床症状和病理剖检变化，最终确诊为仔猪水肿病。药敏试验结果表明,该分离株大肠杆菌对头孢唑啉、多西环素等药物高度敏感。该结果为仔猪水肿病的临床快速诊断和用药提供了借鉴。

仔猪水肿病；分离与培养；病理剖检；生化鉴定；药敏试验

仔猪水肿病（piglet edema disease，PED）是由溶血性大肠杆菌引起的仔猪肠毒血症，以仔猪全身或四肢麻痹、面部水肿为主要特征，又称猪胃肠水肿病[1-2]。该病发病率虽不高，但病死率高达85％，主要危害断奶仔猪，常给猪场造成较大的经济损失[2-3]。

1 临床症状

2015年9月，天津某规模化猪场一头35日龄左右的断奶仔猪突然发病，病猪上下眼睑、面部和下颌水肿，初期体温略高、精神沉郁，食欲下降，呼吸快而浅；随后，呼吸慢而深，继而病猪四肢无力，共济失调，部分猪侧卧，肌肉震颤，四肢划水状动作，最终抽搐而亡。

2 病理剖检

剖检濒死猪可见心包、胸腔和腹腔均有淡色积液，空气中暴露5 min后凝结成胶胨状；肺出血、水肿；胃底黏膜水肿、充血、出血，尤以胃大弯水肿明显；肠黏膜出血，肠系膜淋巴结弥漫性出血、水肿；肝脏和脾肿大、出血；脑膜充血，大脑皮层水肿。

3 实验室检验

3.1 方法

3.1.1 抹片镜检

无菌采取病死仔猪的肝、脾、肺、肾、胃、肠系膜淋巴结抹片，革兰氏染色，镜检。

3.1.2 细菌分离培养

无菌采集病死仔猪的心、肝、脾、肺、肾、胃、肠系膜淋巴结，划线接种于LB固体培养基，置37 ℃恒温箱内培养24 h，观察并记录细菌菌落形态。用接种环挑取单个菌落，接种于麦康凯琼脂培养基和伊红美蓝琼脂培养基，置37 ℃恒温箱培养24 h，观察并记录细菌菌落形态，取单个菌落进行革兰氏染色，在显微镜下观察。接种纯化的单个菌落于LB液体培养基中扩大培养，4 ℃保存，备用。

3.1.3 生化试验

对分离纯化的细菌培养物进行糖发酵试验、吲哚试验、枸橼酸盐试验、靛基质试验、接触酶试验、尿素酶试验、M-R试验、V-P试验、三铁糖试验，37 ℃恒温箱培养24 h，观察并记录结果。

3.1.4 药敏试验

用灭菌棉签蘸取稀释至1～2×1011CFU/mL的菌液，均匀涂满整个LB固体平板，待平板晾干后，用无菌镊子将抗生素药敏纸片均匀贴于上述平板上，37 ℃的恒温箱中倒置培养48 h后，测量抑菌圈直径，并根据判断标准判定该细菌对各种抗生素的敏感性[4]。

3.1.5 病毒培养

无菌采集脑、心、肝、脾、肺、肾、胃、肠道、肠系膜淋巴结等病料，经PBS液洗3次后液氮研磨，研磨过程中加入PBS制成匀浆，反复冻融3次，离心取上清，使其通过细菌滤器，将滤液接种于生长良好的敏感细胞，观察是否产生细胞病变。

3.2 结果

3.2.1 抹片镜检

镜检发现有革兰氏阴性无芽胞的短小杆菌。

3.2.2 细菌菌落和菌体形态特征

分离菌在LB固体培养基上呈圆形、表面光滑湿润、边缘整齐、灰白色半透明的中等大小的菌落；麦康凯琼脂平板上形成圆形、表面光滑、中等大小的红色菌落；伊红美蓝琼脂上形成深黑色、圆形、中等大小、有黄绿色金属光泽的菌落；三糖铁琼脂斜面和底部都变黄，产生气泡，但不产生硫化氢。油镜下可见短杆状、两端钝圆、散在或成双存在，无芽孢（图1）。分离菌与大肠杆菌的菌落特征和菌体形态特性一致。

3.2.3 生化特征

该分离菌株能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、山梨糖、甘露醇、木糖，均产酸产气；M-R试验阳性，V-P试验阴性，吲哚试验阳性，靛基质试验阳性，不利用枸橼酸盐，接触酶试验阳性，尿素酶试验阴性，不产生硫化氢（表1）。分离菌株与大肠杆菌的生化特性一致。

表1 分离菌株的生化试验结果

注：糖发酵试验中，⊕表示产酸产气；＋表示产酸不产气；－表示不产酸不产气。其他试验中，＋表示阳性；－表示阴性

3.2.4 药敏试验结果

分离株细菌药敏试验结果显示：对头孢唑啉、多西环素、卡那霉素、氯霉素、呋喃唑酮高度敏感；对丁胺卡那、头孢他啶、氧氟沙星、阿米卡星为中度敏感药；对多黏菌素B、复方新诺明、环丙沙星不敏感；对四环素、青霉素耐药（表2）。

表2 分离菌株的药敏试验结果 mm

注：抑菌圈直径＜15 mm为不敏感；15 mm≤≤20 mm为中度敏感；＞20 mm为高度敏感

3.2.5 病毒培养结果

显微镜下均未观察到细胞病变。

4 小结与讨论

根据发病猪的流行病学、临床症状和病理剖检变化，该病猪表现出仔猪水肿病的典型特征。实验室检验结果表明，分离菌株与大肠杆菌的形态特性一致；同时，将病料滤液接种细胞，经培养后未发现细胞病变，表明病猪未感染病毒。因此，可确诊该猪病为仔猪水肿病。

大肠杆菌是条件性致病菌，断奶仔猪在外界环境改变、更换饲料以及母源抗体消失等应激条件下可诱发本病。由于养猪生产中抗生素的滥用，仔猪发病时最好先分离细菌并进行药敏试验，采用有效的药物和适当剂量以提高治疗效果[5]。

随着规模化养猪场饲养密度的增加，猪缺乏运动导致抵抗力下降，如不注意环境卫生，猪很容易被细菌感染，因此，猪场日常应保持圈舍清洁干燥，定期消毒，减少疾病的发生[6]。

参考文献：

[1] 侯学英，苏文华. 仔猪水肿病病原的分离鉴定及药敏试验[J]. 畜牧与饲料科学，2010，31（4）：114-116.

[2] 刘国平，吴斌，刘梦元，等. 致仔猪水肿病大肠杆菌的分离、鉴定及生物学特性[J]. 中国兽医学报，2005，25（1）：31-33.

[3] Oanh T K，Nguyen V K，De Graxe H，et al. Protection of piglets against edema disease by maternal immunization with stx2e toxoid [J].，2012，80（1）：469-473.

[4] 中国国家标准化管理委员会. WS/T125-1999 纸片法抗菌药物敏感试验标准[S]. 北京：中国标准出版社，1999.

[5] 郭伶，胡贵武，魏凤静. 仔猪水肿病病原菌的分离与鉴定[J]. 黑龙江畜牧兽医，2014（6）：84-85.

[6] 陆红霞，袁勋俊，顾红标，等. 断奶仔猪大肠杆菌病的病例报告[J]. 中国畜牧兽医文摘，2012，28（4）：161.

Diagnostic Analysis of Piglet Edema Disease from a Large Scale Pig Farm in Tianjin

DU Qing-bing, GONG Jian-fang, ZHANG Dong-chao, LI Xiao-hui, GAO Ke-ke, LIN Jing, JIN Tian-mingCorresponding Author

（College of Animal Science and Veterinary Medicine, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China）

In septemper 2015, the obvious lesion tissues and organs were isolated under sterile conditions from suspicious piglet edema disease from a large scale pig farm in Tianjin. Comprehensive diagnoses which included bacteria separation and culture, microscopy, biochemical tests and viral culture were performed. Considering the epidemiological investigation, clinical symptoms and pathological changes, it was confirmed that infected pigs suffered from piglet edema disease caused by. The drug sensitivity test revealed that the isolated bacterial strain was highly sensitive to cefazolin and doxycycline. The diagnosis results provide the reference for rapid diagnosis and clinical medication of the piglet edema disease.

piglet edema disease; separation and culture; pathological anatomy; biochemical test; drug sensitivity test

S828.9

A

1008-5394（2016）03-0055-02

2016-04-23

国家自然科学基金项目“mTERT与TYR启动子联合调控HN基因溶瘤腺病毒的构建及其对黑色素瘤靶向治疗的研究”（31572492）；天津市兽医生物技术优秀科研创新团队资助项目（TD12-5019）；国家级大学生创新创业训练计划项目“规模化猪场主要细菌性传染病的监测及敏感药物筛选”（201510061005）

杜庆兵（1991-），男，河南开封人，本科在读，主要从事动物医学研究。E-mail：353129329@qq.com。

金天明（1968-），男，内蒙古通辽人，教授，博士，研究方向为分子免疫病理学。E-mail：jtm680@163.com。