HPLC法同时测定复方金思维中3种有效成分的含量

张晴　杜守颖　白洁　陆洋　郑梦成　李鹏跃　武慧超



HPLC法同时测定复方金思维中3种有效成分的含量

张晴杜守颖白洁陆洋郑梦成李鹏跃武慧超

目的建立复方金思维中松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法对制剂中的松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖进行定量测定。结果松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖分别在2.5～50.0 μg/mL、1.3～25.9 μg/mL、2.0～40.7 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好，3种成分样品回收率分别为101.37%、99.86%和98.44%，RSD均在3.00%以内。结论所建立的方法简便，重复性良好，可用于金思维复方中松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖的含量测定。

复方金思维；高效液相色谱法；含量测定

复方金思维是由肉苁蓉、熟地黄、远志、茯苓等药物组合而成，具有补气益肾、化痰活血之功效，可用于老年性痴呆的治疗[1-4]。肉苁蓉、熟地黄和远志为方中主要药物，为保证临床疗效，本实验采用高效液相色谱法对肉苁蓉和熟地黄中松果菊苷和毛蕊花糖苷、远志中3,6′-二芥子酰基蔗糖进行定量测定，以控制本品的内在质量,此方法测定结果准确灵敏、简便可靠。

1　材料

1.1药品与试剂

乙腈(迈瑞达，色谱纯)，磷酸(迈瑞达，色谱纯)，娃哈哈纯净水，其他试剂为分析纯；松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖对照品(均为中国食品药品检定研究院，批号分别为111670-201505、111530-201310、111848-201303)；肉苁蓉、熟地黄、远志等饮片(北京本草方源药业有限公司)；金思维为实验室自制(肉苁蓉16 g、熟地黄16 g、远志12 g、茯苓6 g、人参3 g、石菖蒲6 g等，加水煎煮2次，滤液浓缩至近干，50℃减压干燥，干膏粉碎，混匀)。

1.2仪器

LC-20AD高效液相色谱仪(日本岛津公司，SPD-M20A，PDA检测器，LC Solution色谱工作站)；CX-100型超声波清洗器(北京医疗设备厂)；电热恒温水浴箱(北京医疗设备厂)；赛多利斯BT 25S型电子分析天平(北京赛多利斯公司)；赛多利斯BSA 224S型电子分析天平(北京赛多利斯公司)。

2　方法

2.1色谱条件

色谱柱：CAPCELL PAK-C18色谱柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，流动相乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱(0～12分钟，87%～83%B；12～25分钟，83%B；25～45分钟，83%～73%B；45～50分钟，73%～10%B；50～55分钟，10%B)；柱温30 ℃；检测波长330 nm；流速1.0 mL/min。对照品溶液及溶出供试品溶液的色谱图见图1。

A. 对照品溶液；B. 溶出供试品溶液；C.空白溶出液；

2.2对照品溶液的制备

精密称取对照品松果菊苷25 mg、毛蕊花糖苷12.5 mg、3,6′-二芥子酰基蔗糖20 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得。

2.3供试品溶液的制备

精密称取样品约0.1 g置10 mL容量瓶中，加入50%甲醇适量，超声15分钟，放冷，定容至刻线，取上清液，0.45 μm微孔滤膜滤过，得供试品溶液。

2.4方法学考察

2.4.1线性关系考察精密吸取对照品储备液，依次稀释得到6个不同浓度的对照品溶液，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标(Y)，浓度为横坐标(X)，进行线性回归，松果菊苷回归方程为Y=12729X-4090.2，r=0.9999；毛蕊花糖苷回归方程为Y=13842X-2892.8，r=0.9999；3,6′-二芥子酰基蔗糖回归方程为Y=25091X+821.1，r=0.9999。松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖分别在2.5～50.0、1.3～25.9、2.0～40.7 μg/mL与峰面积线性关系良好。

2.4.2精密度实验精密吸取上述对照品溶液10 μL，重复进样6次，结果松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖6次进样的峰面积积分值相对标准偏差(relative stardard deviation,RSD)分别为0.79%、2.63%、0.51%，表明仪器精密度良好。

2.4.3稳定性实验精密吸取上述供试品溶液分别于0、2、4、6、8、12、24小时进样测定，结果松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖含量的RSD分别为0.49%、2.70%、0.74%，表明样品在24小时内稳定。

2.4.4重复性实验取同一批样品，平行制备6份供试品溶液，测得峰面积并计算3种成分含量，结果样品中松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖平均含量分别为3.22 mg/g、0.77 mg/g、1.27 mg/g，RSD分别为0.8%、2.2%、1.1%，表明本方法重复性良好。

2.4.5加样回收率实验精密称取已知含量的同一批样品0.05 g，分别精密加入一定量的松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖对照品，按照“2.3”项下方法制备，平行操作6份，按上述条件进行分析测定，计算回收率，结果见表1。

表1　加样回收率实验结果

3　结果

分别取三批样品，每批样品按“2.3”项下方法平行制得3份供试品溶液，按照上述色谱条件进样测定，结果见表2。

表2　样品含量测定结果

4　讨论

4.1测定成分的选择

肉苁蓉、熟地黄和远志为方中主要药物，肉苁蓉和熟地黄中主要成分为苯乙醇苷类化合物，其中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量较高，具有保护脑部和神经组织、抗衰老、改善记忆力的作用[5-6]，是其药理作用的化学物质基础。3,6′-二芥子酰基蔗糖为远志中的指标性成分，具有抗抑郁、神经保护和改善记忆力等作用[7-8]。故对复方金思维中此三个具有代表性的成分进行了含量测定方法的研究，以控制本品的内在质量，保证临床疗效。

4.2流动相的选择

松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖的测定曾使用2015版《中华人民共和国药典》(一部)肉苁蓉及熟地黄药材含量测定项下的甲醇-0.1%甲酸溶液、乙腈-0.1%醋酸溶液作为流动相，但松果菊苷、毛蕊花糖苷结构中存在多个酚羟基，呈弱酸性，拖尾情况严重，考虑药典中流动相的酸性不够，且当流动相大比例变化时有基线漂移现象，故调整为乙腈-0.05%磷酸溶液作为流动相进行洗脱，结果所测定的三个成分分离度、对称因子均符合要求。

4.3检测波长的选择

分别取松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖对照品适量，加甲醇适量制成每1 mL含0.10 mg的溶液，在200～400 nm波长进行全波长扫描，结果三者对照品均在330 nm处有最大吸收，故选择330 nm作为检测波长[9-12]。

4.4供试品溶液的制备

提取方式的选择考虑到检验的便捷性，采用超声(100 kHz)提取进行试验。提取溶剂的选择参考2015版《中华人民共和国药典》(一部)肉苁蓉、熟地黄、远志药材含量测定，分别选用50%、80%和100%甲醇作为提取溶剂进行试验，结果表明三者没有显著性差异，故选择50%甲醇作为松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖的提取溶剂。提取时间分别采用15分钟、30分钟和45分钟进行考察，结果显示15分钟松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖就能完全溶出，因此最终选择加入50%甲醇超声(100 kHz)15分钟作为供试品提取条件。

本研究采用超声法提取，样品处理方法简单，使用有机试剂量较小，且HPLC梯度洗脱可以同时分离3种成分，杂质峰无干扰，灵敏度高，结果可靠，该方法可以作为复方金思维的质量控制方法。

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(本文编辑： 董历华)

Simulatneous determination of three active components in compound JSW prescription by HPLC

ZHANGQing，DUShou-ying，BAIJie，etal.

BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100102，China

DUShou-ying，E-mail：dushouying@263.net

ObjectiveTo establish a method for determination of 3 effective components in Compound JSW prescription. MethodsThe contents of Echinacoside, Acteoside, 3,6′-Disinapoyl sucrose in Compound JSW prescription were determined by HPLC. ResultsEchinacoside, acteoside, 3,6′ -Disinapoyl sucrose showed good linear correlation within 2.5～50.0 μg/ml, 1.3～25.9 μg·ml-1and 2.0～40.7 μg/ml(r≥0.9999)，respectively. The average recoveries were within 101.37%, 99.86% and 98.44%, respectively. And RSD were less than 3.00%. ConclusionThe quantitative method for determining the components of Compound JSW prescription is simple, feasible and repeatable.

Compound JSW prescription；HPLC；Content determination

国家科技重大专项(2014ZX09301306-009)；北京市科技新星计划(xx2015A048)

100102北京中医药大学中药学院[张晴(硕士研究生)、杜守颖、白洁、陆洋、郑梦成、李鹏跃、武慧超]

张晴(1991- )，女，2015级在读硕士研究生。研究方向：中药新剂型与新技术研究。E-mail:zhangqing811@163.com

杜守颖(1960- )，女，博士，教授，博士生导师。研究方向：中药新剂型与制剂关键技术研究。E-mail: dushouying@263.net

R285.5

Adoi：10.3969/j.issn.1674-1749.2016.10.008

2016-03-01)