HPLC法测定都梁丸中阿魏酸的含量

张艳秋　王　静　袁子民　张振秋

辽宁中医药大学，辽宁　大连　116600



药物研究

HPLC法测定都梁丸中阿魏酸的含量

张艳秋王静袁子民张振秋

辽宁中医药大学，辽宁大连116600

目的：建立HPLC法测定都梁丸中阿魏酸的含量。方法：采用Diamonsil C18色谱柱，以甲醇-0.1%磷酸(65∶35)为流动相，柱温35 ℃，测定波长321nm。结果：阿魏酸进样量在0.0144～0.288μg范围内线性关系良好，r=0.9997，平均加样回收率为98.3%，RSD为1.02%。结论：该法准确、快速、重复性好，可用于都梁丸中阿魏酸的含量测定。

都梁丸；阿魏酸；高效液相色谱法

都梁丸(大蜜丸)由白芷(酒炖)、川芎两味药组成，具有祛风散寒，活血通络的功效，临床主要用于风寒瘀血阻滞脉络所致的头痛，症见头胀痛或刺痛、痛有定处、反复发作、遇风寒诱发或加重。该制剂的质量标准收载于《中国药典》2015版一部(HPLC法)[1]。目前，药典都梁丸质量标准含量测项下及文献报道[2]的都梁丸质量标准研究中均只测定了白芷中欧前胡素的含量，缺少对川芎中阿魏酸的质量控制。本研究采用高效液相色谱法(HPLC法)，测定都梁丸中阿魏酸含量，为都梁丸质量标准的提高提供实验依据。

1　仪器与材料

1.1仪器 Agilent1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)。

1.2材料阿魏酸对照品(批号：0738-200108中国食品药品检定研究院)；甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水；都梁丸(大蜜丸，市售)。

2　方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸(65∶35)；柱温：35℃，检测波长：321nm，流速：1.0mL/min。

2.2对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加70%甲醇制成每1mL含0.0144mg的对照品溶液备用。

2.3供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，混匀，取约3g，精密称定，精密加入等量的硅藻土，研匀，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70 %甲醇25mL，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，以70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜后置棕色量瓶中，即得。

2.4专属性试验按处方量取白芷细粉，按都梁丸制法制备阴性样品，再按“2.3”供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，分别精密吸取供试品溶液、阴性对照液及对照品溶液各10μL，按“2.1”色谱条件依法测定，结果阴性对照溶液在阿魏酸相同保留时间处无色谱峰干扰，HPLC色谱图见图1。

2.5标准曲线制备分别精密吸取“2.2”项下的对照品溶液1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μL，按“2.1”项下的色谱条件依法测定，记录各色谱峰峰面积，以阿魏酸色谱峰的峰面积为纵坐标，阿魏酸对照品的进样量为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Y=4710X-0.284，r=0.9997。表明进样量在0.0144～0.288μg范围内线性关系良好。

2.6稳定性试验精密吸取同一供试品溶液(批号20150910)，分别在0、2、4、6、8、10 h进样测定，记录色谱峰面积，结果供试品溶液在10 h内稳定，RSD为1.93%。

2.7重复性试验取同一批次供试样品(批号20150910)，按“2.3”供试品溶液制备方法，同法制备6份供试品溶液，分别精密吸取各供试品溶液10 μL依法测定，记录各色谱峰峰面积，并按外标一点法计算含量。结果平均含量为0.177mg/g，RSD为1.73%。

2.8精密度试验精密吸取同一供试品溶液(批号20150910)10μL，分别连续进样6次，记录色谱图及各色谱峰峰面积，结果表明该法精密度良好，RSD为1.86%。

2.9回收率试验取已知含量重量差异项下的本品(0.177mg/g，批号20150910)，剪碎，混匀，取约3g，共取6份，分别精密称定，各精密加入等量的硅藻土，研匀，取约1g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，各精密加入阿魏酸对照品溶液(0.085mg/mL)1.0mL，再分别精密加入70%甲醇24mL，其余按“2.3”供试品溶液制备方法制备供试品溶液，并依法测定，结果见表1，表明回收率符合相关规定。

表1　回收率试验测定结果

2.10含量测定取20150910、20150915、20150923批样品，分别按“2.3”供试品溶液的制备方法制备，按“2.1”色谱条件依法测定，按外标一点法计算含量，结果阿魏酸的含量分别为0.177mg/g、0.168mg/g、0.186mg/g(n=3)。

3　讨论

3.1本品川芎采用原粉入药，实验中参考药典川芎中阿魏酸的含量测定方法[3]，对供试品溶液的制备方法中所用溶剂(甲醇、70%甲醇)、提取时间(20min、30min、40min)、提取方法(回流、超声)进行了考察，结果回流法优于超声法，提取30min基本提取完全[4]。本品由于含有大量蜂蜜，实验中加入了硅藻土，主要目的为降低黏性，易于溶剂浸润、渗透提取。

3.2文献对都梁滴丸(白芷、川芎提取后入药)采用HPLC同时测定了阿魏酸、5-甲氧基补骨脂素、欧前胡素的含量[5]，后续研究中对于都梁丸也可以尝试同时测定阿魏酸、欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素等多种成分，以进一步提高本品质量标准。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2015:1325.

[2]曹红，邢俊波，陈玉敏，等.都梁丸质量标准的研究[J].解放军药学学报 2012，28(5)：417-419．

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2015:41.

[4]RP-HPLC法测定天麻头痛片中阿魏酸含量[J].中国医药导刊，2011，13(2)：330-331．

[5]席海为，马强，李强，等.HPLC法同时测定都梁滴丸中阿魏酸、5-甲氧基补骨脂素、欧前胡素[J].中国实验方剂学杂志，2011，17(16)：81-85.

(编辑：熊金富)

Determination of Ferullic Acid in Duliang Pills by HPLC

ZHANG YanqiuWANG JingYUAN ZiminZHANG Zhenqiu

Liaoning university of TCM, Dalian 116600,China

Objective To establish HPLC for determining the content of ferullic acid in Duliang Pills.Method An HPLC method was developed.The chromatographic conditions were as follow: Diamonsil C18 column and methanol-0.1% phosphoric acid (65∶35) as mobile phase, The column temperature was 25℃，detection wavelength at 321nm.Result The recovery range of ferullic acid was 0.0144～0.288μg,r=0.9997.The average recovery rate was 98.3% andRSDwas 1.02%.Conclusion The method is simple and accurate,with good repeatability,and can be used for determination of ferullic acid in Duliang Pills.

Duliang Pills; Ferullic acid; HPLC

2016-05-25

张艳秋，女，研究生在读，研究方向为中药质量标准。E-mail:syzhangyanqiu @126.com

袁子民，男，副教授，研究方向为药物制剂及质量标准。E-mail:yuanzmin@163.com

R286.0

A

1007-8517(2016)15-0015-02