辐照与高压蒸汽灭菌饲料对SD大鼠妊娠及胎仔发育的影响

2016-10-09赵康涛陈冠敏黄宗锈福建省人兽共患病研究重点实验室福建省疾病预防控制中心福州35000福建医科大学公共卫生学院教学基地福州350004

实验动物与比较医学 2016年1期

赵康涛，陈冠敏，2，林蔚，陈润，黄宗锈，林健，2（. 福建省人兽共患病研究重点实验室，福建省疾病预防控制中心，福州 35000；2. 福建医科大学公共卫生学院教学基地，福州 350004）

·经验交流·

赵康涛1，陈冠敏1，2，林蔚1，陈润1，黄宗锈1，林健1，2
（1. 福建省人兽共患病研究重点实验室，福建省疾病预防控制中心，福州 350001；
2. 福建医科大学公共卫生学院教学基地，福州 350004）

目的了解不同灭菌处理饲料对SD大鼠妊娠及胎仔发育的影响。方法离乳SD大鼠随机分为辐照和高压蒸汽灭菌饲料组，饲养2个月后按1∶1比例雌雄同笼交配，分别于0 d、7 d、12 d、16 d、20 d称妊娠鼠体质量，并于20 d时采血后处死妊娠鼠，解剖，取完整子宫称重后取出胎仔，对胎仔称重，量身长、尾长，观察胎仔外观、内脏及骨骼发育；雄性大鼠于试验结束时称体质量，取睾丸及附睾称重，计算脏器系数，测血清睾丸酮含量。结果两种饲料对妊娠鼠各阶段体质量无明显影响（P＞0.05），仔鼠活胎率，身长、尾长无差异（P＞0.05），骨骼及内脏发育亦无明显差异（P＞0.05）；辐照饲料组交配成功率高于高压饲料组（P＜0.05），但两组雄鼠睾酮含量无明显差别（P＞0.05），雄性大鼠睾丸及附睾系数亦无差异（P＞0.05）。结论两种不同灭菌处理饲料对妊娠大鼠及其胎仔发育影响无明显差异，均无明显致畸作用，但对亲代大鼠早期性兴奋影响可能有区别。

SD大鼠；高压灭菌饲料；辐照灭菌饲料；子代发育

随着生命科学的不断发展，对实验动物质量的要求也不断提高，尤其是SPF级实验动物的广泛使用，对相关的饲料、垫料，饮水等也提出了更高的质量要求。清洁级以上级别实验动物饲料均需消毒灭菌后方可用于实验动物饲喂。目前实验动物饲料的消毒多采取高温高压灭菌法与60Co辐照灭菌法。对于两种灭菌法的优劣，虽然有一些相关的文献报道［1，2］，但研究范围及角度有限，多集中于实验动物生产繁殖性能和饲料利用效价方面。本试验采用两种不同灭菌处理后的饲料分别饲喂离乳SD大鼠，至大鼠性成熟交配、妊娠，观察其对母鼠和胎仔发育的影响。

1 材料与方法

1.1 动物及饲养环境

SPF级离乳SD大鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司［SCXK（沪）2012-0001］，体质量45～55 g，雌性65只，雄性40只，饲养于SPF级动物实验室［SYXK（闽）2012-0008］。

1.2 仪器和试剂

仪器: G&G电子天平（T1000），感量 0.01 g，桂陆电子数显游标卡尺（0～200 mm），BIO-RAD Model 680型酶标仪。试剂: 茜素红染料、甘油、甲醛、冰醋酸、苦味酸均购自国药集团，为分析纯；大鼠雌激素（E）酶联免疫分析试剂盒，大鼠睾酮（T）酶联免疫分析试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。

1.3 鼠用生长繁殖饲料及灭菌方法

购于上海斯莱克实验动物有限责任公司［沪饲审（2014）04001］。高压蒸汽灭菌方法，经115 ℃、30 min高压蒸汽灭菌，辐照灭菌方法: 经25 kGy60Co辐照。

1.4 实验方法

离乳SD大鼠检疫间适应性饲养3 d后，进入实验室，随机分为辐照饲料组（n=32）和高压饲料组（n=33），苦味酸标记，分别以相应饲料饲养2个月后，按雌雄1∶1同笼交配，次日观察阴栓，有阴栓脱落雌鼠为妊娠0 d，取出单笼饲养，并补充同组新雌鼠继续交配，交配期间自由摄食饮水；饲料种类不变，各组雄鼠保持不变。分别于妊娠后0 d、7 d、12 d、16 d、20 d称量妊娠鼠体质量，并于20 d时采血并处死，解剖取完整子宫称重后取出胎仔，并称重，测量身长、尾长，同时观察外观生长发育情况；同窝仔鼠按称重顺序奇偶分两部分，奇数部分浸泡固定液，固定一周后取出，进行内脏发育及畸形观察并记录，另一部分胎鼠剥去外皮，去除内脏和脂肪后，浸入茜素红染液中，经甘油透明化处理后观察，记录第2、5胸骨发育及全身其他骨骼的发育及畸形情况。雄性大鼠交配结束后，称体质量（提前16 h禁食），采血后处死，解剖，取睾丸及附睾并称重，计算脏器系数，血样取血清测睾丸酮含量。

1.5 统计方法

2 结果

2.1 对亲代妊娠率及雄鼠的影响

辐照组妊娠率率高于高压组（P＜0.05）（表1）。

表 1 不同方法灭菌饲料对大鼠妊娠的影响

实验结束时，两组雄性大鼠（n=20）体质量，睾丸、附睾重量及系数，性激素水平均无明显差异（P＞0.05）（表2）。

由表3可见，无论高压组还是辐照组，妊娠鼠体质量均呈相同增长趋势，且两组间各阶段体质量无统计学差异。

由表4可见，两组妊娠鼠间子宫连胎重、着床数及活胎数等均无统计学差异。

2.3 对胎仔重量及形态发育的影响

胎仔体质量、胎盘重、身长、尾长组间无明显统计学差异（表5）。

各组胎仔发育畸形发生情况，第2、5胸骨发育缺失发生情况，囟门宽和长均无明显差别（表6）。

表 2 不同饲料对成年雄性大鼠性器官发育及性激素的影响

表 3 不同饲料组妊娠鼠体质量 g

表 4 不同饲料对大鼠妊娠鼠产仔影响

表 5 不同饲料对仔鼠发育的影响

3 讨论

饲料的无菌处理是饲养高等级实验动物的基础和必要条件。60Co 辐射灭菌是利用60Co 产生的射线杀死微生物的一种冷灭菌方法，能较好地保存饲料中的营养成分，但灭菌过程和灭菌效果不能自控。高压蒸汽灭菌方法具有自身优点，灭菌成本低廉、灭菌设备在动物实验室配备，灭菌过程和灭菌效果可以自控。因此，饲料高压蒸汽灭菌方法目前在各动物实验室被大量采用。而针对高压蒸汽灭菌饲料经高温消毒后，营养成分破坏较多，尤其是维生素含量下降大的问题，一般均采用增加营养成分投料量的方式来弥补这部分的损失［3］。

表 6 不同饲料对大鼠子代发育影响

有相关文献报道［4，5］，不同灭菌方法的饲料对动物的生长发育过程会产生不同的影响，但也有报道［6，7］，两种饲料对大鼠的生长发育影响并无明显差异。说明有必要对这两种方法灭菌饲料对大鼠繁殖、发育的影响做进一步研究。

作者使用不同方法灭菌后鼠生长繁殖颗粒饲料饲养大鼠，观察妊娠及胎仔发育畸形等多方面情况，比较全面地探讨了辐照颗粒料和高压颗粒料对大鼠生殖的影响。从大鼠交配成功率看，辐照组大鼠交配成功率更高。两组雄性大鼠睾酮水平、睾丸及附睾系数并无明显差异。以往文献［8］报道辐照饲料组妊娠鼠着床率及活胎数高于高压饲料组，但本试验中，着床数，活胎数等指标均无明显统计学差异，而通过对胎仔外形，器官、骨骼，囟门发育及第2、5胸骨缺失情况的观察，各组仔鼠发育均无明显差异，与前述结果表现一致，提示两种饲料对大鼠胎仔发育影响无明显差异。

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Q95-33 R-332

1674-5817（2016）01-0048-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.01.009

2015-07-14