地榆黄连灌肠剂提取工艺

曾凡帅,　于智莘,　王　沛

(长春中医药大学 药学院, 吉林 长春　130117)



地榆黄连灌肠剂提取工艺

曾凡帅,于智莘*,王沛

(长春中医药大学 药学院, 吉林 长春130117)

以盐酸小檗碱为指标，采用紫外分光光度法测定其含量，选取不同的乙醇浓度、乙醇量、煎煮时间、煎煮次数为考察因素，采用L9(34)正交试验法优选地榆黄连灌肠剂的醇提工艺。最佳工艺为10倍药材量的70%的乙醇，提取2次, 每次提取1.5 h。

地榆黄连； 灌肠剂； 盐酸小檗碱

0　引　言

地榆黄连灌肠剂是在院内协定处方地榆黄连汤的基础上进行剂型改良，其组方是由黄连、黄柏、苦参、地榆、五倍子、没药等组成。具有清热解毒凉血的功效[1]。本实验采用医用乙醇对药用成分进行提取。以盐酸小檗碱含量为指标，采用正交试验设计法优选地榆黄连灌肠剂提取的最佳工艺参数[2]，目的是为该制剂研究提供质量控制依据。

1　仪器与试药

1.1仪器

AL204电子天平,梅特勒仪器有限公司；

TU-1810紫外可见分光光度计,北京普析仪器有限公司；

91-B型电子调温电热套,天津市泰斯仪器有限公司。

1.2试药

黄连、黄柏、地榆、苦参、没药、五倍子，吉林省长春市同仁堂药房；

盐酸小檗碱对照品,中国药品生物制品检定所ID：3UGA-HEKE；

乙醇,北京化工厂。

2　方法与结果

2.1盐酸小檗碱含量测定

2.1.1对照品溶液的制备

精密称取盐酸小檗碱标准品25 mg，加入适量70%乙醇溶液，水浴加热溶解25 min，放冷,过滤，转移至250 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，制成浓度0.1 mg/mL的盐酸小檗碱标准溶液[3]，即得。

2.1.2供试品溶液的制备

精密量取地榆黄连灌肠剂1 mL，加入适量70%乙醇溶液，水浴加热溶解25 min，放冷,过滤，转移至250 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。

2.1.3检测波长的选择

分别取对照品溶液和供试品溶液1 mL置于10 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，以70%乙醇作空白对照溶液。在300～400 nm波长范围内进行紫外光谱扫描，均在349 nm下测得最大吸收波长，故确定349 nm为测定波长。

2.1.4线性关系考察

精密量取“2.1.1”项下标准溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分别置于 10 mL量瓶中，加入70%乙醇至刻度，在349 nm 波长处测定吸收度[4]，吸收度分别为0.148、0.287、0.427、0.566、0.707、0.847，得到回归方程y=69.914x+0.007 6(r=0.999 7)，说明盐酸小檗碱在乙醇中溶解后，浓度在 0.002～0.012 mg/mL范围内，浓度与吸收度呈现良好的线性关系。

2.1.5精密度试验

按“2.1.2”方法制备供试品溶液，取1 mL置于10 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，在349 nm处测定吸光度，连续测定5次。吸光度结果分别为：0.754、0.754、0.753、0.753、0.753。计算RSD为0.07%，说明实验仪器精密度较好。

2.1.6稳定性试验

分别取对照品溶液和供试品溶液各1 mL置于10 mL容量瓶中，于室温放置0、1、2、3、4、5 h后，在349 nm处测定吸光度，结果分别为：对照品0.707、0.707、0.707、0.707、0.706、0.706，计算RSD为0.07%；供试品0.754、0.754、0.753、0.753、0.752、0.752，计算RSD为0.12%。结果表明,对照品溶液和供试品溶液在5 h内稳定性良好。

2.2正交试验设计

采用L9(34)正交试验法对黄连、黄柏、苦参、地榆等药材进行醇提取工艺优选，选择乙醇浓度(A)、乙醇量(B)、煎煮时间(C)、煎煮次数(D)四个因素，以盐酸小檗碱含量为考察指标，确定最佳工艺[5-6]，因素水平见表1。

表1　提取工艺因素水平表

2.3正交试验样品溶液的制备

按处方比例称取黄连、黄柏、苦参、地榆等药材9份，按表1条件进行回流提取操作[7-8]，提取滤液后，过滤，浓缩成1∶1(药液体积mL：生药质量g)的浓缩液[9-10]，按2.1.2操作方法制备，分别取1 mL置于10 mL容量瓶中，即得。

2.4正交试验结果

测定正交试验9份样品中盐酸小檗碱的含量，并对其进行方差分析，结果见表2和表3。

表2　乙醇回流提取正交试验设计方案及结果表

表3　方差分析结果表

P*：F1-0.05(2,2)=19.00

2.5正交试验分析

由表2和表3方差分析结果表明，各因素对提取工艺的影响顺序为A>C>B>D。当处于A2B3C3D3条件时，得率最高，只有A因素对提取的影响存在显著性差异，B、C、D因素均无显著意义，从节约能源，节约成本方面考虑，可适当减少煎煮次数，缩短煎煮时间，减少乙醇量，结合方差分析结果，确定醇提取的最佳条件为：A2B2C2D2，即加10倍药材量的70%的乙醇，提取2次，每次提取1.5 h。

3　小结与讨论

地榆黄连灌肠剂是在院内处方地榆黄连汤的基础上进行剂型改良，盐酸小檗碱是本方剂的主要药效成分之一，成分稳定，采用本方法提取率高，可以保证灌肠剂的疗效。盐酸小檗碱是灌肠剂发挥药效的重要物质基础[11]，因此选择盐酸小檗碱为指标。

实验通过正交设计[12-13]优选了地榆黄连灌肠剂的提取工艺，以盐酸小檗碱含量为考察指标，因考虑节约成本因素，确定最佳工艺为：10倍药材量的70%的乙醇，提取2次,每次提取1.5 h，且接近最高得率。按最佳工艺进行重复性试验，稳定性良好，适合于工业上的生产。

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Sanguisorba coptis enemas extraction

ZENG Fanshuai,YU Zhixin*,WANG Pei

(School of Medicine， Changchun University of Traditional Chinese Medicine, Changchun 130117, China)

The content of berberine enemas is taken as index, which is measured with UV spectrophotometry, and then ethanol concentration, the amount of ethanol, boiling time, boiling times are considered to select the optimal technology of berberine enema alcohol extraction by usingL9(34) orthogonal test. The result shows that the optimal technology is with 70% ethanol of 10 times amount of extracted medication, extraction 2 times for 1.5 hours.

sanguisorba rhizoma coptidis; enemas; berberine hydrochloride.

2016-03-19

吉林省科技厅科技支撑基金资助项目(20120446)

曾凡帅(1991-)，男，汉族，吉林长春人，长春中医药大学硕士研究生，主要从事中药制药技术方向研究,E-mail:1103463098@qq.com. *通讯作者：于智莘(1977-)，女，汉族，吉林长春人，长春中医药大学副教授，主要从事中药制剂方向研究,E-mail:391791847@qq.com.

10.15923/j.cnki.cn22-1382/t.2016.4.04

R 965

A

1674-1374(2016)04-0328-04