豨莶精醇对大鼠的抗栓作用及机制

2016-10-26张殿文李木石邵世博

中国老年学杂志 2016年17期

关键词：抗栓溶媒阿司匹林

张殿文　李木石　王　清　李　响　吴　迪　邵世博　杨　光　李　伟

(吉林省中医药科学院，吉林　长春　130012)

豨莶精醇对大鼠的抗栓作用及机制

张殿文李木石1王清李响吴迪邵世博杨光李伟

(吉林省中医药科学院，吉林长春130012)

目的探讨豨莶精醇的抗栓作用及其作用机制。方法采用大鼠体内、外血栓形成实验、血小板聚集和黏附功能实验等方法。结果豨莶精醇可明显延长大鼠体内血栓形成时间、缩短血栓长度、减轻血栓干重并能显著抑制大鼠体内外血小板集聚和黏附。结论豨莶精醇具有明显的抗栓作用，其作用机制可能与抑制血小板聚集和黏附有关。

豨莶精醇；抗栓作用；血小板聚集；血小板黏附

豨莶草为常用中药，近年研究结果表明，家兔静脉注射豨莶草提取物，可使血栓湿重明显减轻，其抑制率为51.4%〔1〕；腺梗豨莶草有效组分具有明显的抗血栓、抑制血小板聚集及抗凝作用〔2，3〕。为阐明豨莶草抗栓作用的物质基础，本研究从腺梗豨莶中提取出单体成分豨莶精醇，并对其体内外抗栓、抗血小板聚集和黏附作用进行了实验研究。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1动物及药物Wistar大鼠，体重200～220 g，雌雄均用；购于吉林大学基础医学院动物实验中心，动物许可证号：SCXK-(吉)2008-0005。豨莶精醇，纯度99%，北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室提供。

1.1.2分组大剂量组，取豨莶精醇200 mg，以适量吐温-80研匀，加0.5%羧甲基纤维素钠(0.5%CMC-Na)至200 ml，配制成0.1%浓度的混悬液，实验前将上述混悬液分别稀释1倍、2倍作为中、小剂量组。阳性对照组药物为阿司匹林肠溶片，沈阳奥吉娜药业有限公司生产，批号：080904，规格25 mg/片。配制方法：取一片阿司匹林研碎，加0.5% CMC-Na至50 ml，配制成0.05%浓度的混悬液。

1.1.3试剂与仪器二磷酸腺苷(ADP)，大连美仑生物技术有限公司分装，批号：20080308；羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，国药集团化学试剂有限公司，批号：20080406。BT87-3型实验性体内血栓测定仪，包头医学院心血管研究室制造；SPA-4型多功能血小板聚集仪，上海科达测试仪器厂；体外血栓形成和血小板黏附两用仪，江苏无锡医疗电子仪器厂。

1.2方法

1.2.1对大鼠体内血栓形成的影响参照文献方法〔4〕，取大鼠50只，随机等分为五组，第一组为溶媒对照组，第二组为阿司匹林10 mg/kg，第三、四、五组分别为豨莶精醇20、10和5 mg/kg，灌胃给药，每日1次，连续7 d，体积均为20 ml/kg，溶媒对照组给予等体积0.5% CMC-Na。于末次给药后1 h将大鼠以3%的水合氯醛0.3 g/kg麻醉，分离颈总动脉。采用BT87-3型实验性体内血栓测定仪，依法测定大鼠体内血栓形成时间。

1.2.2对大鼠体外血栓形成的影响参照文献方法〔5,6〕测定大鼠体外血栓形成。取大鼠50只，随机等分为五组，第一组为溶媒对照组，第二组为阿司匹林20 mg/kg，第三、四、五组分别为豨莶精醇20、10和5 mg/kg，灌胃给药，每日1次，连续5 d，体积均为20 ml/kg，溶媒对照组给予等体积0.5% CMC-Na。于末次给药后1 h，将大鼠以3%的水合氯醛0.3 g/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉取血1.8 ml，立即注入已硅化的体外血栓胶管，将管的两端对接形成圆环，放置在体外血栓形成和血小板黏附两用仪上旋转15 min，测量血栓长度、干重、湿重。

1.2.3对大鼠体内血小板聚集性和黏附率的影响〔5，6〕取大鼠50只，随机等分为溶媒对照组、阿司匹林20 mg/kg组、豨莶精醇20、10和5 mg/kg组，灌胃给药，每日1次，连续5 d，体积均为20 ml/kg，溶媒对照组给予等体积0.5% CMC-Na。于末次给药后1 h，将大鼠以3%的水合氯醛0.3 g/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉取血3.6 ml，注入内含有0.4 ml 3.8%枸橼酸钠的试管中，摇匀，取1 ml放入圆形黏附球内，将黏附球插入体外血栓形成和血小板黏附两用仪上，3 r/min，黏附15 min，于显微镜下计数黏附前后血小板数，计算黏附率。将余下的血离心1 000 r/min,10 min，慢慢吸取上层富血小板血浆(PRP)，将上述已吸取过PRP再次离心，3 000 r/min，10 min，吸取上层贫血小板血浆(PPP)。取PPP 200 μl放到测试杯内(PPP<1万/mm3)预热5 min后调零，再取PRP 200 μl放到测试杯内(PRP<20 万/mm3)预热5 min后，立即加入0.5 mmol/L的ADP诱导剂10 μl，测定3 min内血小板聚集率和最大聚集率。

1.2.4对大鼠体外血小板聚集的影响〔3〕PRP 和PPP制备，采用水合氯醛300 mg/kg麻醉大鼠，腹主动脉取血4.5 ml，以3.8%枸橼酸钠按1∶9比例准确抗凝，离心1 000 r/min，10 min，慢慢吸取上层PRP，将剩余血浆再次离心3 000 r/min×10 min，小心吸取PPP。取PPP 200 μl放到测试杯内(PPP<1万/mm3)预热5 min后调零，再取PRP 200 μl放到测试杯内(PRP<20万/mm3)预热5 min后，分别加入蒸馏水、阿司匹林水溶液10、5、2 μg/ml及豨莶精醇水溶液10、5、2 μg/ml 10 μl后，立即加入0.5 mmol/L的ADP诱导剂10 μl，测定血小板最大聚集率。

1.3统计学方法采用SPSS12.0软件行t检验。

2　结　果

2.1对大鼠体内血栓形成的影响豨莶精醇20、10、5 mg/kg和阿司匹林20 mg/kg均可明显延长大鼠体内血栓形成时间〔(22.4±5.94)、(19.7±4.34)、(17.4±3.66)、(19.8±5.36)min〕，与溶媒对照组〔(14.3±2.34)min〕比较，在相同剂量条件下二者作用强度相似，豨莶精醇20 mg/kg抑制血栓形成作用优于阿司匹林10 mg/kg，提示豨莶精醇抗栓作用具有一定的量效关系。

2.2对大鼠体外血栓形成的影响见表1。豨莶精醇20 mg/kg和阿司匹林20 mg/kg均可明显缩短血栓长度、减轻血栓干重，对血栓湿重有一定的降低，但无统计学差异(P>0.05)。

表1　对大鼠体外血栓形成的影响±s,n=10)

与溶媒对照组比较：1)P<0.05,2)P<0.01,下表同

2.3对大鼠体内血小板聚集性和黏附率的影响见表2。豨莶精醇20、10 mg/kg和阿司匹林20 mg/kg均可明显降低1、2 min血小板聚集率和最大聚集率，在相同剂量时二者作用相近；豨莶精醇10、5 mg/kg对血小板黏附率有一定降低作用，但差异无统计学意义(P>0.05)。

2.4豨莶精醇水溶液对体外血小板聚集的影响豨莶精醇水溶液10、5、2 μg/kg和阿司匹林水溶液10、5 μg/kg对体外血小板最大聚集率均有明显的抑制作用〔(22.9±12.3)%、(32.0±14.2)%、(42.7±14.4)%、(34.1±15.6)%、(43.1±15.9)%〕，与溶媒对照组〔(58.9±15.1)%〕比较差异显著(P<0.05)，且在相同剂量时，豨莶精醇作用优于阿司匹林(P<0.05)。

表2　对大鼠体内血小板聚集性和黏附率的影响±s,n=10)

3　讨　论

血栓形成与血小板聚集和黏附密切相关，本实验结果表明，豨莶精醇能明显延长大鼠体内血栓形成时间、缩短血栓长度、减轻血栓干重，同时其能显著抑制大鼠体内外血小板集聚和黏附。由此可见，豨莶草中的单体成分豨莶精醇具有明显的抗栓作用，其作用机制可能与抑制血小板聚集和黏附有关。上述研究结果为豨莶草治疗血栓性疾病提供了一定的科学依据。

1郑占虎，董泽宏，佘靖.中药现代研究与应用(第五卷)〔M〕.北京：学苑出版社，1998:4634-6.

2侴桂新，金若敏，王峥涛，等.豨莶草抗血栓有效组分筛选研究〔J〕.上海中医药大学学报，2005；19(3)：39-41.

3孟倩超，金若敏，王蚺,等.豨莶草抗血栓组分对血小板聚集的影响〔J〕.上海中医药杂志，2008；42(5)：89-91.

4王洋，刘伟.脉通胶囊对大鼠体内血栓形成的影响〔J〕.中医药信息，2005；22(1)：53-4.

5万素君，郑君，毛艳英.外伤复明胶囊对血小板粘附功能和血栓形成影响的实验研究〔J〕.中国中医眼科杂志，1997；7(2)：74-6.

6陈奇.中药药理研究方法学〔M〕.第2版.北京：人民卫生出版社，2006：505-6.

〔2015-06-12修回〕

(编辑郭菁)

吉林省卫生厅2011年课题(2010Z028)

王清(1973-)，女，副主任药师，主要从事心血管药理研究。

张殿文(1969-)，男，副主任药师，主要从事心血管药理研究。

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