早期梅毒患者治疗前后血清IL-27和IL-33水平检测

章鹏飞季必华

(1.芜湖市第一人民医院　皮肤科，安徽　芜湖　241000；2.皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 皮肤科，安徽　芜湖　241001)



·临床医学·

早期梅毒患者治疗前后血清IL-27和IL-33水平检测

章鹏飞1，2季必华2

(1.芜湖市第一人民医院皮肤科，安徽芜湖241000；2.皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 皮肤科，安徽芜湖241001)

目的：检测早期梅毒患者的血清IL-27及IL-33水平，观察梅毒患者在治疗前是否已存在IL-27、IL-33水平的变化及此变化是否影响其预后。方法：选取早期梅毒患者的血清样本，根据治疗后的随访情况分为梅毒血清转阴组和非转阴组，采用双抗体夹心ELISA法分别检测两组治疗前后及正常对照组的IL-27和IL-33水平。结果：①IL-27水平在梅毒血清转阴组治疗前高于非转阴组治疗前(27.31±6.19)ng/Lvs.( 20.98±5.10)ng/L，P<0.05；IL-27水平在非转阴组治疗后高于治疗前(25.34±6.66)ng/Lvs. (20.98±5.10)ng/L，P<0.05。②IL-33水平在梅毒血清转阴组治疗后低于治疗前(4.41±1.33)ng/Lvs. (3.26±1.41)ng/L，P<0.05。结论：IL-27可能有利于机体对梅素螺旋体(treponema pallidum,TP)的清除，而IL-33可能不利于机体对TP的清除。

梅毒;IL-27;IL-33

既往研究发现梅毒患者体内存在细胞免疫失衡，Fitzgerald等[1]提出在梅毒病程发展中，存在Th1向Th2漂移的假说，认为Th1/Th2免疫失衡，可能是梅毒螺旋体能够逃避免疫监视得以继续增殖、梅毒进入潜伏阶段的原因。

IL-27与IL-33分别作为Th1和Th2的调节因子[2-3]，已经被发现参与较多感染性疾病的免疫反应。在梅毒患者体内，二者是否也存在异常？本研究旨在探讨IL-27、IL-33分别作为Th1、Th2细胞的活化因子而在早期梅毒患者(病程小于2年[4])清除体内梅毒螺旋体的免疫应答中的作用。

1　资料与方法

1.1临床资料病例来源于2012年6月～2013年8月在弋矶山医院皮肤性病科门诊就诊者，选取符合诊断及入选标准的初诊未治疗早期梅毒患者共124例，以血清快速血浆反应素环状卡片试验(rapid plasma reagent circle card test,RPR)检测其滴度，并预留作为IL-27、IL-33检测的治疗前血清样本。患者经苄星青霉素G驱梅治疗结束后的第6个月，在入组的124例中共收集到RPR转阴者22例，RPR未下降4倍滴度者19例，从中分别选取18例，作为转阴组及非转阴组，并再次留取其血清作为IL-27、IL-33治疗后的检测样本。所有患者否认既往有驱梅治疗史，排除合并HIV感染、自身免疫性疾病及近3个月内使用糖皮质激素或免疫抑制剂者。同时选取健康志愿体检者18例为正常对照组，所有研究对象均签署知情同意书。具体分组如下：①梅毒血清转阴组共18例(男9例，女9例)，年龄20～49岁，平均(35.97±5.18)岁，正规驱梅治疗6个月后复查血清RPR试验转阴者；②梅毒血清非转阴组共18例 (男8例，女10例)，年龄22～53岁，平均(38.24±5.74)岁，正规驱梅治疗6个月后，复查血清RPR试验未下降4倍滴度者；③正常对照组共 18 例(男9例，女9例)，年龄20～50岁，平均(36.41±7.36)岁。3组间性别(χ2=0.148，P=0.929)和年龄(F=0.362，P=0.798)，差异无统计学意义。

1.2方法所有入选的早期梅毒患者治疗前、治疗后及正常对照组人群均抽取外周静脉血5 mL，于室温下静置10～20 min后放入离心机分离血清(2500～3000 r/min，离心15 min)，取其中部分血清立即做RPR和TPPA试验，同时进行HIV抗体的检测。另取1 mL血清于冻存管分装，并标注编号、姓名、采集日期等放置于-70℃冰箱冻存待测。用双抗体夹心ELISA法集中检测血清IL-27及IL-33水平，试剂盒均购自上海源叶生物技术有限公司，操作按试剂盒说明书的步骤进行。

2　结果

2.1各组IL-27表达量治疗前，梅毒血清转阴组、梅毒非转阴组的血清IL-27水平均高于正常对照组(F=47.79,P<0.05)，且梅毒血清转阴组高于非转阴组 (P<0.05)。治疗后，梅毒血清转阴组、梅毒非转阴组的血清IL-27水平仍高于正常对照组(F=37.42,P<0.05)，但梅毒血清转阴组与非转阴组差异无统计学意义(P>0.05)。IL-27水平在梅毒血清转阴组治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)；在非转阴组治疗前后差异有统计学意义 (P<0.05)。见表1。

组别n治疗前治疗后d±sd配对t值P值转阴组1827.31±6.1928.82±8.131.52±8.360.771>0.05非转阴组1820.98±5.1025.34±6.664.36±8.452.189<0.05

注：正常对照组IL-27=(12.14±1.13)ng/L,F=47.79,P< 0.05。

2.2各组IL-33表达量治疗前，梅毒血清转阴组、梅毒非转阴组的血清IL-33水平均高于正常对照组(F=46.66,P<0.05)，但梅毒血清转阴组与非转阴组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，梅毒血清转阴组、梅毒非转阴组的血清IL-33水平仍高于正常对照组(F=21.57,P<0.05)，但梅毒血清转阴组与非转阴组差异无统计学意义(P>0.05)。IL-33水平在梅毒血清转阴组治疗前后差异有统计学意义(P<0.05)；在非转阴组治疗前后差异无统计学意义 (P>0.05)。 见表2。

组别n治疗前治疗后d±sd配对t值P值转阴组184.41±1.333.26±1.411.15±1.064.603<0.05非转阴组184.37±1.293.97±1.560.40±1.970.861>0.05

注：正常对照组IL-33=(1.38±0.25)ng/L，F=46.66,P< 0.05。

3　讨论

IL-27是2002年发现并命名的IL-12家族细胞因子[5]。IL-27主要由巨噬细胞和树突状细胞产生，是一种由EBI3和p28组成的异二聚体，EBI3与IL-12的p40亚基同源，p28则与IL-12的p35亚基相关[6]。IL-27可诱导巨噬细胞产生IL-12，促进CD4+T细胞的增殖，也能够激活STAT1途径，诱导T-bet活化，从而诱导初始CD4+T细胞向Th1分化，并促进IFN-γ的产生[7-9]。由此可见，IL-27属于Th1系列细胞因子之一。

本实验中转阴组IL-27水平在治疗前明显高于非转阴组治疗前，说明转阴组的患者在治疗前，其血清IL-27即已处于高水平状态，提示对于早期梅毒患者，高水平的IL-27驱动的Th1反应可能有利于对TP的清除。

作为Th1细胞的代表性因子，IL-2、IFN-γ与梅毒的关系已多有报道。有学者检测梅毒患者外周血IL-2水平，发现血清IL-2水平在早期梅毒患者治疗后RPR转阴组最高，未治疗组次之，而治疗后RPR非转阴组最低，表明IL-2水平与RPR的转阴具有正相关性，提示IL-2有利于机体对TP的清除[10]。师金川等[11]采用ELISA分别检测梅毒患者血清复发组、RPR转阴组和正常人群组血清IFN-γ的含量，发现血清复发组IFN-γ水平明显低于正常对照组及RPR转阴组，提示若IFN-γ参与的Th1反应减弱，则不利于TP的清除。以上均提示Th1型反应有利于梅毒螺旋体的清除；而IL-27对Th1型细胞因子的促进作用，可能是其有利于清除TP的原因。

但本实验中，非转阴组的IL-27水平在治疗后明显升高，而梅毒患者血清试验仍未转阴。IL-27对IL-10(Th2型细胞因子)生成的促进作用，可能有助于解释这个现象。Anderson等[12]以利什曼原虫感染小鼠，检测皮损及淋巴结中的白介素及CD4+T细胞数，发现IL-27及IL-10、IFN-γ水平在感染后均增高，再感染IL-27受体缺陷(WSX-1-/-)的小鼠，发现IL-10水平逐渐下降，证明IL-27对IL-10生成的促进作用。IL-27对IL-10的促进作用是否影响对TP的清除，仍需进一步探讨。

IL-33是2005年由Schmitz等[13]鉴定发现的IL-1家族成员，主要由上皮细胞、呼吸道平滑肌细胞、内皮细胞和脂肪细胞产生，可促进 IL-4、IL-5 以及IL-13等Th2型细胞因子产生，在多种炎症过程中发挥重要作用[14]。因此IL-33属于Th2系列细胞因子之一。本研究中，梅毒血清转阴组的IL-33水平在治疗后降低，而非转阴组的IL-33水平在治疗后未明显降低，提示IL-33不利于机体清除TP，这可能与其能够促进Th2反应有关。

有学者[15]发现，梅毒血清固定患者血清中Th2细胞分泌的IL-4、IL-10明显高于梅毒血清转阴组，提示在梅毒患者体内的Th2型反应不利于梅毒螺旋体清除。最近Sattler等[16]发现在炎症性肠病模型的小鼠体内，IL-33能促进IL-10分泌。有学者[17]用流式细胞仪检测梅毒血清固定患者外周血CD4+CD25+IL-10+细胞比例，再用实时PCR技术检测CD4+CD25+细胞的IL-10 mRNA相对表达量。结果显示梅毒血清固定患者组外周血CD4+CD25+IL-10+细胞比例及IL-10 mRNA表达水平均比健康对照组明显增高，认为IL-10参与Th2型免疫反应，造成梅毒患者外周血RPR滴度不转阴。IL-33导致患者体内TP难以清除，是否是因为对IL-4、IL-10等Th2型细胞因子的促进作用，亦需进一步论证。

IL-33对梅毒感染的免疫反应的影响，可能还存在于Th1/Th2平衡的变化中，Leader[18]将芝加哥株梅毒螺旋体感染兔睾丸，实时反转录PCR定量检测外周血的mRNA水平，发现在感染后第11天，IFN-γ的mRNA水平达到最高峰，而IL-4的水平仅为微量，提示在病程早期，机体抵抗梅毒螺旋体的免疫应答以Th1型为主，而随着梅毒病程的进展，IL-10的mRNA水平在感染后第18天达到最高峰，提示病程后期阶段转为以Th2为主的免疫应答。王瑞等[19]也证实了此观点，以ELISA法检测早期梅毒患者的血清IFN-γ水平，结果Ⅰ期、Ⅱ期组的IFN-γ水平均显著高于正常组，且Ⅰ期梅毒组高于Ⅱ期梅毒组，(231±19.7)ng/Lvs.(199.0±16.5)ng/L,P<0.05。IFN-γ在早期梅毒患者血清中呈高表达,且随着患者梅毒分期进展而降低,其免疫应答由Th1优势型转为Th2优势型。

本实验中数据的变化也体现了在早期梅毒患者体内，存在Th1/Th2平衡的变化，治疗前的IL-27水平在转阴组比非转阴组明显较高，转阴组IL-27/IL-33较高，提示转阴组的早期梅毒患者，机体抵抗TP的免疫反应以Th1型为主，而IL-27参与的Th1反应，在机体抵抗TP的免疫应答的早期即已占主要地位；并且转阴组治疗前后的IL-27/IL-33均高于非转阴组，提示IL-27有利于机体对TP的清除；非转阴组的IL-33水平在治疗后未明显下降，提示随着病程进展，非转阴组患者体内的Th2反应未能受到足够的抑制，不利于TP的清除。

综上所述，IL-27及IL-33均可能参与TP感染过程中的免疫应答，IL-27可能有利于机体对TP的清除，而IL-33可能不利于机体对TP的清除。鉴于本实验样本量较小，尚需扩大样本量、丰富检测方法等进一步证实。

[1]FITZGERALD TJ.The Th1/Th2-like switch in syphilitic infection:is it detrimental[J]？Infect Immun,1992,60:3475-3479.

[2]HAZLETT LD,MCCLELLAN SA,BARRETT RP,etal.IL-33 shifts macrophage polarization,promoting resistance against Pseudomonas aeruginosa keratitis[J].Invest Ophthalmol Vis Sci,2010,51(3):1524-1532.

[3]SHIBATA S,TADA Y,KANDA N,etal.Possible roles of IL-27 in the pathogenesis of psoriasis[J].J Invest Dermatol,2010,130 (4):1034-1039．

[4]张学军.皮肤性病学[M].8版.北京：人民卫生出版社,2013:222.

[5]PFLANZ S,TIMANS JC,CHEUNG J,etal.IL-27,a heterodimeric cytokine composed of EBI3 and p28 Protein,induces proliferation of native CD4+T cells[J].Immunity,2002,16(6):779-790.

[6]STUMHOFER JS,TAIT ED,QUINN WJ,etal.A role for IL-27 p28 as an antag-onist of gp130-mediated signaling[J].Nat Immunol,2010,11(12):1119-1126.

[7]BROMBACHER F,KASTELEIN RA,ALBER G.Novel IL-12 family members shed light on the orchestration of Th1 responses[J].Trends Immunol,2003,24(4):207-212.

[8]TAKEDA A,HAMANO S,YAMANAKAA,etal.Cutting edge:role of IL-27/WSX-1 signaling for induction of T-bet through activation of STAT1 during initial Th1 commitment[J].J Immunol,2003,170(10):4886-4890.

[9]MAYER KD,MOHRS K,REILEY W,etal.Cutting edge:T-betand IL-27R are critical for in vivo IFN-gamma production by CD8 T cells during infection[J].J Immunol,2008,180(2):693-697.

[10] 傅琳玲,丁琦,方晶,等.不同感染状态下梅毒患者血清白介素2、10和12检测结果分析[J].临床皮肤科杂志,2012,41(6):351-353.

[11] 师金川,季必华,常小丽,等.梅毒血清复发患者脑脊液IFN-γ等指标检测结果分析[J].中国艾滋病性病,2013,19(3):195-197.

[12] ANDERSON CF,STUMHOFER JS,HUNTER CA,etal.IL-27 Regulates IL-10 and IL-17 from CD4+ Cells in Nonhealing Leishmania major Infection[J].J Immunol,2009,183(7):4619-4627.

[13] SCHMITZ J,OWYANG A,OLDHAM E,etal.IL-33,an interleukin-1 like cyto-kine that signals via the IL-1 receptor-related protein ST2 and induces T helper type 2-associated cytokines[J].Immunity,2005,23(5):479-490.

[14] DINARELLO CA.An IL-1 family member requires caspase-1 processing and signals through the ST2 receptor[J].Immunity,2005,23(5):461-462.

[15] 应作霖,党宏,李小杰,等.早期梅毒血清固定患者的白介素2、4、10和12的水平检测[J].中国麻风皮肤病杂志,2011,27(7):474-475.

[16] SATTLER S,GUANG-SHENG L,XU D.IL-10-producing regulatory B cells induced by IL-33 (BregIL-33) effectively attenuate mucosal inflammatory responses in the gut[J].Journal of Autoimmunity,2014,50(3):107-122.

[17] 张明海,赵建斌.血清固定梅毒患者外周血CD4+CD25+Treg细胞IL-10的表达[J].中华皮肤科杂志,2013,46(5):360-361.

[18] LEADER BT,GODORNES C,VANVOORHIS WC,etal.CD4+lymphocytes and gamma interferon predominate in local immune responses in early experimental syphilis [J].Infect Immun,2007,75:3021-3026.

[19]王瑞,曹鸿玮,郑晓红,等.血清干扰素γ、白细胞介素18在早期梅毒的表达及临床意义[J].中华医院感染学杂志,2013,23(16):3830-3832.

Measurement of serum levels of IL-27 and IL-33 in early syphilis patients before and after therapy

ZHANG Pengfei,JI Bihua

Department of Dermatology,Wuhu No.1 People′s Hospital,Wuhu 241000,China

Objective： To measure the serum levels of IL-27 and IL-33 in patients with early syphilis infection before and after treatment for estimating the association of level changes in the two proteins with prognosis.Methods:Serum samples were obtained in patients with early syphilis infection.Then the patients were allocated to group of serological conversion(negative) or persistence(remaining positive) based on the follow-up serology measurement.Double-antibody sandwich ELISA was performed to detect the serum levels of IL-27 and IL-33 in the two groups of patients.Results:① Serological conversion group had higher serum IL-27 level than the persistence group before treatment (27.31±6.19)ng/Lvs.(20.98±5.10)ng/L,P<0.05,and the level of IL-27 was increased in the persistence group after therapy (25.34±6.66)ng/Lvs.(20.98±5.10)ng/L，P<0.05;②Serum IL-33 level was significantly decreased in serological conversion group after treatment compared to pre-treatment (4.41±1.33)ng/Lvs.(3.26±1.41)ng/L,P<0.05.Conclusion:IL-27 may facilitate clearance ofTreponemapallidum,yet IL-33 can not.

syphilis;IL-27;IL-33

1002-0217(2016)05-0453-04

2015-12-15

章鹏飞(1987-)，男，住院医师，硕士，(电话)13956204533，(电子信箱)cleanspy@163.com；

.1

A

10.3969/j.issn.1002-0217.2016.05.014

季必华，男，主任医师，硕士生导师，(电子信箱)jibihua@aliyun.com，通信作者.