回药复方笋卜黎合剂的质量标准研究

刘军+宫凯敏+王银洁+柳茜+赵锦涛+李文静

【摘要】 目的：建立回药复方笋卜黎合剂的质量标准。方法：采用薄层色谱（TLC）法对制剂中的主要药味甘松、黄连、干姜进行定性鉴别；采用高效液相色谱法（HPLC）测定陈皮中的橙皮苷含量。结果：回药复方笋卜黎合剂中的甘松、干姜、黄连的薄层色谱具有鉴别特征，斑点清晰，分离度较好，阴性对照无干扰。橙皮苷在0.02～0.50μg范围内线性关系良好，r=0.9999。结论：该方法专属性强，灵敏度高，重复性好，可作为回药复方笋卜黎合剂的质量控制标准。

【关键词】 回药复方笋卜黎；薄层色谱法（TLC）；高效液相色谱法（HPLC）；橙皮苷；质量标准

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）16-0005-04

Abstract：Objective To establish the quality standard of Compound Sunboli Mixture of Hui Medicine.Methods TLC was applied to the qualitative identification of Radix et Rhizoma Nardostachyos，Rhizoma Zingiberis，Rhizoma Coptidis，and HPLC was applied to the quantitative determination of hesperidin in the prescription.Results Radix et Rhizoma Nardostachyos，Dried Ginger，Rhizoma Coptidis could be detected by TLC，the spots were clear and there was no interference for the negative samle. A good linearity of hesperidin was showed in the range of 0.2～5.0μg（r=0.9999）. Conclusions The methods are highly specific， sensitive and with good reproducibility. It can be used for the quality control of Compound Sunboli Mixture of Hui Medicine.

Keywords： Compound Sunboli Mixture of Hui Medicine； TLC； HPLC； Hesperidin； Quality Standard

回药复方笋卜黎合剂是宁夏医科大学附属银川市中医医院使用了十多年的医院协定处方剂，目前为在研医院制剂品种，该方由甘松（笋卜黎）、柴胡（突鲁必的）、延胡索（折荅剌丸）、黄芩、陈皮、黄连、半夏、干姜等13味药组成。回医理论认为胃病病因病机与“四种原质”中的“热”和“冷”以及“四体液”中的“白痰根源密切”相关[1]，该方根据回医药典籍《回回药方》中“舍剌必笋卜黎”和《瑞竹堂经验方》中的“半夏汤”进行组方，主要以“调冷热”、“去痰”、“消痰”为主，全方温寒并用，具有辛开苦降，行气止痛，化痰消痞的功效，主要用于急慢性胃炎，胃及十二指肠溃疡，糖尿病胃轻瘫引起的胃脘部痞满胀痛、泛酸嘈杂、食欲不振等。为控制制剂的质量，确保为患者提供安全有效的回医药医院制剂，笔者研究并建立了甘松、干姜、黄连的薄层色谱方法，并采用高效液相色谱法（HPLC）对制剂中陈皮的有效成分橙皮苷进行了含量测定。

1 仪器与材料

1.1 仪器 XA105型电子分析天平（梅特勒-托利多公司）；1260系列高效液相色谱仪（美国安捷伦公司，配有G1315D型检测器；Waters C18柱4.6mm×250mm，5μm）；KQ-500DA型数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵。

1.2 材料 硅胶GF254、硅胶G薄层板（青岛海洋化工有限公司）；橙皮苷对照品（批号：10721-201316，含量以95.3%计）、甘松对照药材（批号：121402-201403）、干姜对照药材（批号：120942-201309）、黄连对照药材（批号：120913-201310）均购自中国食品药品检定研究院。回药复方笋卜黎合剂由银川市中医医院制剂中心制备（批号：20160201、20160202、20160203），阴性对照样品（按处方比例与制法制成缺被测药材的阴性对照样品溶液）。乙腈、甲酸为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别[2]

2.1.1 甘松鉴别[3-4] 取回药复方笋卜黎合剂30mL，用石油醚（60℃～90℃）提取2次，每次30mL，合并石油醚液，蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取甘松对照药材1g，加50mL水回流提取30min，滤过，滤液浓缩至20mL，同法制成对照药材溶液。按处方比例与制法制成缺甘松的阴性对照样品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部0502薄层色谱法）试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（60℃～90℃）-乙酸乙酯（1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无干扰。见图1。

2.1.2 干姜鉴别[5] 取回药复方笋卜黎合剂30mL，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取干姜对照药材1g，加50mL水回流提取30min，滤过，滤液浓缩至20mL，同法制成对照药材溶液。按处方比例与制法制成缺干姜的阴性对照样品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部0502薄层色谱法）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60℃～90℃）-乙酸乙酯（3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。见图2。

2.1.3 黄连鉴别 取回药复方笋卜黎合剂30mL，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄连对照药材1g，加50mL水回流提取30min，滤过，滤液浓缩至20mL，同法制成对照药材溶液。按处方比例与制法制成缺黄连的阴性对照样品溶液。取缺黄连的阴性样品30mL，制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部0502薄层色谱法）试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60℃～90℃）-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（1∶10∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。见图3。

2.2 含量测定[6]

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Waters C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%甲酸（20∶80）；检测波长：283nm；柱温：30℃；流速：1mL/min。理论板数按橙皮苷峰计算不低于5000。

2.2.2 溶液的制备

2.2.2.1 对照品溶液 取橙皮苷对照品10.00mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容，制成浓度为100μg/mL-1的橙皮苷对照品溶液。

2.2.2.2 供试品溶液 取本品药液5mL，精密量取，置50mL容量瓶中，加水稀释，定容，再取以上药液5mL，精密量取，置25mL容量瓶中，加甲醇定容，精密称重，超声30min，补足重量，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2.3 阴性对照溶液 按处方比例称取缺陈皮的其余药味，按回药复方笋卜黎合剂制备工艺制备阴性样品，然后按“2.2.2.2”项下方法操作，制备阴性对照溶液。

2.2.3 专属性实验 取“2.2.2”项下的对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μL，按“2.2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图，结果在与对照品保留时间相同的位置上无色谱峰出现，表明回药复方笋卜黎合剂中其他成分对橙皮苷的测定无干扰。结果见图4。

2.2.4 线性关系考察 分别吸取“2.2.2”项下对照品溶液0.2、0.4、0.8、1、2、5mL，用甲醇稀释为2、4、8、10、20、50μg/mL的系列橙皮苷对照品溶液，取上述对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，得橙皮苷回归方程为Y=12.413X-0.3150，r=0.9999（n=6）。结果表明，橙皮苷在0.02～0.50μg范围内有良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验 吸取上述对照品溶液（8μg/mL）10μL，连续进样6次，测定其峰面积，结果RSD为0.85%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 重复性试验 精密量取6份回药复方笋卜黎合剂（批号20160201）药液各5mL，按“2.2.2”项下方法，分别制备供试品溶液，进样10μl，测定峰面积，结果RSD为1.23%，表明方法重复性良好。

2.2.7 稳定性试验 精密量取同一对照品溶液（2μg/mL），分别于0、2、4、8、12、24h各进样1次，每次10μl，测定其峰面积，结果RSD为1.02%。表明供试品溶液在24h内稳定。

2.2.8 加样回收率试验 精密量取2.5mL橙皮苷含量为44μg/mL的回药复方笋卜黎合剂（批号20160201）药液6份，分别精密加入橙皮苷对照品溶液（40μg/mL）2.5mL。按照“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制备供试品6份，依法进行含量测定，计算加样回收率和RSD。结果见表1。

2.2.9 含量测定 分别取3批回药复方笋卜黎合剂各5mL，每批次平行取样3份，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，照“2.2.1”项下色谱条件进行测定，以外标一点法计算样品中橙皮苷的含量。结果见表2。

结果分析：回药复方笋卜黎合剂中橙皮苷平均含量为44μg/mL，考虑到不同批次中药饮片陈皮中橙皮苷的含量差异以及生产、贮存等因素，故将指标成分含量下浮30%，故暂定制剂成品含橙皮苷不低于31μg/mL。

3 讨论

3.1 甘松为回药复方笋卜黎合剂处方中主要药味，性温，味辛；具有理气止痛，开郁醒脾之功效，回医药擅长于使用芳香药治疗疾病，在《回回药方》中，治疗胃病主要“呕吐门”、“痞证门”及部分“杂证门”的方药，方中大部分使用“笋卜黎”即甘松，其中以甘松为主药的代表方主要有“舍剌必笋卜黎”、“古阿里失虎即方”，回药复方笋卜黎合剂在组方中继承回医药经典，结合现代中医药理论，开发回医药制剂。在其鉴别中，参考《中国药典》2015年版一部甘松项下[7]鉴别方法，提取溶剂不变，将超声处理方法改为回流提取，充分提取合剂中的甘松化学成分，建立的薄层鉴别方法专属性强，操作简单。

3.2 回药复方笋卜黎合剂中药味较多（13味），建立其含量测定方法时阴性干扰较大，且合剂的前处理方法都较为复杂，最初选择黄芩中的黄芩苷进行含量测定，但陈皮中的某个成分干扰；最终选用陈皮的橙皮苷作为含量测定成分，建立的含量测定方法简单易行。在选择三种色谱柱进行专属性试验时，色谱条件相同，phenomenex Luna C18柱（4.6mm×250mm，5μm）和Agilent TC-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）保留时间分别是21min和19min左右，峰形对称性均较好，而Waters C18柱（4.6mm×250mm，5μm）保留时间为17min，最终选择Waters C18柱（4.6mm×250mm，5μm）。

综上所述，研究制定了回药复方笋卜黎合剂的质量标准，方法简单、准确、可行，能够控制本制剂的质量，为该制剂开发为医院制剂打下基础。

参考文献

[1] 牛阳.《回回药方》研究[M].银川：阳光出版社，2010：147-218.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（四部）[S].中国医药科技出版社，2015：57-58.

[3] 潘晓丽，李莹，董小萍，等.甘松药材的薄层色谱研究[J]. 黑龙江医药，2009，22（3）：275-276.

[4] 刘英慧.甘松质量标准及挥发油提取包合工艺的研究[D].长沙：中南大学，2012.

[5] 黄可婧，王丽娟.附子理中片的质量标准研究[J].天津药学，2014，26（5）：16-22.

[6] 仇雅静，朱梓文.HPLC法测定通肠理气合剂中芍药苷和橙皮苷的含量[J].中国药事，2012，26（12）：1366-1368.

[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].中国医药科技出版社，2015：86.

（编辑：穆丽华）