苏南地区汉族人群不稳定型心绞痛患者IL-10基因启动子819C/T多态性分析

倪悦，钱志宏，李银福，何国平

（1.溧阳市人民医院心内科，江苏213300；2.武进人民医院心内科，江苏常州213002）

苏南地区汉族人群不稳定型心绞痛患者IL-10基因启动子819C/T多态性分析

倪悦1，钱志宏1，李银福1，何国平2

（1.溧阳市人民医院心内科，江苏213300；2.武进人民医院心内科，江苏常州213002）

目的探讨苏南地区汉族人群白介素-10（IL-10）基因启动子819C/T多态性与不稳定型心绞痛（UAP）发病的相关性。方法选取2010年6月至2013年2月在溧阳市人民医院心内科及武进人民医院心内科住院的UAP患者146例作为A组，另选取同期行冠状动脉造影排除冠心病患者153例作为B组。采用DNA试剂盒提取两组患者外周静脉血DNA，用回收试剂盒回收PCR产物，进一步测序鉴定IL-10基因819C/T多态性，检测血糖和血脂等生化指标。结果

IL-10基因启动子819C/T在A、B组中均存在CC、CT和TT 3种基因型，且基因分型符合Hardy-Weinbery平衡；A组中3种基因型分布频率及等位基因分布频率与对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；调整对多个危险因素行多元logistic回归性分析，提示IL-10基因启动子819C/T 3种基因型与UAP的发病仍无相关性。结论IL-10基因819C/T多态性与苏南地区汉族人群UAP的发病可能无相关性。

汉族；心绞痛，不稳定型；白细胞介素10/遗传学；基因；多态现象，遗传

不稳定型心绞痛（UAP）的病理基础是冠状动脉粥样斑块的不稳定性，炎性反应贯穿冠状动脉粥样硬化斑块形成及斑块破溃的全过程，炎症和抗炎作用的平衡控制着动脉粥样硬化的进展［1］。白介素-10（IL-10）是一类主要由单核巨噬细胞和辅助性T细胞分泌的，具有抑制单核巨噬细胞释放炎症介质，并能增强抗炎性因子释放的细胞因子，具有下调炎性反应和免疫抑制作用。IL-10参与了冠状动脉粥样硬化的发生、发展，并发挥了重要的保护作用。IL-10基因启动子区域有-1082A/G、-819C/T和-592A/C这3个单核苷酸多态性（SNPs），国内目前鲜见IL-10基因启动子819C/T多态性与UAP关系的文献报道。本研究探讨了苏南地区汉族人群中IL-10基因启动子819C/T单核苷酸多态性与UAP发病的相关性，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选取2010年6月至2013年2月在溧阳市人民医院心内科及常州市武进人民医院心内科住院的UAP患者146例（A组），其中男106例，女44例；年龄30～85岁，平均（65.57±10.55）岁，均行冠状动脉造影明确诊断UAP。另选取同期2家医院住院并部分行冠状动脉造影排除冠心病患者153例（B组），其中男77例，女76例；年龄30～76岁，平均（55.80±11.70）岁。入选对象排除肝脏疾病、肾脏疾病、风湿类疾病、恶性肿瘤、急慢性感染。所有患者均同意参与本研究，并签署知情同意书。

1.2方法记录研究对象的一般临床资料；测定研究对象的血糖、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）等指标。抽取外周静脉血2 mL，置入乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管，抽提DNA后于-70℃冰箱保存。IL-10基因启动子819C/T引物由上海生物技术工程有限公司合成，上游引物5′TGGCTCCCCTTACCTTCTACA3′，下游引物5′GGGTGGGCTAAATATCCTCAA3′，PCR反应体系：dNTP 1 μL，Taq Buffer 5 μL，25 mmol/L MgCl25 μL，10 pmol/L上下游引物各1 μL，Taq DNA聚合酶0.5 μL，DNA模板1 μL，去离子水35.5 μL，共50 μL。PCR反应参数：95℃预变性3 min，然后按94℃30 s，58℃35 s进行35个循环，终末72℃延伸5 min。反应结束后，取5 μL PCR产物，1%琼脂糖电泳（150 V、100 mA、20 min），最后采用回收试剂盒纯化PCR产物并测序，鉴定IL-10基因启动子819C/T基因型。

1.3统计学处理应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，血清TC、LDL等计量资料以±s表示，采用t检验；IL-10基因频率用基因计数法计算，基因型和等位基因频率及Hardy-Weinberg平衡程度采用χ2检验，UAP的多种危险因素采用多元logistic回归分析，用相对危险度（OR）和95%可信区间（95%CI）表示关联程度。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组患者一般临床资料比较A组合并糖尿病及高血压多，且年龄大、吸烟比例高，与B组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）。A组患者血清TC、TG和LDL水平均明显高于B组，差异有统计学意义（P＜0.05或0.01），而HDL水平与B组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1　两组患者一般临床资料比较

2.2IL-10基因启动子819C/T多态性分型IL-10 819C/T基因多态位点经PCR扩增后获得目的片段大小为140 bp，见图1；IL-10 819C/T基因表达的多态性产物测序见图2。

图1　IL-10基因启动子819C/T基因目的片段PCR扩增电泳图

图2　IL-10基因启动子819C/T位点表达的多态性PCR产物测序图

2.3IL-10基因启动子819C/T多态性与UAP关系分析两组均存在CC、CT和TT 3种基因型，且基因分型符合Hardy-Weinbery平衡。两组基因型频率和等位基因频率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；对这3种基因型行多个危险因素（包括年龄、性别、吸烟、高血压、糖尿病、血脂）logistic回归分析后，仍然发现IL-10基因启动子819C/T与UAP发病无相关性（P＞0.05），见表2。

表2　IL-10基因启动子819C/T多态性与UAP关系

3　讨论

UAP的主要发病机制是冠状动脉粥样斑块的不稳定及伴随的血小板聚集、血栓形成，局部和全身炎症在动脉粥样硬化发生、发展中起着重要作用。UAP患者的冠状动脉粥样斑块中炎性细胞较稳定型心绞痛患者明显增多，多种炎性细胞因子均可影响冠状粥样硬化的发展。IL-10主要由单核巨噬细胞和辅助性T细胞分泌，具有很强的抗炎作用，同时还有免疫刺激作用及免疫抑制作用。已有研究发现，IL-10与自身免疫性疾病的发病密切相关，且参与了心血管疾病的发病过程，IL-10能够调节血管炎症与斑块稳定，对粥样硬化形成发挥重要的保护作用［2-3］。有研究发现，急性冠状动脉综合征患者，IL-10的浓度可下降也可不变，但与促炎因子的比值是下降的，促炎因子与抗炎因子间的失衡可能促进急性冠状动脉综合征的发生，高表达的IL-10具有保护血管、对抗粥样硬化及减少急性冠脉事件的作用［4-5］。

冠心病的发病是环境因素和基因缺陷共同作用的结果［6］。SNP能够影响疾病的易感性，IL-10基因的启动子有多个SNP位点，启动子区能够调控基因的转录，该区存在的基因多态性可能影响到基因的转录，从而导致不同个体间IL-10基因的表达差异。Trompet等［7］对IL-10启动子区域SNP与发生冠心病和脑血管事件的风险进行了遗传关联研究发现，-592C/A多态性与冠心病发生有关。Fragoso等［8］发现，IL-10启动子区域-592C/A和-1082A/G多态性会增加急性冠状动脉综合征的患病风险。Yu等［9］研究表明，IL-10启动子区域-592C/A和-819C/ T多态性与缺血性心脏病的发病相关。

本研究发现，两组患者均存在CC、CT、TT 3种基因型，且基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。但是未发现两组间3种基因型频率及等位基因频率有差异，且经多因素logstic回归分析发现，3种基因型与UAP的发病仍无相关性，说明该位点的SNP与苏南地区汉族人群UAP发病的易感性无关联。这与Koch等［10］研究发现IL-10启动子区SNP在德国人群中与冠心病或心肌梗死无相关性的研究一致。Donger等［11］对IL-10启动子区域-1082A/G、-819C/T、-592C/A与欧洲人群冠心病的关系进行了研究，但未能发现这些位点与冠心病有关。这些研究出现不同的结果考虑与下列因素有关：（1）其他多态性位点的影响。有研究表明，IL-10启动子区域-1082、IL-10启动子区域-819、-592这3个位点SNP不仅单独对IL-10的表达调控产生影响，还会以连锁的形式控制着IL-10水平变化［12］。（2）研究对象的人选偏倚。本研究入选者的平均年龄较大。（3）研究人种不同。遗传易感性在不同人群种族中存在差异。

综上所述，中国苏南地区汉族人群中IL-10基因启动子-819C/T多态性与UAP的发病未见相关性，需多中心、大样本量的进一步研究来明确IL-10基因SNP与UAP的确切联系。

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Polymorphism analysis of interleukin-10 gene promoter 819C/T polymorphism in patients with unstable angina pectoris among Han population of Sunan region

Ni Yue1，Qian Zhihong1，Li Yinfu1，He Guoping2
（1.Department of Cardiology，Liyang Municipal People′s Hospital，Jiangsu 213300，China；2.Department of Cardiology，Wujin People′s Hospital，Changzhou，Jiangsu 213002，China）

ObjectiveTo investigate the relationship between interleukin-10（IL-10）gene promoter 819C/T polymorphism and unstable angina pectoris（UAP）in the Chinese Han population of Sunan region.MethodsFrom June 2010 to February 2013，a total of 146 patients with UAP（group A）and other 153 healthy subjects without coronary artery disease by coronary arterial angiography（group B）were selected into the study.The DNA kit was adopted to extract DNA from peripheral venous blood，and the PCR products were recovered by the recycle reagent kit.The IL-10 gene polymorphisms were identified by further sequencing. The biochemical indicators of blood sugar and blood fat were detected.ResultsThe three genotypes CC，CT and TT in IL-10 gene promoter 819C/T existed in the group A and B，moreover the genotyping conformed to the Hardy-Weinbery balance；the 3 kinds of genotype distribution frequency and allele distribution frequency in the group A had no statistical difference compared with the control group（P＞0.05）；the multivariate Logistic regression analysis by adjusting multiple risk factors indicated that there was no significant correlation between three genotypes of IL-10 gene promoter 819C/T and UAP pathogensis.ConclusionThe IL-10gene819C/TpolymorphismmayhavenocorrelationwithUAPpathogensisamongtheChineseHanpopulationofSunanregion.

Han nationality；Angina，unstable；Interleukin-10/genetics；Genes；Polymorphism，genetic

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.09.015

A

1009-5519（2016）09-1323-03

倪悦（1983-），硕士研究生，主治医师，主要从事心血管内科临床工作。

（2016-01-11）