miRNA-210在寻常型银屑病皮损中的表达研究

蒋俊青,顾安康

(天津中医药研究院附属医院 1.皮肤科;2.病科理，天津300120)



miRNA-210在寻常型银屑病皮损中的表达研究

蒋俊青1,顾安康2

(天津中医药研究院附属医院 1.皮肤科;2.病科理，天津300120)

目的探讨miRNA-210在寻常型银屑病皮损中的表达情况及影响。方法收集临床银屑病患者的皮损组织和健康皮肤组织，经过速冻后提取miRNA。采用Stemp-loop技术反转录miRNA，采用RealtimePCR技术检测miRNA的表达，采用绝对定量方法计算miRNA-210的拷贝浓度。免疫组化法对寻常型银屑病皮损组织及正常皮肤组织中RUNX3蛋白的表达结果进行对比分析，并分别记录。结果RealtimePCR显示miRNA-210在寻常型银屑病患者组皮损中表达量较健康组皮肤显著降低(P<0.01)；免疫组化结果显示RUNX3蛋白表达阳性率，寻常型银屑病患者皮损中显著高于健康组皮肤(P<0.05)。结论寻常型银屑病患者皮损中miRNA-210显示为低表达，其可能通过调节靶基RUNX3，参与银屑病发病环节。

寻常型银屑病；miRNA-210；基因表达

(Chin J Lab Diagn,2016,20:1466)

银屑病的发病机制一直未完全阐明，近年来，表观遗传学在其发病机制中的研究得到重视。有研究发现某些特定miRNA在银屑病的发病中起着重要作用[1]，通过检测miRNA-210在寻常型银屑病皮损中的表达，以期探讨银屑病的发病机制。

1　资料与方法

1.1临床资料

所取皮损组织标本来自本院皮肤科门诊已确诊的28例寻常型银屑病患者，其中男12例，女16例，平均年龄40.5(6-75)岁。对照组皮肤组织来自整形外科手术切除的26例健康皮肤组织，其中男11例，女15例，平均年龄42.5(8-77)岁。将已取皮肤组织冻存于液氮中待用。两组实验者除银屑病之外的其他自身条件差别无统计学意义(P>0.05)。

1.2仪器与试剂

总RNA抽提试剂Trizol由西安融智生物技术有限公司提供、miRNA-210特异性引物由百奥迈科生物技术有限公司提供、蛋白质抽提试剂盒由上海名劲生物科技有限公司提供、miScriptSYBRGreenPCRkit等试剂及仪器由南京奥多福尼生物科技有限公司提供。

1.3方法

1.3.1检测miRNA-210的表达将冻存组织碾碎，应用相关试剂提取总RNA后，然后应用上述反转录试剂盒将刚提取的RNA反转录为cDNA，详细步骤按照仪器及试剂说明进行操作。用Real-timePCR检测并对比28例寻常型银屑病患者和26例健康对照的miRNA-210表达水平。

1.3.2检测RUNX3蛋白表达采用免疫组化EnVision法检测寻常型银屑病皮损组织和健康组织中RUNX3的表达。对两组组织病理切片进行显微镜观察分析，并对结果进行分级评分，评分标准参考病理指标。计算切片着色程度及着色阳性细胞所占比例得分，并将两者乘积作为最后的得分，得分≧4分者为阳性，计算阳性率并进行统计学分析。

2　结果

2.1miRNA-210的表达水平

Real-timePCR实验结果显示寻常型银屑病患者皮损与正常组织相比，miRNA-210的表达显著降低(P<0.01)。见表1。

表1　皮损与正常皮肤组织miRNA-210表达情况

2.2RUNX3蛋白表达水平

免疫组化结果显示：寻常型银屑病患者皮肤组织RUNX3蛋白表达水平明显高于正常皮肤组，差异具有统计学意义(χ2值=24.36，P<0.05)，见表2。

表2　皮损与正常皮肤组织RUNX蛋白3表达情况

3　讨论

银屑病的发病机制，目前多认为是多种因素相互影响作用导致的，包括感染、代谢、遗传、免疫和环境因素[1]。表观遗传学在银屑病的发病机制中起着重要作用，其中包括非编码小RNA(如miRNA)的调控等[2]。miRNAs是人体种类最多的调节基因，占人类基因组的1%-5%，控制约30%的蛋白质编码基因的表达，目前为止，发现的miRNA种类就有上千种。miRNA主要是通过与mRNA的3`端非编码区结合进而抑制翻译或引发mRNA降解，阻遏基因转录后的翻译过程，对细胞代谢等多个环节产生影响。有研究表明miRNAs在银屑病的发展中起着重要的调节作用[3]，miRNA-203是银屑病中第一个被发现的miRNA，研究证实其表达具有组织特异性，在皮肤中的表达明显高于其他组织器官，而在在银屑病患者皮损处表达又显著高于正常皮肤。miRNA-203靶基因为细胞因子通路抑制因子3(suppressorofcytokinesignaling3,SOCS-3)[4]，SOCS-3对表皮角质形成细胞的增殖分化有重要调节作用，SOCS-3是信号转导及转录激活因子3(singaltransduserandactivatoroftranscription,STAT3)通路的负性调节因子，可抑制STAT3的活化，而STAT3信号通路激活是导致银屑病皮损发生的重要机制之一，而miRNA-203表达上调使得STAT3信号通路持久性激活，引起皮肤银屑样变，但miRNA在银屑病皮损高表达的机制以及如何调控靶基因表达的机制仍待进一步的研究。有研究[5]通过基因芯片技术筛选出一些银屑病相关差异性表达的miRNA，如miRNA-21、miRNA-203a、miRNA-146a、miRNA-125b等，这些miRNA已被证实在银屑病皮损组织中表达，参与调控银屑病基因调控，进而增加皮损的炎症反应和角质形成细胞的增生。

我们通过real-timePCR技术，证实了miRNA-210在寻常型银屑病患者皮损中相对于健康皮肤组织显著表达下调。对miRNA-210靶基因查找发现，RUNX3可能是其潜在靶基因。现已在银屑病发病的免疫分子学中发现Th1细胞异常活化可促进炎性因子的释放和炎症放大，使得炎症反应持续发生和角质形成细胞异常增殖分化，最终导致银屑病的皮损出现。有研究[6]发现由Th1细胞分泌的细胞因子IL-2、INF-γ均高表达于银屑病患者血清及皮损，而WongWF等[7]发现RUNX3可促使CD4+T细胞向Th1细胞分化，并将促进上述细胞因子分泌。综上，RUNX3参与银屑病皮损的发生，并在其中起到一定的作用。另外，我们比较了寻常型银屑病患者皮损组织中的RUNX3蛋白表达阳性率，结果显著高于健康皮损组，且发现miRNA-210的表达水平和RUNX3蛋白水平呈负相关，证实miRNA-210 可以作用于RUNX3基因，通过对基因的调节在转录后水平上抑制RUNX3的蛋白表达，而具体的调节机制需要进一步深入研究。

[1]陈春丽,刘新梅,普雄明，等.微RNA在银屑病中差异表达的研究进展[J].医学综述,2016,(3):443.

[2]KooistraSM,HelinK.Molecularmechanismsandpotentialfunctionsofhistonedemethylases[J].NatRevMolCellBiol,2012,13(5):297.

[3]禹欢欢,王晓华,蔡碧珊,等.银屑病相关miRNAs表达的研究进展[J].皮肤性病诊疗学杂志,2015,(3):258.

[4]XiaJ,JoyceCE,BowcockAM,etal.NoncanonicalmicroRNAsandendogenoussiRNAsinnormalandpsoriatichumanskin[J].HumMolGenet，2013,22(4):737.

[5]杨志波,唐雪勇.银屑病差异表达microRNA与靶基因及基因功能调控网络的研究[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志,2012,11(2):69.

[6]HeJ,WuJ,XuN,etal.MiR-210disturbsmitoticprogressionthroughregulatingagroupofmitosis-relatedgenes[J].NucleicAcidsRes,2013,41(1):498.

[7]WongWF,KohuK,ChibaT,SatoT,SatakeM.InterplayoftranscriptionfactorsinT-celldifferentiationandfunction:theroleofRunx[J].Immunology,2011,132(2):157.

StudyontheexpressionofmiRNA-210intheskinlesionsofpsoriasisvulgaris

JIANG Jun-qing,GU An-kang.

(Department of Dermatology,the Affiliated Hospital of Tianjin Traditional Chinese Medicine Research Institute,Tianjin 300120,China)

ObjectiveToexploretheexpressionofmiRNA-210inthelesionsofpsoriasisandtheinfluenceofthedisease.MethodsTheskintissueofclinicalpatientswithpsoriasisandthehealthywerecollected.ThemiRNAwasextractedbyusafterquick-frozen.TheStemp-looptechnologywasusedtoreversetranscriptionofmiRNAandRealtimePCRtevhniquewasappliedtoidentitytheexpressionofmiRNA.ThestandardcurveshouldbemadeandthemiRNA-210copiesofconcentrationbecalculatedbyabsolutequantitativemethod.Thet-testwasusedtocomparethedifferencebetweenpsoriaticskinlesionstissuesandthenormalskintissues,andAp-valuelessthan0.05wasconsideredstatisticallysignificant.TheexpressionofRUNX3inthetwotissuegroupsweredeterminedwithimmunohistochemicalmethod.ResultsRealtimePCRshowedthattheexpressionofmiRNAinpatientswithpsoriasisvulgarisgroupsdecreasedsignificantlycomparedwiththenormalgroups(P<0.05).TheresultsofimmunohistochemistrydemonstratedthattheexpressionofRUNX3proteininskinlesionsofpatientswithpsoriasisvulgarisweresignificantlyhigherthanthatnormalskin(P<0.05).ConclusionLowerexpressionofmiRNA-210wasdetectedinthelesionsofpatientswithpsoriasisvulgaris.ThemiRNA-210mayeffectonitstargetgenesRUNX3andthenplayaroleintheonsetofpsoriasis.

psoriasisvulgaris;microRNA-210;geneexpression

1007-4287(2016)09-1466-03

R758.63

A

2015-09-08)