传染病医院全自动血细胞分析仪复检规则的建立

耿　伟　杨　宁　李　妍　申　艳　蔡　硕　王　晗*

传染病医院全自动血细胞分析仪复检规则的建立

耿伟①杨宁①李妍①申艳①蔡硕①王晗①*

目的：参考SysmexXE-2100血细胞分析仪复检标准，依据国内专家组推荐的23条复检规则，通过对试验数据进行分析，制定适合传染病医院使用的血细胞复检规则。方法：随机选取704份医院患者血液标本，检测血常规的同时涂片镜检。以专家组推荐的23条复检规则为评估基础，根据传染病医院病种特点，优化相应复检规则，以涂片镜检为金标准，分别计算出血细胞的真阳性率、假阳性率、真阴性率、假阴性率和涂片复检率。结果：初始复检规则评估结果真阳性率10.93%，假阳性率42.05%，真阴性率44.60%，假阴性率2.41%；涂片复检率52.98%。第1次优化后结果真阳性率9.80%，假阳性率19.89%，真阴性率67.19%，假阴性率3.13%；涂片复检率29.69%。第2次优化后结果真阳性率9.23%，假阳性率16.05%，真阴性率71.16%，假阴性率3.55%；涂片复检率25.28%。最终评估结果涂片复检率＜30%，假阴性率均＜5.0%，且不漏检白血病细胞。结论：初步建立的适用于传染病医院实验室全自动血细胞分析仪复检规则，可有效提高血细胞检验工作效率。血细胞复检规则应在血细胞检验工作中不断改进和完善。

血细胞分析仪；复检规则；传染病医院

［First-author’s address］ Center for Clinical Laboratory， The 302 PLA Hospital， Beijing 100039， China.

近年来，随着检验技术的迅猛发展，全血细胞分析仪因具有先进的检测原理、多模式检测设计以及较高的工作效率和准确率，已经被国内医院广泛使用。然而，血细胞分析仪尚不具备完全识别血细胞形态的能力，而血细胞形态学检查是一种筛查手段，对于形态可疑或者异常的标本还需进行人工显微镜复检，因此制定合理的复检规则尤为重要［1-3］。

2005年，国际血液学复检专家组经研究推荐了国际41条自动血细胞分析和白细胞分类复检规则［3-7］；2008年，国内专家组制定了适合于中国人群应用XE-2100血细胞分析仪白细胞分类的23条涂片复检规则［8］。但作为通则，需要根据实验室特点进行修正。传染病医院检验实验室的特点是血小板减少、单核细胞增生、血色素降低以及白细胞减低的患者较多，与肝病用药、感染病临床及并发症等相关［9-14］。为此，本研究依据国内专家组推荐的23条复检规则，使用血细胞分析仪检测704份患者血常规标本，通过结果评估，对复检规则进行适当修改和完善，制定出适合传染病医院使用的复检规则。

1　材料与方法

1.1标本来源

选取2016年3月在解放军第302医院的就诊和住院的704份患者血标本，其中住院患者288例，门诊患者416例；平均年龄46岁；乙型肝炎患者457例，丙型肝炎患者152例，其他病毒如艾滋病病毒（human immunodeficiency virus，HIV）、人类疱疹病毒第四型（epstein-barr virus，EBV）及巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）等感染患者95例。所有标本均采用EDTA-K2抗凝，并于采血后2 h内用XE-2100自动进样模式进行分析。所有标本均制片，人工镜检为金标准。

1.2仪器与试剂

采用XE-2100全自动血细胞分析仪（日本Sysmex公司）、原装配套试剂、标准物和质控物；Olympus双筒显微镜（日本奥林巴斯光学工业株式会社），用于血涂片显微镜检查；刘氏染液购自珠海贝索生物技术有限公司，用于血涂片染色。

1.3仪器校准和质量控制

检测前，由Sysmex公司工程师用SCS-1000全血标准物对仪器进行校准。校准完成后采用高、中、低3个水平的e-check全血质控物进行严格的室内质量控制。

1.3.1手工复检要求

依照“全国临床检验操作规程”和“白细胞分类计数参考方法”［15-16］中制定的血涂片检测操作程序进行涂片和染色，由2名工作经验超过10年并有中级以上专业技术职称的人员对所有检测标本进行双盲法人工显微镜镜检。复检内容包括：①白细胞（WBC）分类计数，计数200个WBC，为人工WBC分类值，并进行形态观察；②WBC和血小板（PLT）数量评估；③红细胞（RBC）和PLT的大小、染色及形态；④有无巨大PLT和PLT聚集；⑤其他异常，有核红细胞（nucleated red blood cell，NRBC）、RBC冷凝集及寄生虫等。

1.3.2涂片镜检阳性判断标准

涂片镜检阳性判断标准为：①RBC明显大小不等，即细胞大小相差＞1倍，中空淡染，指＞1/2淡染区的RBC数量＞30%，原规则为RBC形态≥2+，且只要发现疟原虫均认为是红细胞有阳性形态学改变；②巨大PLT数量＞15%，原规则为巨大PLT≥2+；③镜检可见PLT聚集，原规则为PLT偶见聚集；④Dohle小体的粒细胞＞10%，原规则为Dohle小体≥2+；⑤中毒颗粒中性粒细胞＞10%，原规则为中毒颗粒≥2+；⑥空泡变性细胞＞10%，原规则为空泡变性≥2+；⑦原始和幼稚细胞≥1%；⑧早幼粒细胞和中幼粒细胞≥1%；⑨晚幼粒细胞＞2%；⑩异形淋巴细胞＞5%，NRBC≥1%，浆细胞≥1%［17］。

1.3.3复检规则的临床应用评估及预期目标

将国内专家组推荐的23条复检规则录入到Laboman4.0软件中，作为传染病医院XE-2100自动血细胞计数和WBC分类初始复检规则并进行统计分析。根据传染病医院的特点通过分析触及的主要规则进行规则调整，预期目标为通过评估，其复检率＜30%，假阴性率＜5.0%，且不漏检白血病细胞［6］。

1.4统计学方法

应用Microsoft Excel软件和统计分析软件“Laboman easy aecess 4.2 s”进行实验数据的统计学分析。以镜检结果为金标准，评估各复检规则对标本判断的真阳性率、假阳性率、真阴性率、假阴性率和涂片复检率，涂片复检率=真阳性率+假阳性率。真阳性为触及复检规则且镜检结果为阳性，镜检形态学异常与所触发的规则无需一一对应；假阳性为触及复检规则但镜检结果为阴性；真阴性为不触及复检规则且镜检结果为阴性；假阴性为不触及复检规则但镜检结果为阳性。

2　结果

2.1初始复检规则临床应用效果评估

以镜检结果为金标准对704例标本按初始复检规则进行评估，真阳性率为10.93%（77/704），假阳性率为42.05%（276/704），真阴性率为44.60%（314/704），假阴性率为2.41%（17/704），涂片复检率为52.98%（373/704）。需要复检的373例标本，单条触及复检规则所占百分比较高的假阳性规则统计见表1。

2.2调整优化初始复检规则

初始复检规则中第3，4，5，11，12条假阳性率较高，调整初检规则：将第3条改为WBC＜2.0×109/ L或＞30.0×109/L；将第4条改为PLT＜40×109/L或＞1000×109/L；将第5条改为HB＜60 g/L或＞180 g/ L；将第11条改为Neut%＜30%或＞80%；将第12条改为Lym%＞50%。

表1　单条触及复检规则所占百分比较高的假阳性规则统计

2.3第一次优化后复检规则评估

根据调整后的复检规则分析704份标本的仪器检测数据，真阳性率为9.80%（69/704），假阳性率为19.89%（140/704），真阴性率为67.19%（473/704），假阴性率为3.13%（22/704），涂片复检率为29.69%（209/704）。与规则调整前比较涂片复检率明显下降。

2.4第二次调整优化复检规则及应用评估

在第一次优化后的基础上将第12条改为Lym%＞55%并与第19条组合，将第13条改为Mono%＞15%；将第14条改为Eos%＞7%。统计结果显示，假阳性率、真阳性率和涂片复检率进一步降低，假阴性率略微升高，但依然在预期目标内，且无白血病细胞漏检。将具体评估结果与初始规则及第一次优化后的评估结果相比较，见表2。

表2　三种复检规则评估结果比较[%(n)]

2.5传染病医院复检规则的建立

本研究通过对初始规则两次调整及结果评估比较，初步建立了适用于传染病医院的XE-2100自动血细胞计数和白细胞分类涂片复检规则，见表3。

表3　传染病医院XE-2100自动血细胞计数和白细胞分类涂片复检规则

3　讨论

传染病专科医院主要收治病毒感染患者及因病毒感染导致的并发症患者，患者以乙型、丙型肝炎肝硬化患者为主，同时包括CMV、EBV、疟原虫及HIV等疾病患者。病毒感染及抗病毒会导致患者出现白细胞总数降低，淋巴及单核细胞偏高，血小板降低，红系减少等症状［18-20］。因此，建立复检规则时应充分考虑这些情况。

将国内专家组推荐的23条复检规则作为初始规则，通过检测结果对该规则进行评估后发现，704份标本尽管假阴性率很低（为2.41%），真阳性率为10.93%，但假阳性率高达42.05%，直接导致涂片镜检率过高（为52.98%）及工作效率降低。对触及复检规则的假阳性规则统计发现，占百分比较高的假阳性参数为WBC和PLT，这与国内专家组的研究报告一致［8］。因此，基于传染病医院实验室的检测结果特点，第一次复检规则优化时首先对WBC、PLT、Neut%、LYM%及HB的参数进行调整。

目前，国际、国内专家组推荐的白细胞分类复检规则以绝对值计算，且下限数值很高，但镜检阳性标准中无白细胞分类数量阳性判断规则，且国内多数实验室对白细胞分类复检都是以百分比计算。因此，本研究对白细胞分类复检规则调整都采用百分比形式。第一次优化后复检规则的评估结果显示假阳性率19.89%，假阴性率3.13%，涂片复检率29.69%，与规则调整前比较其涂片复检率明显下降。

通常将外周血异型淋巴细胞增多作为传染性单核细胞增多症的判断依据之一，通过对触及Atypical/ Variant Lymphs复检规则的样本进行分析，镜检可见异型淋巴细胞，但其均＜5%，差异无统计学意义。王厚芳等［21］将杆状核粒细胞比率＞5.0%、单核细胞比率＞12.0%、嗜酸性粒细胞比率＞10.0%和嗜碱性粒细胞比率＞2.0%纳入镜检阳性判断规则，涂片复检率下降，假阴性率仅略微增加，仍在国际血液学专家组确定的5.0%的可接收范围内。因此，本研究尝试将Lym%＞55%与Atypical/Variant Lymphs组合，调整Mono%＞15%，Eos%＞7%进行第二次复检规则优化，优化后评估结果显示假阳性率、真阳性率及涂片复检率进一步降低，并取得了很好的效果。假阴性率仅由3.13%上升为3.55%，对假阴性的标本分析发现，假阴性主要由巨大血小板、血小板聚集、红细胞形态异常以及少量有核红细胞所致，而有诊断意义的白血病细胞则无漏检。

4　结语

通过两次优化复检规则，本研究初步建立了适用于传染病医院XE-2100自动血细胞计数和白细胞分类涂片复检规则，满足设定的预期目标，减少了不必要的复检工作，使工作效率极大提高。在临床应用复检规则的过程中应注意调整发现的问题，不断的对复检规则进行优化和完善，以保证血液分析的质量，为临床提供更加可靠的血细胞检验信息。

［1］姜华，吴军录，戴燕，等.全自动血细胞分析仪Sysmex XE-2100复检规则的建立及应用评价［J］.检验医学与临床，2013，10（2）：132-134.

［2］丛玉隆，乐家新.再论血细胞分析技术进展及临床应用［J］.中华检验医学杂志，2007，30（4）：365-370.

［3］番云华，郭翀，李轶勋，等.全自动血液分析仪复检规则应用探讨［J］.国际检验医学杂志，2015，36（11）：1562-1564.

［4］韩建平，鲁家才，郝世勇.全自动血液分析工作站血片复检规则的探讨［J］.国际检验医学杂志，2014，35（6）：784-785.

［5］陈丽娟，罗俐莺，陈信强.全自动血液分析仪复检规则的建立和评估［J］.齐齐哈尔医学院学报，2014，35（19）：2856-2858.

［6］卢兴勇，丛玉隆.应重视和提升传统血液形态学检验水平［J］.中华检验医学杂志，2006，29（1）：481-482.

［7］Barnes PW，McFadden SL，Machin SJ，et al.The international consensus group for hematology review：suggested criteria for action following automated CBC and WBC differential analysis［J］.Lab Hematol，2005，11（2）：83-90.

［8］XE-2100血细胞分析仪复检标准制定协作组.Sysmex XE-2100自动血细胞分析和白细胞分类的复检规则探讨［J］.中华检验医学杂志，2008，31（7）：752-757.

［9］王大刚，洪炜，何江英，等.乙肝患者外周血单核细胞比例与肝脏病变程度的关系研究［J］.解放军医学杂志，2012，37（8）：811-814.

［10］王晗，李妍，杨宁，等.丙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群变化特点［J］.细胞与分子免疫学杂志，2014，30（10）：1058-1061.

［11］郭桐生，毛远丽，丛玉隆.肝硬化免疫机制和感染的研究进展［J］.中华临床医师杂志，2013，16（7）：7554-7556.

［12］张效东，余灵祥，杨晓晋.丙肝抗病毒治疗前脾切除纠正血小板减少症［J］.肝胆外科杂志，2009，17（5）：348-351.

［13］张文瑾，范振平.慢性乙型肝炎抗病毒治疗［J］.中国临床医生，2012，40（1）：7-10.

［14］耿进，邢丽群.45例老年戊型肝炎患者的临床观察及护理［J］.中国现代医生，2007，45（4）：64-65.

［15］叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.3版.南京：东南大学出版社，2006：126-137.

［16］中华人民共和国卫生部.白细胞分类技术参考方法［M］.北京：人民卫生出版社，2005：4.

［17］中华检验医学杂志编辑委员会.全国血液学复检专家小组工作会议纪要暨血细胞分类计数复检标准释义［J］.中华检验医学杂志，2007，30（4）：380-382.

［18］张书凤，何艳群，焦炳欣，等.Sysmex XE-5000血液分析仪复检规则的建立与评估［J］.国际检验医学杂志，2015，36（24）：3572-3573.

［19］王晗，赵丽丽，耿伟，等.人类免疫缺陷病毒阳性患者经高效抗逆转录病毒治疗血液学指标变化［J］.解放军医学院学报，2015，36（8）：786-793.

［20］李妍，杨宁，王晗，等.骨髓细胞学与网织血小板对肝硬化脾切除术后血小板的恢复预测［J］.中华卫生检验杂志，2014，24（24）：3554-3558.

［21］王厚芳，孙帝，于贵杰，等.国际血细胞复检规则在贝克曼-库尔特系类血细胞分析仪上的应用及改进方案［J］.中华检验医学杂志，2008，31（7）：758-762.

Establishment of review criteria of automatic hematology analyzer in infectious disease hospital

GENG Wei， YANG Ning， LI Yan， et al

China Medical Equipment，2016，13（9）:45-49.

Objective: Through analysis of the laboratory data to establish the suitable hematology review criteria for infectious disease hospital according to 23 review criteria recommended by experts group and formulation review criteria by Sysmex XE-2100 hematology analyzer. Methods: The total 704 patient samples were randomly detected and blood smear was reviewed. Based on the review criteria from the experts group， we evaluated the true positive ratio （TP）， the false positive ratio （FP）， the true negative ratio （TN）， the false negative ratio （FN） and ratio of smear review according to the disease characteristics of infectious disease hospital. Results: The assessment results of initial review criteria were followed: TP was 10.93%，FP was 42.05%， TN was 44.60%， FN was 2.41%， and review rate was 52.98%； after first optimizing review criteria，TP was 9.80%， FP was 19.89%，TN was 67.19%， FN was 3.13%， and review rate was 29.69%； after second optimizing review criteria， TP was 9.23%， FP was 16.05%， TN was 71.16%， FN was 3.55%， and review rate was 25.28%. The final assessment results showed review rate was less than 30%， FN was less than 5.0%， and no leukemia cells was missed. Conclusion: We established the suitable hematology review criteria for infectious disease hospital and improved work efficiency. The review criteria should be constantly improved in hematology analysis.

Hematology analysis； Review criteria； Infectious disease hospital

1672-8270（2016）09-0045-05

R197.39

A

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2016.09.014

2016-01-15

①解放军第302医院临床检验医学中心 北京 100039

wanghan129@sina.com

耿伟，男，（1987- ），本科学历，技师。解放军第302医院临床检验医学中心，从事临床检验和血液学方面的研究工作。