2013～2015年泰州地区猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体监测与分析

孙 谦

（泰州市动物疫病预防控制中心，江苏泰州　225300）

2013～2015年泰州地区猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体监测与分析

孙 谦

（泰州市动物疫病预防控制中心，江苏泰州225300）

对2013～2015年泰州地区不同监测地点进行了猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的免疫抗体水平监测，应用ELISA方法检测2343个群体的22219份猪血清学样品，结果显示，PRRS免疫抗体合格率均达到80%以上。通过对泰州地区不同监测地点的猪血清免疫抗体监测，分析预测猪群中暴发PRRS的风险，为科学有效防控PRRS提供技术支撑。

猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体监测与分析

猪繁殖与呼吸综合征（又名猪蓝耳病，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的猪的一种高度接触性传染病，以母猪流产、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔猪呼吸困难、败血症、高死亡率等为主要特征[1］。2006年，我国爆发了猪“无名高热病”的疫情，其死亡率高并且呈多发态势，造成了一定程度的恐慌，严重影响畜牧业生产安全，最终确定了猪蓝耳病病毒变异株是猪“无高热病”主要病原，并定名为高致病性蓝耳病[2］。

本试验应用ELISA方法对2013～2015年泰州地区2343个群体的猪进行了PRRS免疫抗体水平监测，以了解泰州地区高致病性猪蓝耳病疫苗免疫效力，分析猪群中暴发PRRS的风险。

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1检测样品 猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗免疫28d后，采集2343个不同群体的猪血清样品22219份，置于冰箱4 ℃保存，备检。

1.1.2主要仪器与试剂 猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒，购置于法国LSI公司；酶标仪购置于Bio-Rad公司；微量移液器；一次性移液器吸头；96孔U型稀释板。

1.2方法

1.2.1操作步骤 按试剂盒说明书，采集的待检猪血清用两步法进行200倍稀释，先将待检血清5μL样品加入到稀释板95μl样品稀释液中，混匀；取5μl已稀释好的样品加入到酶标板45μl样品稀释液中，混匀；同时做2份阳性对照和2份阴性对照，每孔50μl添加到酶标板上；封板，37 ℃作用1 h；弃去酶标板中的溶液，酶标板每孔加300 μl洗涤液洗涤3次；用吸水纸拍干；向洗涤好的酶标板每孔加50 μl酶标记物HRPO抗猪的单克隆抗体；封板，37 ℃作用1 h；弃去酶标板中的溶液，酶标板每孔加300 μl洗涤液再洗涤3次；用吸水纸拍干；向洗涤好的酶标板每孔加50 μl底物TMB溶液，室温20℃～25℃避光作用10 min；最后再向酶标板每孔加终止液 50 μl终止反应，用酶标仪测定OD450值。

1.2.2实验成立条件 阳性对照OD450值＞0.6，而且阳性对照平均值/阴性对照平均值 ＞4.0。

1.2.3结果判定 按试剂盒给定计算公式进行判定，PRRS免疫抗体IRPC =（样品OD450值-阴性对照OD450平均值）/（阳性对照OD450平均值-阴性对照OD450平均值）×100，IRPC大于20为阳性，IRPC小于或者等于20为阴性。

2　结果

2.1不同监测地点个体检测结果

对来自种猪场、规模养殖场、散养户、屠宰场的22219份血清样品进行PRRS免疫抗体检测，结果表明，不同类别的猪场PRRS免疫抗体平均个体合格率为95.7%，种猪场的个体合格率最高，屠宰场的个体合格率最低。详见表1。

表1　不同监测地点PRRS个体免疫抗体检测结果

2.2不同监测地点群体检测结果

对2343个不同群体的猪血清样品进行PRRS免疫抗体检测，结果表明，不同群体的猪场PRRS免疫抗体平均群体合格率为96.2%，种猪场的群体合格率最高，屠宰场的群体合格率最低。详见表2。

表2　不同监测地点PRRS群体免疫抗体检测结果

2.3不同年份样品免疫抗体检测结果

对2013～2015年的猪血清样品进行PRRS免疫抗体检测，结果表明，三年间PRRS免疫抗体平均合格率均在95%以上。详见表3。

表3　不同年份PRRS免疫抗体检测结果

3　小结

猪繁殖与呼吸综合征曾在我国多地出现区域性流行态势，猪群中PRRS免疫状态水平对于本病的防治具有重要意义，因此PRRS免疫抗体水平是反映猪群免疫状态的重要指标[3］。目前，国内外诊断PRRS常用的血清学方法较多，大致分为两类，一类以N抗原为包被抗原，另一类以膜抗原为包被抗原，最有代表性的为IDEXX公司生产的ELISA抗体检测试剂盒和LSI公司生产的ELISA抗体检测试剂盒[4］。本实验选用LSI公司生产的PRRS抗体检测试剂盒，用于检测疫苗免疫后产生抗体水平。LSI公司的PRRS抗体检测试剂盒操作简单快速，降低了试验误差，稳定性好，准确度高，重复性好，适用于大规模PRRS的抗体检测。

本研究对不同类别、不同群体、不同年份的猪场PRRS免疫抗体进行监测，结果显示，PRRS免疫抗体合格率均达到80%以上，超过了国家规定的70%的标准，这说明泰州地区猪群PRRS疫苗免疫保护情况较好，免疫效果达到较高水平，PRRS防控工作措施开展有效。

泰州地区种猪场、规模养殖场、散养户的PRRS免疫抗体个体合格率和群体合格率均达到了95%以上，而屠宰场的PRRS免疫抗体个体合格率和群体合格率分别为83.0%和82.8%。屠宰场的PRRS免疫抗体合格率降低可能是由于存在免疫失败、生猪跨区域调运等方面原因，建议加大屠宰场的生物安全措施，落实消毒灭源，防止疫病发生传播，坚持常规免疫抗体监测，加强疫情监测，采取综合措施有效控制PRRS。

[1]殷震，刘景华.动物病毒学[M］.北京：科学出版社，1997： 619-625.

[2]Zhou Y J，Hao X F，Tian Z J，et al.Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome virus emerged in China[J］. Transbound Emerg Dis，2008，55（3-4）：52-64.

[3]彭晓铃，邵剑挺，盛卓君.2011年新疆地区猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体分析[J］.中国动物检疫，2012，29（8）：54-55.

[4]王宏燕.两种不同ELISA法在检测猪繁殖与呼吸综合征抗体中的选择与应用[J］.现代畜牧兽医，2012，（4）：60-62.