结直肠黏膜光镜下炎症表现及NF-κB、COX-2的表达与结直肠肿瘤发病的相关性分析

文长江　曾沁



·论著·

结直肠黏膜光镜下炎症表现及NF-κB、COX-2的表达与结直肠肿瘤发病的相关性分析

文长江曾沁

目的观察结直肠黏膜光镜下炎症表现，探讨细胞核因子(NF-κB)、环氧合酶(COX-2)的表达与结直肠肿瘤发病的相关性。方法选取2013年7月至2014年7月收治的30例结直肠癌患者、30例结直肠腺瘤患者、30例健康体检者，取肿瘤组织及距离其5 cm处正常黏膜，对照组取正常黏膜进行检查，利用显微镜观察组织淋巴细胞浸润程度、腺体形态等，并对NF-κB、COX-2表达水平进行检测。结果结直肠癌、癌旁黏膜、直肠腺瘤、腺瘤旁黏膜淋巴细胞浸润程度较正常黏膜更高(P<0.05)；结直肠癌旁黏膜腺体变异率高于腺瘤旁黏膜、正常结肠黏膜(P<0.05)；结直肠癌、结直肠腺瘤患者NF-κB、COX-2表达水平高于正常黏膜(P<0.05)。结论结直肠癌、腺瘤患者，结直肠黏膜存在炎症表现，主要表现为腺体变异、淋巴细胞浸润等，在结直肠癌、腺瘤组织中，NF-κB、COX-2表达水平较高，有利于为疾病的诊断、治疗提供专业参考。

结直肠肿瘤；结直肠腺瘤；细胞核因子；环氧合酶

结直肠癌是临床常见的消化系统肿瘤，其发生与发展是一个较为漫长的过程，也是多种因素长期作用的结果，主要包括遗传和环境因素[1]，环境因素包括肥胖、肠病、吸烟、糖尿病、高脂血症等。有研究显示[2]，结直肠肿瘤发病前及发展过程中存在一些炎症因素，结直肠黏膜组织学改变，同样可诱发肿瘤。目前临床对这些炎症因素对结直肠肿瘤发病的诱发机制研究报道甚少，其相互关系未完全阐明。本文借助显微镜观察结直肠黏膜下炎症表现，并分析细胞核因子(NF-κB)、环氧合酶(COX-2)的表达与结直肠肿瘤发病的关系。

1　资料与方法

1.1一般资料本组90例患者于2013年7月至2014年7月在我院接受结直肠镜检查，根据检查结果，患者分为健康体检者30例、结直肠癌30例、结直肠腺瘤30例。其中正常组男19例，女11例；年龄28～76岁，平均年龄(60.3±4.3)岁；结直肠癌组男18例，女12例;年龄30～79岁，平均年龄(61.0±4.5)岁；结直肠腺瘤组男20例，女10例；年龄29～78岁，平均年龄(60.9±4.4)岁。3组对象一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2纳入与排除标准

1.2.1纳入标准[3]：经病理诊断为结直肠癌、结直肠腺瘤或正常者，依从性高，了解研究内容，自愿签署知情同意书。

1.2.2排除标准：急性慢性肠炎症病史、放射性结肠炎病史、合并身体其他部位急性慢性炎症、其他恶性肿瘤者；长期服用非甾体类抗炎药者；拒绝签署知情同意书者。

1.3方法

1.3.1全部患者均接受电子结肠镜检查，一旦发现肠道肿瘤，分别取肿瘤组织、距肿瘤边缘5 cm肿瘤旁黏膜标本，部分结直肠癌患者术后取同部位标本[4]；如果检查结果为阴性，在升结肠、降结肠处活检2块。

1.3.2免疫组化:采用免疫组化染色SP法对NF-κB、COX-2进行检测，由北京中杉金桥生物技术有限公司提供COX-2、NF-κB鼠抗人单克隆抗体、SP试剂盒。严格按照说明书步骤严格进行[5]。

1.4判断淋巴细胞浸润程度、肠腺变异率、NF-κB、COX-2表达水平在显微镜下观察各种标本HE染色切片，记录低倍镜下组织腺体有无变异，如肠腺体大小、形状、分支等。在低倍镜下炎性细胞浸润最严重的区域，换高倍镜观察，随机取3个视野观察淋巴细胞计数，取平均值。适当修改慢性胃炎诊断标准，规定1级：淋巴细胞数<10；2级：淋巴细胞数10～19；3级：淋巴细胞数>20或淋巴细胞局灶性浸润；4级：弥漫性淋巴细胞浸润。在显微镜下观察免疫组化染色结果，COX-2为胞浆显色，NF-κB为胞核或胞浆显色。采用半定量法，对细胞染色结果进行判断，0分：细胞染色阳性率0～4%；1分：细胞染色阳性率5%～24%；2分：细胞染色阳性率25%～49%；3分：细胞染色阳性率50%～74%；细胞染色阳性率75%～100%；染色强度分为阴性0分、淡黄色1分；棕黄色2分；棕黑色3分，以两者积评价蛋白表达水平，评分范围在0～12分。一张切片组织1/2细胞为棕黄色，1/4为淡黄色，1/4未显色，评分为：3×2+2×1+2×0=8分。阴性(-)：0～1分；弱阳性(+)：2～3分；中度阳性(++)：4～6分；强阳性(+++)：>7分[6-8]。

2　结果

2.1不同部位淋巴细胞浸润程度比较结直肠癌、癌旁黏膜淋巴细胞浸润程度高于正常黏膜(P<0.05)，结直肠腺瘤、腺瘤旁黏膜淋巴细胞浸润程度高于正常黏膜(P<0.05)，结直肠癌、癌旁黏膜及结直肠腺瘤、腺瘤旁黏膜浸润程度比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　不同部位淋巴细胞浸润程度比较　n=30,例(%)

注：与正常结肠黏膜比较，*P<0.05

2.2结直肠癌旁黏膜、结直肠腺瘤旁黏膜、正常结肠黏膜腺体变异率比较结直肠癌旁黏膜腺体变异率较结直肠腺瘤旁黏膜、正常结肠黏膜明显较高(P<0.05)；正常结肠黏膜和结直肠腺瘤旁黏膜变异率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2　正常结肠黏膜、结直肠癌旁黏膜、腺瘤旁黏膜腺体变异率比较

注：与结直肠癌旁黏膜比较，*P<0.05

2.3不同部位NF-κB表达水平比较结直肠癌患者NF-κB表达水平相比癌旁黏膜、结直肠腺瘤、腺瘤旁黏膜、正常结肠黏膜明显提高，结直肠腺瘤NF-κB表达水平较腺瘤旁黏膜、正常黏膜组织增高(P<0.05)；结直肠癌旁黏膜、腺瘤旁黏膜NF-κB表达水平与正常黏膜比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3　不同部位NF-κB表达水平比较　n=30,例(%)

注：与结直肠癌组比较，*P<0.05

2.4不同部位COX-2表达水平比较结直肠癌患者COX-2表达水平相比于癌旁黏膜、正常结肠黏膜显著提高，结直肠腺瘤COX-2表达水平较腺瘤旁黏膜、正常黏膜组织增高(P<0.05)，结直肠癌和结直肠腺瘤COX-2表达水平差异无统计学意义(P>0.05)，结直肠癌旁黏膜和腺瘤旁黏膜与正常黏膜比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

3　讨论

近年来，人们生活水平不断提高，生活习惯、饮食结构发生了较大的变化，消化系统疾病患病人数越来越多，对人们生活质量、身体健康造成严重的影响。结直肠肿瘤是一种常见的消化道肿瘤，在欧美国家结直肠肿瘤死亡率居于第二位[9]，我国结直肠肿瘤发病率和病死率均呈上升趋势，需引起临床高度重视。多数学者认为结直肠癌发生序列为“正常上皮-增生性上皮-腺瘤-癌”，结直肠腺瘤多部位发病较为常见，腺瘤切除5年内复发率高达40%左右[10]，与其复发危险因素、前次腺瘤大小、数目有关，提示结直肠腺瘤具有多发性、易复发性，也表明结直肠肿瘤患者正常结直肠黏膜可能处于癌前病变状态。

表4　不同部位COX-2表达水平比较　n=30,例(%)

大肠病变直观表现为结肠黏膜形态学变化，正常结肠上皮细胞包括吸收细胞和杯状细胞，腺体大小均匀，多为圆形，整齐排列，黏膜固有层有少量炎症细胞分散[11]。目前结直肠肿瘤相关炎症笔者所见临床报道甚少，缺乏统一的诊断标准。本文研究发现结直肠癌旁黏膜及腺瘤旁黏膜腺体变异率高于正常组，但正常结肠黏膜与腺瘤旁黏膜比较无差异(P>0.05)，可能与研究样本量少有关。同时结直肠癌、腺瘤及其旁黏膜淋巴细胞浸润程度较正常结肠黏膜更高，说明结直肠癌、癌前病变患者正常黏膜中，有慢性炎症因子存在[12]。

NF-κB是肿瘤与炎症的重要纽带[13]，在胞浆中与抑制因子-IB结合，处于抑制状态，一旦受到细胞外刺激时活化，调节多种细胞因子表达，促进炎性反应、肿瘤形成。本组结果显示，结直肠癌患者NF-κB表达水平高于癌旁黏膜、正常结肠黏膜，腺瘤NF-κB表达水平也高于腺瘤旁黏膜、正常结肠黏膜，提示NF-κB在正常黏膜-癌前病变-癌症发展中具有重要的作用。

COX-2是一种炎症过程的诱导酶[14]，也是花生四烯酸环氧煤代谢途径的限速酶，通常在组织细胞中不表达或低表达，肿瘤细胞中表达最高，其次是炎症细胞、血管内皮细胞、损伤的成纤维细胞。在外界刺激下，如急性或慢性炎症刺激下，可诱导COX-2大量表达，加快组织炎性反应。COX-2过表达机制尚未完全阐明，可能与多种细胞因子有关，如IL-6、NF-κB等。结果显示结直肠癌COX-2表达水平高于癌旁黏膜、正常结肠黏膜，腺瘤高于腺瘤旁黏膜和正常结肠黏膜，证实了COX-2参与了结直肠癌发病过程。

在本研究中，并未发现COX-2、NF-κB在癌旁黏膜、腺瘤旁黏膜表达与正常黏膜的差异，可能与样本量少、试验条件有关[15]。

综上所述，结直肠癌患者正常黏膜存在慢性炎症，表现为腺体变异、淋巴细胞浸润等，NF-κB、COX-2参与了癌症发病过程，为结直肠癌早期诊断提出了新的认识，有利于疾病诊断、治疗及预后。

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3李博伦,陈小岚.结直肠腺瘤发病相关因素及癌变机制的研究进展.解放军医药杂志,2015,27:108-111.

4郭云,唐卫中,张森,等.Cox-2、VEGF在结直肠癌中表达及其临床意义.结直肠肛门外科,2011,17:347-349.

5杨静,朱元民,刘玉兰,等.菌群与黏膜慢性炎性反应在结直肠肿瘤发病中的作用.中华消化杂志,2011,31:643-645.

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10杨静,吴杰.代谢综合征与结直肠肿瘤关系的研究进展.中华临床医师杂志(电子版),2014,13:4065-4068.

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14张梦玲,方捷迪,李争艳,等.环氧化酶-2在结直肠癌组织中表达及其临床病理意义研究.现代医药卫生,2013,29:2741-2742.

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Inflammatory characteristics of colorectal mucous membrane under light microscope and correlation between the expressions of NF-κB,COX-2 and pathogenesis of colorectal cancer

WENChangjiang,ZENGQin.

DepartmentofPathology,TCMHospitalofShehongCounty,Sichuan,Shehong629200,China

ObjectiveTo observe the inflammatory characteristics of colorectal mucous membrane under light microscope,and to investigate the correlation between the expressions of nuclear factor (NF-κB), cyclooxygenase (COX-2) and pathogenesis of colorectal cancer.MethodsThirty patients with colorectal cancer,30 patients with colorectal adenoma who were admitted and treated in our hospital from July 2013 to July 2014 were enrolled in the study, moreover,the other 30 healthy subjects were served as control group. The tumor tissues and the normal tissues 5cm apart from tumor tissues were taken out as specimens,and the normal mucous membrane tissues were taken out in control group to be examined under light microscope for the lymph cell infiltration and gland morphous.Moreover the expression levels of NF-κB and COX-2 were detected and compared among three groups.ResultsThe lymph cell infiltration degree in colorectal cancer, mucous membrane tissues beside cancer,rectal adenoma and adjacent tissues was significantly greater than that in normal mucous membrane tissues (P<0.05). The mutation rate of gland and mucous membrane beside colorectal cancer was significantly higher than that in adenoma adjacent mucous membrane and normal colon mucous membrane (P<0.05). The expression levels of NF-κB and COX-2 in colorectal cancer and colorectal adenoma were significantly higher than those in normal mucous membrane (P<0.05).ConclusionThe inflammatory manifestations exist in colorectal cancer, adenoma, colorectal mucous membrane,which are mainly gland mutant and lymphocyte infiltration.Moreover the expression levels of NF-κB,COX-2 in colorectal cancer and adenoma tissues are higher,which can provide reference for the diagnosis and treatment of the diseases.

colorectal neoplasms; colorectal adenoma; cell nuclear factor; cyclooxygenase

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.19.014

629200四川省射洪县中医院病理科

R 735.37

A

1002-7386(2016)19-2936-03

2016-03-01)