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中草药复合微生态制剂对急性肝损伤小鼠肝脏保护作用的研究

2016-10-27于佳民张建梅谢全喜徐辉谷巍

中国饲料 2016年7期
关键词:五味子转氨酶白芍

于佳民,张建梅,谢全喜,徐辉,谷巍

(山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东泰安271000)



中草药复合微生态制剂对急性肝损伤小鼠肝脏保护作用的研究

于佳民,张建梅,谢全喜,徐辉,谷巍

(山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东泰安271000)

试验将研制的中草药复合微生态制剂灌胃急性肝损伤模型小鼠,观察其肝功能保护的作用。采用正交试验设计筛选获得具有保肝作用的最优中草药复合微生态制剂配方:白芍12 g、茵陈5 g、五味子6 g、板蓝根5 g,植物乳杆菌、粪肠球菌活菌数比例3∶1。灌胃该中草药复合微生态制剂提取液的急性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和总胆红素水平分别较模型组降低72.47%、60.63%、61.56%;小鼠肝细胞切片观察,小鼠肝细胞排列整齐,肝细胞损伤减轻,细胞浊肿及空泡样变基本恢复正常。

急性肝损伤;肝细胞;谷丙转氨酶;谷草转氨酶;总胆红素

微生态制剂可以改善肠道菌群微生态环境,抑制或杀灭有害菌,维护肠道微生态平衡,从而降低血浆内毒素的增加,起到保护肝脏的作用。中草药毒副作用小、低耐药、低药物残留,很多中草药对肝细胞损伤具有明显保护作用,已成为肝病治疗研究的重要方向。五味子,性酸甘温,归肺心肾经,具有收敛固涩,益气生津,补肾宁心之功效(马育轩等,2014)。白芍性味苦、酸,微寒,具有归肝、脾经,柔肝止痛,平抑肝阳的功效,临床常用于治疗慢性肝炎。研究表明,白芍及其总苷对各种化学性肝损伤均有明显保护作用,能降低转氨酶,使肝细胞变性坏死程度减轻(吴庆光等,2012)。板蓝根有清热解毒、凉血利咽之功效,近年来研究表明板蓝根具有较强的抗菌、抗病毒和抗内毒素的作用。茵陈性味微寒,味苦,归脾、胃、肝、胆经,具有清湿热,退黄疽的功效。本试验将研制的中草药复合微生态制剂用于急性肝损伤模型小鼠,以观察其保护肝功能的药理效应,筛选出保肝作用较好的中草药复合微生态制剂,为临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1药品与试剂益生菌由植物乳杆菌、粪肠球菌组成,比例为3∶1,活菌总数≥108cfu/mL,购自中国普通微生物菌种保藏中心。五味子6~18 g,茵陈5~15 g,白芍12~48 g,板蓝根5~15 g,购自永春堂大药房,经鉴定符合中国药典2005年版的各项要求。联苯双醋滴丸,浙江万邦药业有限公司生产;分析纯CCl4;市售精制豆油。丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(STB)试剂盒,均购自上海科华生物。

1.2试验动物昆明系小鼠,体重(20±2)g,雄性,清洁级,购自泰邦生物。小鼠预饲5 d,自由摄食和饮水,温度18~20℃,自由光照,定时通风换气。

1.3试验仪器卓越330全自动生化分析仪,上海科华实验系统有限公司;AP280-2型石蜡包埋机;CX31正置显微镜,Olympus公司。

1.4试验方法

1.4.1药液制备中草药煎煮前加入适量的水(水量为药物的8~10倍)浸泡30 min,先用武火煮沸,后用文火使药液保持沸腾状态,一剂药煎煮3次,每次煎煮30 min,3次共浓缩为100 mL,中药浓度为1 g/mL。将益生菌冻干菌粉(109cfu/g)与中草药煎煮液混匀备用。

1.4.2动物分组造模与给药取96只雄性小鼠,随机分成12组,每组8只,分别为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、中草药复方试验组(Ⅰ~Ⅸ组)。空白对照组和模型对照组每天正常饲喂;阳性对照组每天以0.1 mL/10 g剂量给予联苯双酯溶液;各中草药组每天以0.1 mL/10 g剂量连续给药7 d。末次给药1 h后,除空白对照组外,其余各组均以0.1 mL/10 g剂量灌胃0.3%CCl4豆油溶液,禁食,不禁水。24 h后眼球采血,以3000 r/min离心10 min,分离血清。用全自动生化分析仪检测血清中的转氨酶及总胆红素含量。断颈处死小鼠,取出肝脏,肉眼观察肝脏颜色、大小、光滑度和韧性,切取部分肝脏,用10%甲醛溶液固定,送予山东农业大学动物科技学院病理切片室制备切片,光镜下观察病理变化。

1.4.3正交试验确定中草药组方将不同剂量的中草药,采用四因素三水平正交试验设计,组合成不同的中草药组方,进行动物试验。正交试验因素与水平见表1,设计方案见表2。

表1 因素与水平g

表2 正交试验设计方案g

1.4.4数据处理采用SPSS统计分析软件对试验数据进行单因素方差分析,用Duncan’s多重比较法对各组数据进行差异显著性比较。结果用“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1中草药复合微生态制剂对血清转氨酶及总胆红素的影响表3结果表明,模型组血清ALT、AST与空白组比较均显著升高(P<0.01),STB与空白组比较极显著升高(P<0.01),表明造模成功。联苯双酯阳性组血清ALT、AST及STB与空白组比较差异不显著(P>0.05)。联苯双酯阳性组血清ALT、AST、STB与模型组比较分别降低66.75%、49.56%、54.62%(P<0.01)。试验Ⅰ组的血清ALT、AST较模型组分别降低72.48%、60.64%(P<0.01),与空白组接近,差异不显著(P>0.05);血清STB较模型组降低61.56%,差异极显著(P<0.01),与空白组差异不显著(P>0.05)。试验组Ⅷ组的血清ALT、AST较模型组分别降低62.43%、40.50%(P<0.01),与空白组差异不显著(P>0.05);血清STB较模型组降低58.19%(P<0.01)。说明中草药复方Ⅰ、Ⅷ组在降低小鼠血清转氨酶和总胆红素的效果与联苯双酯作用相当,其中中药复方Ⅰ组效果较好,其他中草药复方试验组降转氨酶效果不如联苯双酯。

2.2肝组织病理观察结果由病理切片可见,空白组小鼠肝组织肝窦清晰可见,肝细胞整齐排列,细胞质丰富而均匀;模型组小鼠肝细胞浊肿并呈气球样变性,肝细胞核被脂滴挤向一侧;阳性组小鼠肝细胞损伤减轻,轻度淤血;中草药复方Ⅰ组、Ⅷ组小鼠肝细胞损伤减轻,细胞排列整齐,细胞浊肿及空泡样变基本恢复正常,部分肝细胞核轻度固缩;其余各中草药复方组的小鼠肝脏仍可见肝细胞淤血,空泡样变。

3 讨论

贾越光等(2014)运用饱和水溶液法制备五味子保肝活性成分包合物,小鼠灌胃给药,HPLC同时测定包合物在小鼠体内不同组织中的药物浓度,考察其在体内的肝靶向性,五味子保肝活性成分在小鼠体内各组织中的浓度分布特征显示,包合物具有明显的体内肝靶向性。朱艳和王俊平(2012)利用丙戊酸钠诱导大鼠肝损伤模型,给药组给予五味子乙素+丙戊酸钠,对照组给予等体积生理盐水,结果表明,模型组血清中谷草转氨酶和谷丙转氨酶为(72.29±4.14)IU/L和(67.26±2.38)IU/L,给药组血清中谷草转氨酶和谷丙转氨酶分别为(32.29±3.68)IU/L和(34.25± 5.69)IU/L,两组差异显著(P<0.05),说明五味子乙素可缓解肝功能的损害,起到保肝作用。周艳丽等(2007)运用雷公藤多苷片致小鼠急性肝损伤模型,探讨白芍总苷对该模型肝损伤保护作用和机制,结果白芍总苷可以降低损伤肝组织ALT、AST含量,因此认为白芍总苷可以对抗雷公藤多苷片所致小鼠急性肝损伤。周立等(2008)利用四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型,研究证明,茵陈的三氯甲烷提取物能明显降低四氯化碳引起的谷丙转氨酶和谷草转氨酶的增高。本试验研究显示,灌胃由白芍12 g、茵陈5 g、五味子6 g、板蓝根5 g组成的中草药复方制剂Ⅰ的提取液的急性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和总胆红素水平分别较模型组降低72.47%、60.63%、61.56%;灌胃由白芍12 g、茵陈15 g、五味子12 g、板蓝根15 g组成的中草药复合微生态制剂Ⅷ的急性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶、谷

表3 中草药复合微生态制剂对小鼠血清转氨酶及总胆红素含量的影响U/L

草转氨酶和总胆红素水平分别较模型组降低62.43%、40.5%、58.19%。两复合微生态制剂组的小鼠肝细胞切片观察发现,小鼠肝细胞排列整齐,肝细胞损伤减轻,细胞浊肿及空泡样变基本恢复正常,其中中草药复方制剂Ⅰ组的降低血清转氨酶和总胆红素的效果更好,表明该中草药复合微生态制剂对四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版一部[S].北京:化学工业出版社,2005.166

[2]贾越光,丁志英,张越.五味子保肝活性成分包合物的制备及其肝靶向性研究[J].中国生化药物杂志,2014,9(34):50~53.

[3]马育轩,黄艳霞,周海纯.五味子现代药理及临床研究进展[J].中医药信息,2014,1(31):125~126

[4]吴庆光,姚海燕,蓝森麟.白芍配伍缓性制毒浅析[J].中药与临床,2012,2(1):36~37

[5]周立,万丽,王敏.茵陈保肝活性部位的初步筛选研究[J].现代生物医学进展,2008,8(1):114~115

[6]周艳丽,张磊,刘维.白芍总苷对雷公藤多苷片所致小鼠急性肝损伤保护作用的实验研究[J].天津中医药,2007,24(1):61.

[7]朱艳,王俊平.五味子乙素对丙戊酸钠肝脏损伤的保护作用[J].中国中西医结合儿科学,2012,4(5):405~406.

The traditional Chinese medicine compound probiotics by Micro-ecological theory and the theory of traditional Chinese medicine were developed.By studying the liver protection effects of traditional Chinese medicine compound probiotics on the model mouse of acute liver injury,the best Chinese medicine compound probiotics formula with hepatoprotective effect was got.Herbal formula was white peony root 12 g,wormwood 5 g,schisandra 6 g,radix isatidis 5 g.The ratio of Lactobacillus to Enterococcus faecalis was 3 to 1.Serum alanine amino transaminase,aspartate aminotransferase and total bilirubin levels in the mouse of acute liver injury gavaged the Chinese medicine compound probiotics extract were 72.47%,60.63%,61.56%lower than those of the model group;Mouse liver cells arranged in neat rows,liver cell damage was alleviated,cells cloudy swelling and vacuolar degeneration returned to normal.

acute liver damage;hepatocyte;alanine aminotransferase;aspartate aminotransferase;total bilirubin

饲料卫生

S816.7

A

1004-3314(2016)07-0013-03

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20160703

863课题“新型抗感染功能型微生态制剂研制与应用”(2013AA102806)

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