艾滋病患者经HAART治疗前后免疫状态比较分析

蒋洪昆　吕程　吕桂桦

(广西壮族自治区柳州市人民医院检验科，广西 柳州　545000)



艾滋病患者经HAART治疗前后免疫状态比较分析

蒋洪昆吕程吕桂桦

(广西壮族自治区柳州市人民医院检验科，广西 柳州545000)

目的：检测艾滋病患者经高效抗逆转录病毒治疗(Highly active antiretroviral therapy，HAART)前后外周血CD4、CD8、CD3、NK、B细胞的表达情况，比较分析艾滋病患者治疗前后免疫状态。方法：采用流式细胞分析方法检测艾滋病患者CD4、CD8、CD3、NK、B细胞的表达情况，所得数据采用SPSS13.0统计软件处理。结果：在艾滋病患者外周血中，CD4+细胞比例、B细胞比例、CD4+/CD8+比值明显低于正常人(P<0.01)，CD8+细胞比例、CD3+细胞比例明显高于正常人(P<0.05)，NK细胞比例与正常人无显著性差异。治疗后CD4、 CD8、CD3绝对计数也较治疗前明显升高(P<0.05)，治疗前后NK、CD4/CD8变化不明显，治疗后的B细胞百分比明显低于治疗前(P<0.05)。结论：艾滋病患者的免疫力明显低于正常人，经HAART治疗后免疫力有所升高，但仍处于较低的水平。

艾滋病；免疫状态；HARRT

从艾滋病出现以来，国内外的学者都对艾滋病做了大量的研究，CD4细胞的数量和功能的降低是引起人体免疫功能缺陷的主要原因, 它在维持机体的细胞免疫和体液免疫中具有枢纽作用。CD4淋巴细胞计数作为直接测定免疫功能的方法是提供感染者免疫系统损害最明确的指标[1]。CD8免疫细胞在防御、感染和控制HIV复制方面起着重要的作用，它可以直接通过裂解HIV感染的细胞，也可以通过分泌一些因子来抑制HIV的复制[2]。

HAART全称Highly active antiretroviral therapy，高效抗逆转录病毒治疗。现在我们比较艾滋病患者经HAART治疗前后的各项免疫指标变化，来监测HAART的治疗效果。

1　临床资料与方法

1.1研究对象

1.1.1住院艾滋病患者

住院的艾滋病患者共123例，男97例，女26例，年龄18-82岁，平均年龄42岁，经过免疫印迹法(Western Blot)确诊为HIV感染，HIV抗体阳性，根据美国1993年修订的HIV感染分类系统及AIDS诊断标准为C3期，平均CD4淋巴细胞计数94·μl-1。

1.1.2门诊HIV感染者

HIV感染者69例，男40例，女29例，年龄20-78岁，平均年龄36岁，经过免疫印迹法(Western Blot)确诊为HIV感染，HIV抗体阳性，未发病，平均CD4淋巴细胞计数280·μl-1。

1.1.3正常对照

正常健康志愿者共30例，男19例，女11例，年龄24-48岁，平均年龄36岁。

1.2方法

采用配对设计观察33例艾滋病患者经HAART治疗前后各项指标的变化情况。

用EDTA-K2抗凝的真空采血管收集外周血，48 h内完成测定。CD4、CD8绝对计数采用FACSCount 流式细胞仪极其配套试剂。每份标本收集30000个细胞。T淋巴细胞亚群的测定采用FACSCalibur流式细胞仪极其配套试剂进行检测。

淋巴细胞亚群的测定采用FACSCalibur流式细胞仪极其配套试剂进行检测。

1.3统计学处理

所有数据均采用SPSS13.0统计软件处理，阳性细胞率以均数表示，采用t检验、方差分析、方差齐性检验、相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义

2　结果

2.1艾滋病患者、无症状HIV感染者与正常对照组淋巴细胞亚群、T细胞亚群的比较

经t检验，艾滋病患者与无症状HIV感染者CD4+细胞比例、CD4+/CD8+比值明显低于正常人(p=0.000)；而他们两者CD8+细胞比例明显高于正常人(p=0.000)；艾滋病患者CD3+细胞比例明显高于正常人(P<0.05)，但无症状HIV感染者CD3+细胞与正常对照无显著性差异(P>0.05)；三者NK细胞比例无显著性差异(P>0.05)；艾滋病患者B细胞比例明显低于正常人(P<0.05)，但无症状HIV感染者B细胞与正常对照无显著性差异(P>0.05)。艾滋病患者CD4+细胞比例、CD4/CD8、明显低于无症状HIV感染者(P<0.01)；其CD8+细胞比例明显高于无症状HIV感染者(P<0.01)，而两者在CD3细胞、NK细胞、B细胞百分比上无明显差异(P>0.05)，见表1。

表1　艾滋病患者、无症状HIV感染者与正常对照组比较

注：与正常对照相比，*P<0.05，**P<0.01；与无症状HIV感染者相比，△△P<0.01。

2.2艾滋病患者经HAART治疗前后各项指标的比较

33例艾滋病患者经HAART治疗3个月后，得到的数值进行配对检验。治疗后CD4绝对计数明显高于治疗前(P=0.021)，治疗后CD8绝对计数也较治疗前明显升高(P=0.000)；治疗前后CD4/CD8变化不明显(P=0.710)，治疗后CD3绝对计数明显高于治疗前(P=0.000)，治疗前后NK细胞变化不大(P=0.116)，B细胞则变化较大，治疗后的百分比明显低于治疗前(P=0.025)，治疗后CD8+CD3+百分比明显高于治疗前(P=0.001)，见表2。

表2　艾滋病患者经HAART治疗前后各项指标的比较

注：与治疗前相比，*P<0.05。

3　讨论

艾滋病是获得性免疫缺陷综合征(Acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)的简称，1981年才被人们认识的一种新的性传播疾病。是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)引起的人体细胞免疫功能缺陷，导致一系列条件致病微生物感染和肿瘤发生的致命性综合征。AIDS的发病机制尚未完全阐明，但病毒和宿主因素相互作用的复杂过程是其主要原因。AIDS的最主要的特征之一是CD4 T细胞的逐渐丢失。人体内CD4 T淋巴细胞是HIV的主要受体，在HIV直接和间接作用下，细胞大量被破坏和功能受损，导致细胞免疫缺陷。同时其他免疫细胞均不同程度受损，促进并发各种严重的机会性感染和肿瘤发生，导致死亡。当CD4细胞低于200个·μl-1时，逐渐出现临床症状[3]。

我们对艾滋病患者、无症状HIV感染者、正常人做两两比较，CD4、CD4/CD8大大低于正常水平，而CD8则由于机体对HIV的免疫反应而升高，这说明艾滋病患者的免疫功能极其低下，国内有报道称艾滋病患者NK细胞明显低于健康对照组，而它与HIV感染组则无明显差异[4]，国外也提出NK细胞在人感染HIV后数量降低[5]，并且与疾病进展相关[6,7]，我们的实验得出艾滋病患者、HIV感染者、正常人三者NK细胞在总淋巴细胞中的百分比无明显差异，这是由于报道的是NK细胞绝对计数而我们试验测出的是它占总淋巴细胞的百分比，这会受到T细胞和B细胞的影响，从表1我们可以看出NK的百分比从艾滋病患者到无症状HIV感染者再到正常人是有上升趋势的。无症状的HIV感染的免疫功能较艾滋病患者高，但仍远远低于正常人的水平。

对艾滋病的治疗目前国内通常使用包括蛋白酶抑制剂在内的两种或多种药物的联合疗法被称为高效抗逆转录病毒治疗(HAART)，可以延长病人的寿命，使病死率降低[8]。艾滋病治疗的原则是早诊断、早治疗。采用抗病毒、抗机会性感染、抗肿瘤及全身支持治疗的综合疗法。自1990年国内治疗艾滋病以来，尚无统一的治疗方案和评价指标。目前比较常用方法是强效抗逆转录病毒治疗(HAART)，通过抑制 HIV复制，重建机体免疫系统，降低AIDS的发病率和死亡率[9]。本试验标本来源龙潭医院所用的HAART治疗方法为2个核苷类逆转录酶抑制剂+1个非核苷类逆转录酶抑制剂，核苷类逆转录酶抑制剂包括齐多夫定、司他夫定、拉米夫定、去羟基苷、阿吧卡韦；非核苷类逆转录酶抑制剂为奈韦拉平、依非韦伦；常用齐多夫定+拉米夫定+依非韦伦(奈韦拉平)，蛋白酶抑制剂因为其副作用很大，会引起脂肪异常，在临床上不常用。

CD4 T淋巴细胞计数是艾滋病诊断、疾病分期、制定抗病毒治疗和预防机会性感染方案的实验室标准指标，CD4 T淋巴细胞计数也是与病毒载量相配合预测疾病进程的可靠指标，这两个实验可以相互独立预测艾滋病临床过程和生存期。检测 CD4细胞数的标准方法是流式细胞仪。本试验临床上以CD4细胞绝对计数均<200个·μl-1并结合临床表现为用药标准，给予HAART治疗。并以监测CD4 T淋巴细胞上升程度为观察治疗的效果的指标。

我们选取了33例患者，并观察他们经HAART治疗后免疫状况的改变情况，治疗后CD4、CD8、CD3的绝对计数较治疗前都有很大升高，这个结果与其它一些作者的报道一致[10]，CD4、CD8、CD3细胞数量的回升表面了机体免疫功能的恢复，说明高效抗逆转录病毒治疗(HAART)是治疗艾滋病有效的治疗方案[11,12]，能够有效抑制HIV的复制，重建机体的免疫系统[13]。

1叶景荣,孙伟东,赵月娟,等 2006年北京市人类免疫缺陷病毒感染者/艾滋病患者免疫状况分析[J]. 疾病监测, 2007, 20(9): 591-593.

2LiebeRman J, Shankar P, Manjunath N, et al. Dressed to kill a review of why antiviral CD8 T lymphocytes fail to prevent progressive immunodeficiency in HN-I infection[J]. Blood, 2001, 98(6): 1667-1677.

3孙传正. CD4、CD8细胞与艾滋病治疗免疫评价及实践[J]. 中国中医基础医学杂志, 2005, 11(8): 633-644.

4刘瑛,尚红,张子宁,等. 自然杀伤细胞表面抗原在无症状人免疫缺陷病毒感染者/艾滋病患者中的表达[J]. 中华检验医学杂志, 2003. 26(6): 365-367.

5Hu PF, Hultin LE, Hultin P, et al. Natural killer cell innunodeficiency in HIV disease is manifest by profoundly decreased numbers of CD16+CD56+cells and expansion of a population of CD16dimCD56-cells with low lytic activity[J]. J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol, 1995, 10(3): 331-340.

6Sondergaare SR, Ullum H, SkinhoJ P, et al. Epinephrine-induced mobilization of natural killer(NK) cells and NK-like T cells in HIV-infected patients[J]. Cell Immunology, 1999, 197(2): 91-98.

7Ullum H, Cozzi Lepri A, Aladdin H, et al. Natural immunity and HIV disease progression[J]. AIDS, 1999, 13(5): 557-563.

8孙蕾,李倩如,杨璇,等. HAART对人类免疫缺陷病毒感染者淋巴细胞亚群的影响[J]. 现代免疫学, 2007, 27(4): 306-309.

9张景祥,徐振源,吴有炜,等. 细胞与艾滋病治疗免疫评价的研究[J]. 疾病控制杂志, 2007, 8(4): 339-341.

10阮桂仁,邱志峰,李太生,等. 高效抗逆转录病毒治疗12个月后艾滋病患者的免疫重建观察[J]. 中华内科杂志, 2006, 45(7): 569-572.

11Panel on clinical practices of HIV infection. Guidelines for the use of antiretroviral agents in HIV-infected adults and adolescents[S]. Washington D.C: Government Printing Office, 2005.

12Severe P, Leger P, Charle M, et al. Antiretroviral therapy in a thousand patients with AIDS in Haiti[J]. N Engl J Med, 2005, 353(22): 2325-2334.

13Li TS, Tuviana R, Katlama C, et al. Long-lasting recovery in CD4+ T-cell function and viral-load reduction after highly active antiretroviral therapy in advanced HIV-1 disease[J]. Lancet, 1998, 351(6): 1682-1686.

Comparation of immune status in patients with AIDS before and after the treatment with HAART

Jiang Hong-kun, Lv Cheng, Lv Gui-hua

(Department of Clinic Laboratory, Liuzhou People’s Hospital,Guangxi Liuzhou 545000)

Objective： To investigate the changes of CD4, CD8, CD3, NK, B lymphocytes in peripheral blood of patients with AIDS, and compare the immune status in patients with AIDS before and after the treatment with highly active antiretroviral therapy (HARRT). Methods: CD4, CD8, CD3, NK, B lymphocytes in blood were detected using flow cytometry in patients with AIDS. All of the numerical data is analyzed with SPSS13.0 statistics software. Results: The percentage of CD4+, B cell and CD4+/CD8+in patients with AIDS was lower than that of healthy adults (P<0.01). The percentage of CD8+and CD3+cell was higher than that of healthy adults (P<0.05). NK cell was approached that of healthy adults. After three months treated with HAART, we collected the results and handled it with paired-samples t test. CD4, CD8, CD3 count in patients treated with HAART was significant increased than those in untreated (P<0.05), but the changes on NK, CD4/CD8 were not significantly，the percentage of B after therapy was lower than that of before (P<0.05). Conclusion: Patients with AIDS have lower immune activity than that of healthy population. After HAART therapy，the immune activity had reversed but still lower than healthy population.

AIDS; Immune Status; HARRT

蒋洪昆，女，主管技师，主要从事临床免疫生化检验，Email：JHK_MAO@163.com。

2016-3-25)