药敏纸片法和打孔法检测细菌耐药性的方法比较

谢秀丽　安徽省池州市贵池区畜牧兽医局247100

蒋月美　安徽省池州市贵池区唐田镇人民政府247100



药敏纸片法和打孔法检测细菌耐药性的方法比较

谢秀丽安徽省池州市贵池区畜牧兽医局247100

蒋月美安徽省池州市贵池区唐田镇人民政府247100

目的:进行药敏纸片法和打孔法检测细菌耐药性的方法比较。方法：将青霉素、链霉素、硫酸庆大霉素配成浓度为100单位/mL时，通过药敏纸片法和打孔法，测定其抑菌圈直径来进行比较两种方法对细菌的耐药性。结果：在100单位/mL的药液浓度时，抑菌效果打孔法优于药敏纸片法。结论:在同一浓度时打孔法的抑菌效果优于纸片法。

打孔法；药敏纸片法；抑菌圈的直径

药敏纸片法是最常用的一种试验方法，能直接体现出抗菌药物的抗菌效用。其优点是直观明显、对比鲜明，有一定的实验依据［1］。打孔法仅用1个打孔器，省去了数量较多的纸片和药物的浪费。由于液体的表面张力作用，孔中液体在较低斜度下不会外流，能获得理想的圆形抑菌圈。

1　材料与方法

（1）材料。药物为青霉素、链霉素和硫酸庆大霉素，购自华北制药股份有限公司。菌种为大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌和产气杆菌，由安徽科技学院动物医学实验室保存。培养基和试剂为普通营养琼脂、蒸馏水、磷酸二氢钾和生理盐水。仪器为恒温水浴培养箱、超净工作台和高压蒸汽灭菌器。

（2）方法。药物配制参照《抗生素药品检验》的配制方法。培养基制备。在容量为1000mL的三角烧瓶中加入蒸馏水1000mL，放在电炉上加热。用天平准确称取35.0g营养琼脂，放入三角烧瓶中并不断搅拌使琼脂完全溶解，然后放入高压灭菌锅中经（121℃，20分钟）高压灭菌，取出趁热倒入经过高压灭菌的培养皿中，厚度约3～5mm，冷却凝固后备用。菌种活化。将4种菌种分别接种至普通营养琼脂斜面后，置37℃下培养箱中过夜备用。滤纸片的制备及处理。将普通定性滤纸用打孔机打成若干圆形纸片，直径为5.0mm，置于干燥洁净的试管内，塞上棉塞，放入高压灭菌锅中经（121℃，20分钟）高压灭菌后，取出放入恒温干燥箱内进行干燥。取一定数量纸片，分别放入100单位/mL的各种药物中，浸润后备用。接种培养。分别取上述菌株的新鲜培养物，在无菌操作条件下，用不同涂布棒均匀涂抹在接种过不同菌种的琼脂培养基上，再用无菌镊子，将在药液中浸润的纸片均匀间隔贴于各培养基表面，再用无菌吸管在接种过不同菌种的培养基上打孔，将药液用移液枪移入孔内，各药液对每种试验菌均做3个重复。贴入时标记起始位置，按顺时针或逆时针方向将滤纸片顺序贴入，轻压纸片使接触良好。放入37℃恒温培养箱中，24小时后取出，观察抑菌圈，测量并记录结果，取抑菌圈直径平均值［2］。抑菌圈直径测量参照《微生物和检验技术》判定结果，用抑菌圈的直径表示，抑菌圈越大，抑菌效果越好［3］。

表1　药物抑菌圈的直径（mm）

表2　药物抑菌圈的直径（mm）

2　结果与分析

（1）抑菌圈直径测量。浓度为100单位/mL的药物纸片贴于4种细菌培养物上和培养24小时后，用直尺测量抑菌圈的直径，取平均值。再将浓度为100单位/mL的药液用移液枪移入四种细菌培养物上，用直尺测量抑菌圈的直径，取平均值。

由表1和表2可见，药敏纸片法和打孔法抑菌的总体效果是青霉素对细菌的抑菌结果中，药敏法对金黄色葡萄球菌的抑制>对产气杆菌的抑制>对枯草杆菌的抑制>对大肠杆菌的抑制，而打孔法无抑菌效果。链霉素和硫酸庆大霉素对各种细菌的抑菌结果中，打孔法的效果优于药敏纸片法。

3　结论

在同一药液浓度的条件下，打孔法的抑菌效果优于药敏纸片法。

［1］刘山辉.抗菌药物的药敏试验方法［J］.吉林畜牧兽医，2003，24（12）:49-50.

［2］邱世翠，李波清，栾希英，等.咪康唑与甲硝唑配伍对白色念珠菌杀菌作用的实验观察［J］.滨州医学院学报，1998，21（5）:440-441.

［3］杨建江，韩文瑜，杜锐，等.30种中草药对耐药性猪链球菌的抑菌试验［J］.中兽医医药杂志，2004，23（2）：14-16．