超高效液相色谱法同时检测抗风湿类保健品及中成药非法添加的解热镇痛抗炎药和激素类成分

庄航，葛雪松，卓静，张新勇，孙桐

（江苏省宿迁市食品药品检验所，江苏宿迁223800）

超高效液相色谱法同时检测抗风湿类保健品及中成药非法添加的解热镇痛抗炎药和激素类成分

庄航，葛雪松，卓静，张新勇，孙桐

（江苏省宿迁市食品药品检验所，江苏宿迁223800）

目的建立同时检测抗风湿类保健品及中成药中非法添加解热镇痛类及激素类化学药物的超高效液相色谱法。方法采用Waters Acquity UPLC BEH C18柱（75 mm×2.1 mm，1.7 m）为色谱柱，流动相为水（36%醋酸调节pH至4.5）-甲醇，梯度洗脱，流速为0.2 mL/min，DAD检测器（210～400 nm），检测波长230 nm，柱温35℃，进样量1 L。结果13种化学药物得到良好分离，在测定范围内线性关系良好（r 0.999 0），检测限为0.024～0.420 ng，定量限为0.078～1.399 ng，平均回收率大于96%。结论该方法专属性好，操作简便，快速准确，可用于抗风湿类保健品及中成药中非法添加解热镇痛类和激素类药物的同时检测。

超高效液相色谱法；保健品；中成药；解热镇痛抗炎药；激素

解热镇痛药为一类具有解热、镇痛药理作用，同时还有显著抗炎、抗风湿作用的药物，因此又称为解热镇痛抗炎药。鉴于其抗炎作用与糖皮质激素不同，国际上自1974年起将其归入非甾体类抗炎药类。解热镇痛药是临床常用药物，然而其滥用或加大剂量应用，可产生显著的毒副作用和不良反应。非甾体消炎镇痛药可加强糖皮质激素的致溃疡作用。近几年来，一些不法分子在抗风湿镇痛类假冒伪劣保健品中非法添加化学药物［1-12］，给消费者生命安全造成严重危害［13-15］。笔者从缺乏液质联用仪器的基层药检所实际工作需要出发，建立了同时筛查测定保健品中非法添加解热镇痛抗炎药和种激素类成分的方法，现报道如下。

1　仪器与试药

1.1仪器

Waters H-class型超高效液相色谱仪（DAD检测器，美国沃特斯公司）；Mettler XP205型电子天平（瑞士梅特勒-托利多集团），PHS-3C型酸度计（上海雷磁精密仪器厂）。

1.2试药

甲醇（色谱纯，德国默克公司），36%醋酸为分析纯，超纯水由默克密理博（Merck Millipore）Milli-Q Advantage A10超纯水系统制得。

对照品均来源于中国食品药品检定研究院。对乙酰氨基酚（1，批号10018-200408），吡罗昔康（2，批号100177-200603），泼尼松（3，批号100199-201002），美洛昔康（4，批号100679-200401），氢化可的松（5，批号100152-200206），地塞米松（6，批号100129-201105），醋酸泼尼松（7，批号100012-200706），萘普生（8，批号100330-200101），醋酸地塞米松（9，批号100122-201206），保泰松（10，批号100481-200601），双氯芬酸钠（11，批号100334-200302），吲哚美辛（12，批号100258-200403），布洛芬（13，批号100179-201406）。抗风湿镇痛类保健品由宿迁市及辖区内各县食品药品监督管理局提供，乌蛇枸杞丸（批号为20130801，标示产地为河南省），双蛇全蝎胶囊（批号为20120805，标示产地为河南省），痛风灵胶囊（批号为120820，标示产地为浙江省），神缘通络丹（批号为20150720，标示产地为西藏自治区），络痛康胶囊（批号为20140226，标示产地为江西省），百草骨康灵（无批号，标示产地为海南省），鹿骨全蝎胶囊（批号为20131117，标示产地为河南省），风痛安胶囊（批号为20150202，标示产地为吉林）。

2　方法与结果

2.1色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Waters Acquity UPLC BEH C18柱（75 mm× 2.1 mm，1.7 μm）；流动相：水（36%醋酸调节pH至4.5，A）-甲醇（B），梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1；流速：0.2 mL/min；检测波长：230 nm；柱温：35℃；进样量：1 μL。拟订色谱条件下，色谱图见图1。

表1　流动相梯度洗脱程序

2.2溶液制备

对照品溶液：分别精密称取对乙酰氨基酚30 mg，吡罗昔康15 mg，泼尼松25 mg，美洛昔康25 mg，氢化可的松25 mg，地塞米松25 mg，醋酸泼尼松25 mg，萘普生25 mg，醋酸地塞米松25 mg，保泰松25 mg，双氯芬酸钠25 mg，吲哚美辛25 mg，布洛芬55 mg，置500 mL容量瓶中，加甲醇350 mL，超声处理使其溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。再精密量取上述对照品贮备液各1，2，5，10，20 mL，分别置20 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

供试品溶液：胶囊取内容物混匀；片剂、丸剂，研细。精密称取上述样品适量（相当于1次服用量），置100 mL容量瓶中，加甲醇70 mL超声约30 min，放冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液。

2.3方法学考察

干扰试验：选择不含上述解热镇痛抗炎类及激素类化学药物的制剂，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液，按上述色谱条件进行测定。结果表明，阴性对照品溶液对测定无干扰。

线性关系考察：取上述对照品溶液，按拟订色谱条件分别进样1 μL，记录色谱图，以质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归。结果在线性范围内13种成分的质量浓度与峰面积均呈良好的线性关系，见表2。

图1　超高效液相色谱图

检测限与定量限确定：取对照品贮备液，通过一系列倍比稀释，依法测定得到其检测限（S/N=3）与定量限（S/N=10）。见表2。

精密度试验：取对照品贮备液，连续进样6次，记录色谱图。结果13种成分峰面积的RSD均小于0.9%（n=6），表明仪器精密度较好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12 h时进样。结果各组分峰面积的RSD均小于0.9%（n=6），表明供试品溶液在12 h内稳定性较好。

重复性试验：取同一批供试品，精密称取5份，按2.3项下方法制备供试品溶液，依法测定。结果各成分含量的RSD均小于1.0%（n=5），表明方法重复性好。

加样回收试验：取阴性样品风痛安胶囊（每次口服量4粒），置100 mL容量瓶中，共9份，3份为1组，分别加入上述对照品贮备液8，10，12 mL，再按供试品溶液的制备方法制得续滤液，即得。按拟订色谱条件进样测定，并计算回收率。结果见表3。

2.4样品含量测定

取对照品溶液及8批样品依法处理而得的供试品溶液，按拟订色谱条件进样。结果表明，有7批样品具有与对照品溶液相同保留时间的色谱峰，且其紫外吸收光谱图谱一致，疑似非法添加有解热镇痛类成分和激素类成分。后期经取得中国计剂认证（CMA）资质单位检验并出具高效液相色谱质谱联用（HPLC-MS）法定检验报告，验证了上述结果。

表2　线性方程与范围、检测限及定量限

表3　各组分加样回收试验结果（%，n=9）

3　讨论

3.1流动相选择

以水（36%醋酸调节pH至4.5）-乙腈作为流动相进行梯度洗脱，因压力变化较大，导致基线不平稳，在低浓度测定时，影响测定结果。以水（36%醋酸调节pH值）-甲醇为流动相进行梯度洗脱，随着pH值调低，对乙酰氨基酚保留时间缩短，有干扰。经过试验确定了以水（36%醋酸调节pH至4.5）-甲醇作为流动相，并解决双氯芬酸钠、吲哚美辛、布洛芬3种成分分离度的问题［16］。

3.2温度选择

由于同时测定化学成分多，为了提高各个成分之间的分离度，采用40℃的柱温，试验时发现对乙酰氨基酚与吡罗昔康的峰形较差，则改用30℃的柱温，但部分成分不能有效分离，最终确定35℃作为最佳柱温。

3.3波长选择

采用水（36%醋酸调节pH至4.5）-甲醇作为流动相，选择波长在263 nm处测定，布洛芬响应值较小；选择低于230 nm的波长测定，基线影响低浓度检测。因此，选择230 nm［17］波长处测定。

3.4样品处理

美洛昔康在甲醇中溶解度小，需要进行超声处理，因样品添加的剂量不确定性，有必要对样品再稀释进行测定。

综上所述，超高效液相色谱法比高效液相色谱法增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量，在样品非法添加筛查中，建立标准色谱图库和光谱图库，为后期筛查工作提供了方便性。

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Simultaneous Determination of Antipyretic Analgesic and Anti-inflammatory，and Hormone Components Illegally Added in Anti-Rheumatism Health Products and Chinese Patent M edicine by UPLC

Zhuang Hang，Ge Xuesong，Zhuo Jing，Zhang Xinyong，Sun Tong
（Suqian Institute for Drug and Food Control，Suqian，Jiangsu，China223800）

ObjectiveTo establish an UPLC method for the determination of antipyretic analgesic and hormone components illegally added in anti-rheumatism health products and Chinese patent medicine.M ethodsThe UPLC analysis conditions were an Acquity UPLC BEH C18Column（75 mm×2.1 mm，1.7 μm），the mobile phase consisted of water（adjusting pH to 4.5 with 36%acetic acid）-methanol（gradient elution），the flow rate 0.2 mL/min，DAD detector（210-400 nm），the detection wavelength 230 nm，the column temperature 35℃，and the injection volume 1 μL.ResultsThe 13 kinds of chemical compositions were well separated.There was a good linear relationship within determination range（r≥0.999 0）.The detection limit was 0.024-0.420 ng and the limit of quantification was 0.078-1.399 ng.The average recovery was more than 96%.ConclusionThe method is sensitive，simple and accurate，and can be used in the determination of the antipyretic analgesic and hormone components illegally added in anti-rheumatism health products and Chinese patent medicine.

UPLC；health products；Chinese patent medicine；antipyretic analgesic and anti-inflammatory drug；hormone

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）17-0071-04

庄航（1979-），男，汉族，江苏泗阳人，大学本科，副主任药师，主要从事药品检验及药品质量标准研究工作，（电话）0527-84355878（电子信箱）zhuanghang826@sohu.com。

（2016-03-22；

2016-05-14）