反相高效液相色谱法同时测定正胃胶囊中木香烃内酯和去氢木香内酯含量

张治军，曾友保，覃晓

（广西壮族自治区桂林食品药品检验所，广西桂林541002）

反相高效液相色谱法同时测定正胃胶囊中木香烃内酯和去氢木香内酯含量

张治军，曾友保，覃晓

（广西壮族自治区桂林食品药品检验所，广西桂林541002）

目的建立测定正胃胶囊中木香烃内酯和去氢木香内酯含量的反相高效液相色谱（RP-HPLC）法。方法色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5*m），流动相为乙腈-水（65∶35），流速为1.0 mL/min，检测波长为225 nm。结果木香烃内酯质量浓度在24.78～198.24*g/mL范围内与峰面积线性关系良好，r=0.999 8，平均回收率为98.67%，RSD为1.33%（n=6）；去氢木香内酯质量浓度在5.06～40.48*g/mL范围内与峰面积线性关系良好，r=0.999 8，平均回收率为97.07%，RSD为1.07%（n=6）。结论该方法简便、准确、重复性好，可作为控制和评价正胃胶囊质量的方法。

正胃胶囊；木香烃内酯；去氢木香内酯；反相高效液相色谱法；含量测定

正胃胶囊为常见胃药，由猴耳环、木香、七叶莲、陈皮、甘草、次硝酸铋、氧化镁、氢氧化铝组方，收载于国家食品药品监督管理总局药品标准，具有清热凉血、健脾和胃、制酸止痛功效，主要用于胃中灼热、脘腹胀痛、胃炎等的治疗［1］。其中，木香具有健脾消食、行气止痛的功效，主要成分有木香烃内酯和去氢木香内酯［2-3］。为了更全面地控制、评价该制剂的质量，本研究中建立了同时测定正胃胶囊中木香烃内酯和去氢木香内酯含量的反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，经方法学验证，其操作简便，结果准确，可用于控制和评价正胃胶囊的质量。

1　仪器与试药

岛津LC-2010AHT型高效液相色谱仪，紫外检测器（日本岛津公司）。对照品木香烃内酯（批号为111524-200503）和去氢木香内酯（批号为110525-201008）均购自中国食品药品检定研究院；正胃胶囊（批号分别为140801，140305，131101）为市售品；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1溶液制备

混合对照品溶液：精密称取氢木香内酯20.26 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解稀释成质量浓度为0.202 6 mg/mL的溶液；精密称取木香烃内酯对照品24.78 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加上述去氢木香内酯对照品溶液25 mL，溶解稀释至刻度，制成每1 mL分别含木香烃内酯0.247 8 mg、去氢木香内酯0.050 6 mg的混合对照品贮备液。取上述对照品贮备液4 mL，稀释至10 mL，作为混合对照品溶液。

供试品溶液：取正胃胶囊（批号为140305）20粒，倒出内容物，将其研细混匀。称取约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声提取（功率400 W，频率60 kHz）30 min，放冷，称定，用甲醇补足减失的质量，滤过，弃去初滤液约10 mL，取续滤液25 mL，水浴中挥干至约5 mL，置中性氧化铝柱（50～200目，6 g）上，用甲醇50 mL洗脱，水浴中蒸干后用适量甲醇溶解并转移至10 mL棕色容量瓶中，定容，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。

阴性对照品溶液：按正胃胶囊的处方比例和工艺制备不含木香的阴性样品，称取阴性样品约2 g，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.2色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（65∶35）；流速：1 mL/min；检测波长：225 nm。在此色谱条件下，分别取混合对照品溶液、阴性对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，色谱图见图1。

2.3方法学考察

线性关系考察：分别精密量取上述混合对照品贮备液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释成每1 mL含木香烃内酯分别为24.78，49.56，99.12，148.71，198.24 μg，含去氢木香内酯分别为5.06，10.12，20.24，30.36，40.48 μg的混合对照品溶液，按拟订色谱条件进样测定。以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标进行线性回归，得木香烃内酯、去氢木香内酯的回归方程分别为Y=3.75×104X+ 6.94×103，r=0.999 8；Y=4.23×104X+1.17×104，r=0.999 8。结果，木香烃内酯质量浓度在24.78～198.24 μg/mL范围内，去氢木香内酯质量浓度在5.06～40.48 μg/mL范围内分别与各自峰面积线性关系良好。

图1　高效液相色谱图

精密度试验：精密量取木香烃内酯和去氢木香内酯的混合对照品溶液10 μL，在拟订色谱条件下连续进样5次，测定。结果木香烃内酯色谱峰面积平均为118787.2，RSD为0.46%（n=5），去氢木香内酯色谱峰面积平均为300 172.4，RSD为0.54%（n=5），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批（批号为140801）样品6份，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果木香烃内酯及去氢木香内酯的平均含量分别为0.974 5 mg/g和0.194 3 mg/g，RSD分别为1.37%和1.54%（n=6），表明该方法重复性良好。

加样回收试验：精密称取已知含量的正胃胶囊（批号为140801）内容物1 g，6份，分别精密加入混合对照品贮备溶液3，4，5 mL，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率，结果见表1。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，12，18，24 h时进样测定。结果木香烃内酯、去氢木香内酯峰面积的RSD分别为1.46%和1.13%（n=7），表明供试品溶液在24 h内稳定。

表1　加样回收试验结果（n=6）

2.4样品含量测定

按2.1项下方法制备供试品溶液和混合对照品溶液，分别精密吸取各10 μL，按拟订色谱条件进样测定，按外标法计算含量。结果见表2。

表2　样品含量测定结果（mg/g）

3　讨论

本研究中参照文献［4-13］，曾采用超声波提取法与加热回流提取法分别提取0.5，1.0，2.0 h，结果2种提取方法测定木香内酯2种成分的实际峰面积相近，表明提取效率基本相同。但采用加热回流提取杂质较多，同时考虑试验操作的简便性，故选用超声提取法。在提取时间上，试验结果表明，0.5 h基本已提取完全。

由于样品组方为中西药配比，成分较复杂，在实际提取中杂质较多，导致液相色谱下木香烃内酯和去氢木香内酯基线分离不太理想，难以达到准确定量，故本研究中参照文献［14-15］，提取液采用中性氧化铝柱净化后再进样，试验结果较理想。

木香在正胃胶囊处方中为臣药，用量较大，其主要成分木香内酯具有行气止痛、健脾消食功效，在整个制剂功效中起主要作用。但原质量标准中只有次硝酸铋、氢氧化铝和甘草的定量控制，本研究中建立的木香含量测定方法操作简便，测定结果准确，重复性好，可为更全面控制和评价正胃胶囊的质量提供技术研究基础。

［1］YBZ10432009，国家食品药品监督管理局药品标准［S］.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：57-58.

［3］王绪颖，贾晓斌，陈彦.木香类药材的研究进展［J］.中药材，2010，33（1）：153-157.

［4］王海宁.HPLC法测定六味木香胶囊中木香烃内酯和去氢木香内酯［J］.中草药，2014，45（16）：2 349-2 351.

［5］何洋，孙悦，黄娟萍，等.HPLC法同时测定加味香连丸中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量［J］.药物分析杂志，2011，31（2）：222-224.

［6］黄澜，黄丽.RP-HPLC法同时测定保济丸中厚朴酚、和厚朴酚、木香烃内酯及去氢木香内酯的含量［J］.药物分析杂志，2012，32（3）：396-399.

［7］杨宪，刘筱琴，张雪，等.HPLC一测多评法用于木香及3种含木香中药复方制剂的质量评价［J］.中国药房，2014，25（11）：1 030-1 034.

［8］张松亮，顾腾飞，于天杰.HPLC法同时测定木香健胃颗粒中木香烃内酯和去氢木香内酯含量［J］.解放军药学学报，2014，30（1）：63-65.

［9］裴贵珍，郭鑫，张雪峰，等.HPLC法同时测定六味能消胶囊中木香烃内酯、去氢木香烃内酯大黄素、大黄酚的含量［J］.药物分析杂志，2015，35（2）：241-245.

［10］刘俊红，李棣华，伍孝先.提取木香中木香烃内酯及去氢木香内酯影响因素的初步研究［J］.时珍国医国药，2009，20（12）：3 013-3 014.

［11］王永兵，许华，王强.RP-HPLC法测定川木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量［J］.西北药学杂志，2000，15（6）：250-251.

［12］刘正清.不同产地和采收时间木香药材中木香烃内酯和去氢木香内酯的测定［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（16）：116-118.

［13］赖增发，夏丽珍.“一测多评”测定木香顺气丸中木香内酯类成分［J］.中国现代应用药学，2014，31（4）：421-424.

［14］魏华，彭勇，马国需，等.木香有效成分及药理作用研究进展［J］.中草药，2012，43（3）：613-620.

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Content Determination of Costunolide and Dehydrocostuslactone in Zhengwei Capsules by RP-HPLC

Zhang Zhijun，Zeng Youbao，Qin Xiao
（Guilin Institute for Food and Drug Control，Guilin，Guangxi，China541002）

ObjectiveTo establish a RP-HPLC method for the content determination of costunolide and dehydrocostuslactone in Zhengwei Capsules.MethodsThe HPLC system consisted of the Agilent ZORBAX SB-C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）and acetonitrile-water（65∶35）as the mobile phase，the flow rate was 1.0 mL/min and the detectivewavelength was 225 nm.ResultsCostunlide showed a good linear relationship in the range of 24.78-198.24 μg/mL，r=0.999 8，the average recovery was 98.67%and RSD was 1.33%（n=6）.Dehydrocostuslactone showed a good linear relationship at the range of 5.06-40.48 μg/mL，r=0.999 8，the average recovery was 97.07%andRSD was 1.07%（n=6）.ConclusionThe method is sensitive，simple，accurate and repeatable.It can be used for the quality control of Zhengwei Capsules.

Zhengwei Capsules；costunolide；dehydrocostuslactone；RP-HPLC；content determination

R284．1；R286．0

A

1006－4931（2016）14－0078－03

张治军（1971-），男，硕士研究生，副主任药师，研究方向为中药质量检验与控制，（电子信箱）770013802@qq.com。

2015－10－14；

2016－03－28）