结肠癌患者口腔具核梭杆菌与结肠癌发生关系的研究

董艳玲　杨立娟　吴金鹏

廊坊市第四人民医院1耳鼻喉科，2口腔科，3肿瘤科，廊坊　065700

结肠癌患者口腔具核梭杆菌与结肠癌发生关系的研究

董艳玲1#杨立娟2吴金鹏3

廊坊市第四人民医院1耳鼻喉科，2口腔科，3肿瘤科，廊坊065700

目的分析口腔具核梭杆菌（Fn）感染与结肠癌发生的关系。方法选取100例结肠癌患者为观察组，100例健康体检者为对照组，对比两组Fn感染率及Fn DNA含量差异。同时根据肿瘤分期将观察组患者分为A期组（39例），B期组（31例）及C期组（30例），对比3组间Fn感染率及Fn DNA含量差异。结果观察组Fn感染率及Fn DNA含量均高于对照组（P＜0.05）；观察组3组间，Fn感染率分别是41.03%、70.97%和93.33%，而Fn DNA含量分别是（55.12±5.79）×108/L、（62.16±6.78）×108/L、（66.23±6.17）×108/L，3组间Fn感染率和Fn DNA含量比较差异均有统计学意义（P＜0.05），其中以C期组Fn感染率及Fn DNA含量最高；且经相关性分析发现，肿瘤分期与Fn DNA含量存在相关性（r=0.756，P＜0.05）。结论Fn感染在结肠癌的发生发展中可能具有一定作用，临床应对Fn感染引起重视，Fn感染可作为辅助结肠癌患者进行病理分期的一项指标。

结肠癌；具核梭杆菌；相关性

Oncol Prog，2016，14（4）

结肠癌为目前发病率较高的恶性肿瘤之一，其全球发病率位于恶性肿瘤排名的第4位［1］。该病以排便习惯改变为主要临床症状，不仅严重降低患者的生存质量，同时也对患者的生命造成严重威胁［2-3］。目前临床对于该病的研究较多，但其发病机制尚未完全明确［4-5］。具核梭杆菌（fusobacterium nucleatum，Fn）为近年来被发现的微生物种类之一，主要分布于口腔。临床研究资料显示，Fn与多种疾病的发生均存在密切关系［6-7］。本文以分析Fn感染与结肠癌发生的关系，从而为临床提供更多有关结肠癌发生机制方面的理论依据。结果报道如下。

1　对象与方法

1.1研究对象

选取2014年1月至2015年3月于廊坊市第四人民医院确诊为结肠癌的患者100例作为观察组。入选标准：①均经病理学检查明确诊断为结肠癌［8］；②所有患者均签署知情同意书。排除标准：①存在口腔疾病者；②存在其他部位原发或继发性肿瘤者；③预计生存期＜3个月；④存在意识障碍者；⑤接受过口腔矫正治疗者；⑥3个月内应用抗生素治疗者。选取同时期健康体检合格的志愿者100名作为对照组。观察组患者中男性66例，女性34例，年龄为（63.25±6.18）岁；对照组中男性61名，女性39名，平均年龄为（63.17±6.33）岁，两组患者一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

根据Dukes肿瘤分期法，将观察组患者又分为A期组（39例），B期组（31例）及C期组（30例）。Dukes分期（1935年）：A期，癌肿浸润深度限于直肠壁内，未穿出深肌层，且无淋巴结转移；B期，癌肿侵犯浆膜层，亦可侵入浆膜外或肠外周围组织，但尚能整块切除，无淋巴结转移；C期，癌肿侵犯肠壁全层或未侵犯全层，但伴有淋巴结转移。观察组中3组患者间的临床资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。（表1）

表1　观察组3组患者的基本特征

1.2观察方法

所有入选者均于入组后立即接受口腔Fn检查及Fn DNA含量测定，统计并对比对照组与观察组间Fn感染率及Fn DNA含量差异。同时对观察组不同分期组间Fn检查及Fn DNA含量情况进行分析，对比3组间Fn感染率及Fn DNA含量差异。并分析Fn感染率及Fn DNA含量与结肠癌肿瘤分期的关系。

1.3检验方法

标本采集应用无菌纸尖法进行。患者先用温水漱口，刮除局部菌斑，以棉球进行局部隔湿。随后将无菌纸尖插入牙龈沟，保持30 s后取出，进而完成标本采集。所有标本均进行24 h培养，培养完成后再进行Fn检查及Fn DNA含量测定。Fn检查为取100 μl培养后的标本进行稀释，并将稀释后的标本接种至培养基，再次培养72 h，完成培养后，对培养基内Fn感染情况进行统计。

Fn DNA含量测定为各抽取100 μl接受24 h培养的标本及标准菌株液，提取Fn DNA进行PCR扩增。扩增方法为：首先于94℃下对Fn DNA进行5 min预变性，随后保持94℃进行变性30 s，完成Fn DNA的预变性及变性后，于58℃下进行复性退火，复性退火时间为30 s，并于72℃下进行1 min延伸，重复30个循环以进行扩增。随后再次完成变性、复性退火、延伸30个循环，并在完成后进行10 min延伸，完成扩增后，应用ABI 7300实时荧光定量PCR检测仪（ABI 7300 Real Time PCR System）进行Fn DNA含量测定。DNA提取试剂盒购自美国Vivantis公司，PCR检测试剂盒购自德国Antibodies-Online公司，引物的设计参照文献［9］方法。

1.4统计学方法

采用SPSS 19.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，并以t检验及F检验进行分析；计数资料以百分率（%）表示，以χ2检验或秩和检验进行分析；采用Spearman相关性分析法分析Fn DNA含量和Dukes肿瘤分期的关系。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

2.1两组间Fn感染率和Fn DNA含量比较

2.2观察组3组间Fn感染率和Fn DNA含量比较

观察组3组间Fn感染率存在差异（χ2=21.169，P＜0.05），观察组3组间Fn DNA含量也存在差异（F=28.367，P＜0.05），其中以C期组Fn感染率及Fn DNA含量最高，与其他两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。B期组的Fn感染率及Fn DNA含量高于A期组，两组差异具有统计学意义（P＜0.05）。相关性分析结果显示Fn DNA含量和Dukes肿瘤分期呈正相关（r=0.756，P＜0.05）。详见表2。

对照组Fn感染率为33.00%，观察组Fn感染率为66.00%，观察组高于对照组（χ2=21.782，P＜0.01）。观察组Fn DNA含量为（60.63±6.88）×108/L，高于对照组的（35.34±6.16）×108/L，差异有统计学意义（t= 27.385，P＜0.05）。

表2　观察组3组间Fn感染率和Fn DNA含量

3　讨论

Fn属于革兰阴性厌氧菌，不仅可导致牙周炎及牙龈炎等多种口腔疾病发生，同时也可导致脑、肺、肝及血液等其他组织器官疾病发生，严重威胁人类身体健康及生命安全［9-11］。因此本研究将其作为观察指标，以分析其对结肠癌发生的影响。

本研究首先对比了健康人群与结肠癌患者Fn感染情况，结果显示：观察组Fn感染率及Fn DNA含量均高于对照组（P＜0.05）。可见在结肠癌患者口腔中Fn感染率及感染程度均高于健康人群。而McCoy等［12］的研究结果显示，Fn丰度与结肠癌的发生成明显正相关，高丰度Fn人群患腺瘤的风险增加了3.5倍，本研究所得结果与其结论一致。同时，Castellarin等［13］的临床研究结果显示，某些梭菌在结肠肿瘤组织中显著升高。而Kostic等［14］针对Fn与结肠肿瘤相关性的进一步分析结果显示，Fn及其相近的菌属均与结肠肿瘤的发生有密切关系。因此Fn感染可作为结肠癌病发的重要危险因素。另外，本研究进一步对结肠癌不同肿瘤分期的3组间Fn感染情况进行分析，结果显示3组间Fn感染率及Fn DNA含量均存在差异，以C期组Fn感染率及Fn DNA含量最高（P＜0.05），且肿瘤分期与Fn DNA含量存在相关性（P＜0.05）。如上结果提示，临床可将Fn感染作为预测结肠癌患者病理分期的重要指标。

综上所述，较正常健康人比较，结肠癌患者具有较高的Fn感染率，且肿瘤分期越高，患者的感染率亦呈增高趋势，Fn DNA含量也伴随肿瘤分期的增加而增加，因此可以推断Fn感染在结肠癌的发生发展中具有一定作用，临床应加强对Fn感染的重视，同时也可将Fn感染作为预测结肠癌患者病理分期的重要指标之一。虽然本研究证实了Fn感染与结肠癌存在一定的相关性，但是并未对Fn感染后，结肠癌患者体内多种细胞因子的变化情况进行分析，故未能对其病理机制提供参考，因此还需对Fn的感染与肿瘤发生的关系进行更深入地研究，从而为临床结肠癌的发生以及其病理机制提供更多的理论依据。

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Correlation between oral infection of fusobacterium nucleatum and the occurrence of colon cancer in colon cancer patients

DONG Yan-ling1#YANG Li-juan2WU Jin-peng3
1Department of ENT，2Department of Dentistry，3Department of Oncology，Langfang Fourth People's Hospital，Langfang 065700，China

ObjectiveTo analyze the relationship between oral infection of nuclear spindle coli（fusobacterium nucleatum，Fn）and the occurrence of colon cancer.Method100 cases of normal healthy adults and 100 cases of colon cancer patients were enrolled in this study as control group and study group，respectively，the Fn infection rate and Fn DNA level of the two groups were detected and compared.Besides，the study group was stratified as group A（n=39），group B（n=31）and group C（n=30）according to the respective tumor stage；Furthermore，the infection rate and Fn DNA level of the three subgroups were compared.ResultThe Fn infection rate and Fn DNA level of study group were both significantly higher than that of the control group（P＜0.05）；The Fn infection rates in the three subgroups were 41.03%，70.97% and 93.33%，respectively，while the Fn DNAlevels were（55.12±5.79）×108/L，（62.16±6.78）×108/Land（66.23±6.17）×108/L，respectively，the FN infection rate and Fn DNA level were of statistically significant difference（P＜0.05），with the group C had the highest infection rate and Fn DNA level；Through analysis，a significant correlation between tumor staging and Fn DNA level was revealed（r=0.756，P＜0.05）.ConclusionFn infection may play an important role in the development of colon cancer，which should be noted in clinical practice，besides，Fn infection may be included as an index for the pathological staging in patients with colon cancer.

colon cancer；fusobacterium nucleatum；correlation

R735.3+5

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.04.28

2015-08-22）

（corresponding author），邮箱：hebeidong123@163.com