浅谈离子色谱法检测生鲜乳中硫氰酸根

2016-10-29赵化芳

甘肃畜牧兽医 2016年14期

关键词：硫氰酸色谱法生鲜

赵化芳

（新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站，新疆　乌鲁木齐　830063）

浅谈离子色谱法检测生鲜乳中硫氰酸根

赵化芳

（新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站，新疆乌鲁木齐830063）

应用离子色谱法测定生鲜乳中硫氰酸根的检测方法，用乙腈沉淀蛋白，尝试冷冻离心法去除脂肪；对比等度淋洗与梯度淋洗检测效果，寻找最快捷、准确、使用的检测方法。

离子色谱法；生鲜乳；硫氰酸根

硫氰酸钠（NaSCN）是白色斜方晶或粉末，在体内释放的氰根离子可使组织不能利用氧，而出现恶心，呕吐，抽搐，呼吸衰竭等中毒症状，并妨碍机体对碘的吸收，降低甲状腺过氧化氢酶的活性，造成碘缺乏进而引起甲状腺肿大［1］。我国于1995，1996年先后发布了在乳品中的使用规范和添加剂标准，规定添加硫氰酸钠15 mg/kg，利用乳过氧化物酶体系保存生鲜牛奶，防止牛奶腐败［2］。由于硫氰酸盐的毒性作用及其滥用，我国于2005年和2007年先后取消了在乳品中的使用规范和添加剂标准，并在2008年12月12日公布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单（第一批）》，明确规定乳及乳制品中硫氰酸钠属于违法添加物质［3］。我国指定的硫氰酸根检测方法为离子色谱法。

1　原理

生鲜乳样品经乙腈沉淀蛋白，经冷冻离心法或RP柱法去除脂肪后，过滤，用离子色谱仪外标法测定。

2　试剂和材料

（1）水为去离子水，符合GB/T 6682中用水规定，硫氰酸钠（NaSCN，纯度≥99.99%），乙腈（色谱纯），旋涡震荡仪。

（2）硫氰酸根标准储备溶液：将硫氰酸钠于101 ℃～103 ℃烘箱内烘干2 h，在干燥器内冷却至室温。准确称取干燥后的硫氰酸钠0.139 57 g于烧杯中，加水溶解，转移定容于1 000 mL容量瓶内，混匀。该硫氰酸根标准储备溶液浓度为100 mg/L。置于4 ℃保存，有效期一个月。

（3）硫氰酸根标准工作溶液：分别吸取硫氰酸根标准储备溶液（1.2）0、20、50、100、400、800和1 000 μL于7个100 mL容量瓶内，用水定容，混匀，得到浓度分别为0、0.020、0.050、0.100、0.400、0.800和1.000 mg/L的硫氰酸根标准工作溶液。该标准工作溶液现用现配［3］。

3　仪器设备

离子色谱仪：配淋洗液发生器和电导检测器，冷冻离心机，10 mL注射器，针孔滤头：0.22 μm（有机系），分析天平：感量0.000 1 g，烘箱。

4　浅谈样品前处理

用移液枪准确量取经旋涡混匀的样品4 ml，加入乙腈5 ml沉淀蛋白，取上清液稀释10倍，过RP柱去脂。由于过RP柱去除脂肪较复杂，成本较高，影响因素较多，回收率低。在实验中开始从两个方面尝试冷冻离心的方法去除脂肪。

方法一，温度均为-4 ℃，转速均为2 000 rmp，离心时间分别为2 min，5 min，8 min；

方法二，温度均为-4 ℃，离心时间均为10 min，转速分别为2 000 rmp，5 000 rmp，8 000 rmp。

经过多次试尝和对比发现，在温度为-4 ℃，转速为8 000 rmp，离心时间为10 min时，得出的图谱分离效果较好，且试验操作过程简捷，成本低，影响因素少，回收率高［4］。

5　色谱条件的选择

在样品前处理、仪器型号、色谱柱类型、柱温、进样量、流速等条件完全相同的情况下，通过梯度洗脱（浓度为40 mmol/L KOH）和等度洗脱（0～13 min和18.1～23 min，氢氧化钾浓度为45 mmol/L，13.1～18 min，氢氧化钾浓度为70 mmol/L）两种色谱条件，测得0.2 mol/l标样峰面积分别为：0.092 8 μS*min，0.091 6 μS*min［5］。其它检测数据如表1：

经统计，等度洗脱与梯度洗脱平均保留时间相差1.976 min，平均回收率相差0.21%，经过计算，梯度洗脱和等度洗脱的保留时间、峰面积、回收率的RSD值均小于1，精密度和回收率均符合试验要求，均可用于生鲜乳中硫氰酸根的检测。但等度洗脱降低了淋洗液氢氧化钾的浓度，缩短了保留时间，降低了试验成本，提高了检测效率。

表1　硫氰酸根0.2 mg/l添加样品结果汇总表

在温度为-4 ℃，转速为8 000 rmp，离心时间为10 min的样品前处理下，通过等度洗脱的色谱条件下进行试验。标准曲线回归方程为Y=0.486X-0.003，R=0.999 9。以时间为横坐标，以面积为纵坐标，绘制标准品和样品色谱图，分别为图1和图2。通过试验发现标准曲线相关系数好，基线稳定，分离度高，干扰物质少，出峰时间短，是可以应用生鲜乳中硫氰酸根的检测的一种方法。