猪肉中氯丙嗪残留检测UPLC-MS/MS法探讨

韩银涛（深圳市农产品质量安全检验检测中心，广东 深圳　518000）



猪肉中氯丙嗪残留检测UPLC-MS/MS法探讨

韩银涛
（深圳市农产品质量安全检验检测中心，广东 深圳518000）

本文在参考国内外文献的基础上，对超高效液相色谱串联质谱法测定猪肉中的氯丙嗪残留进行了探讨。在碱性条件下，经过1 h的80℃水浴，用无水乙醚两次提取，吹干提取液后，用1.00 mL流动相（5 mmoL/L乙酸铵+乙腈）复溶，过膜后上UPLC-MS/MS测定，建立了猪肉中氯丙嗪残留的超高效液相色谱串联质谱检测方法。具有良好的线性关系，相关系数r=0.994 754；经测定方法检出限确定为0.250 μg/kg，可满足实际检测需要；加标回收试验的变异系数及回收率范围等结果满足GB/T 27404-2008《实验室质量控制规范 食品理化检测》的要求。本试验方法前处理过程简便、快捷、易操作，UPLC-MS-MS及流动相梯度等一系列的条件设置合理，经UPLC-MS-MS打碎后的定性定量离子辨识度高，有较高的响应，测得检出限可满足检测需求，验证结果具有较好的精密度和准确度，可用于猪肉中氟哌啶醇残留检测。

猪肉；氟哌啶醇；检测方法

氯丙嗪：（1）治疗精神病：用于控制精神分裂症或其他精神病的兴奋躁动、紧张不安、幻觉、妄想等症状，对忧郁症状及木僵症状的疗效较差。对Ⅱ型精神分裂症患者无效，甚至可加重病情［1］。（2）镇吐：几乎对各种原因引起的呕吐，如尿毒症、胃肠炎、癌症、妊娠及药物引起的呕吐均有效。也可治疗顽固性呃逆。但对晕动病呕吐无效。（3）低温麻醉及人工冬眠：用于低温麻醉时可防止休克发生。人工冬眠时，与哌替啶、异丙嗪配成冬眠合剂用于创伤性休克、中毒性休克、烧伤、高烧及甲状腺危象的辅助治疗。（4）与镇痛药合用，治疗癌症晚期患者的剧痛。（5）治疗心力衰竭。（6）试用于治疗巨人症。常用其盐酸盐，为白色或乳白色结晶性粉末；有微臭，味极苦；有引湿性；遇光渐变色；水溶液呈酸性反应。在水、乙醇或氯仿中易溶，在乙醚或苯中不溶。熔点为194℃～198℃。主要用于：各种急、慢性精神分裂症，特别适合于急性青春型和伴有敌对情绪及攻击行动的偏执型精神分裂症［2］，亦可用于对吩噻嗪类治疗无效的其他类型或慢性精神分裂症［3］。有时被违法添加到动物养殖过程中［4］，由于其有镇静、催眠作用，会降低动物对外界刺激的反应［5］，过度镇静作用会使动物反应迟钝、面部表情呆板等诸多不良反应，严重者会威胁到动物或人的生命安全［6］。因此，动物源性组织中氯丙嗪残留的检测则非常重要，而关于氯丙嗪检测方法的研究却鲜有报道。本试验是在碱性条件下，用无水乙醚提取猪肉中的氯丙嗪残留物［7］，吹干后用流动相复溶，上机测定。

1　主要仪器设备与试剂

所用仪器为：液相色谱串联质谱联用仪Waters AcQuity UPLC/XoVo TQMS，百位电子天平，离心机，氮吹仪，水浴摇床。

主要试剂：氯丙嗪标准物质（Sigma公司），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），无水乙醚，氢氧化钠，乙酸，乙酸铵缓冲溶液，滤膜（津腾：0.22 μm，有机相），二次蒸馏水等。

2　试验方法

称取2.00g样品于50 mL离心管中，加入200 μL乙腈，涡旋混合60 s，混合后加入400 μL 5 moL/L的氢氧化钠溶液，再涡旋混合60 s。80℃水浴中放置1 h。在此期间，每个样品均进行两次涡流混合。1 h后，将样品从水浴中取出并冷却至室温。加入5 mL无水乙醚，涡旋混合30 s，充分振荡15 min，取出，7 000 r/min离心5 min。移取上层上清液。重复提取一次，合并上清液。45℃水浴氮吹仪氮气吹干。用1.00 mL流动相（5 mmoL/L乙酸铵+乙腈）溶解定容，充分涡旋混合，过0.22 μm有机相滤膜，上机测定。

3　上机测定

液相色谱及质谱条件：

色 谱 柱：ACQUITYUPLC BEH C18（1.7 μm，3.0mm×100mm）或相当者；

柱温：40℃；

流动相：5 mmoL/L乙酸铵+乙腈（55+45）；流动相梯度条件见表1。

流速：0.300 mL/min；

进样量：5.0 μL；

离子源：电喷雾离子源；

扫描方式：负离子扫描；

检测方式：多反应监测（MRM）；

电喷雾电压：-1 750 V；

辅助气温度：500℃；

定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压及碰撞能量见表2。

4　结果与分析

4.1线性试验

按方法条件设置仪器参数，在空白样品中添加一系列浓度的标准溶液（0.50 μg/L、1.00 μg/L、2.00 μg/L、4.00 μg/L、8.00 μg/L，上机浓度），按照方法进行前处理后，待仪器稳定后，进行上机测定，绘制标准曲线，其相关系数r=0.994 754。

4.2方法检出限确定

取空白猪肉样品，添加浓度为0.250 μg/kg，按照上述方法全过程进行预处理和测定，平行样品n=7，根据各样品检测值（0.198 μg/kg、0.205 μg/kg、0.208 μg/kg、0.207 μg/kg、0.222 μg/kg、0.188 μg/kg、0.183 μg/kg），计算出平均值X（0.202 μg/kg）及标准偏差Sb（0.013 18），当被分析物的回收率在70％～120％之间时，可计算检出限为0.048 5 μg/kg。计算公式如下：

检出限（MDL）=（k×Sb×C）/X

其中：k为置信因子，一般取3。

4.3方法精密度和回收率实验

以空白猪肉样品为基质，进行加标回收试验，加标浓度分别为0.500 μg/kg、1.25 μg/kg、3.00 μg/kg。将加标样品和空白样品按方法进行前处理，上机测试，结果见表3、表4和表5。

5　结论

经过上述实验验证，本方法适用于猪肾和肌肉组织中氯丙嗪残留的测定，一系列浓度的标准样品溶液0.50 μg/L、1.00 μg/L、2.00 μg/L、4.00 μg/L和8.00 μg/L的标准曲线相关系数r=0.994 754；经测定方法检出限确定为0.048 5 μg/kg，符合标准方法的要求；0.500 μg/kg、1.250 μg/kg、3.000 μg/kg加标试验变异系数分别为9.57％、10.15％、3.51％，加标试验回收率范围分别为83.80％～106.80％、77.60％～98.40％、90.66％～98.66％。方法验证结果满足SN/T 0001-93的要求，具有较好的精密度和准确度；人员检测能力满足实际检测工作的需要。

本试验方法前处理过程简便、快捷、易操作，UPLC-MS-MS及流动相梯度等一系列的条件设置合理，经UPLC-MS-MS打碎后的定性定量离子辨识度高，有较高的响应，测得检出限可满足检测需求，验证结果具有较好的精密度和准确度，可用于猪肉中氟哌啶醇残留检测。

［1］司天梅，舒良，于欣，等.10省市抗精神病药使用现况的调查［J］.中华精神科杂志，2004，37（3）：152-155.

［2］Pae C.U.，Lim T.S.，et al..Naturalistic observation on the hepatic enzyme change in patiens treated with either rispenidone or olanzapine alone［J］.Int.Clin.Psychophamachol，2005，20（3）：173-176.

［3］Wishing D.A..Schizophrenia and obesity；impact of antipshotic medications［J］.J.Clin Psychiatry，2004，65（Suppl 18）：13-26.

［4］Rosenheck R.，Perlick D.，Bingham S.，et al..Effectiveness and cost of olanzapine and haloperidol in the treatment of schizophrenia：a randomized controlled tried［J］.JAMA，2003，290（20）：2693-2072.

［5］李乐华，赵靖平，房茂胜，等.齐拉西酮与氟哌啶醇治疗精神分裂症随机双盲双模拟多中心对照研究［J］.中国新药与临床杂志，2006，26（5）：335-338.

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［7］GB/T 20763-2006.猪肾和肌肉组织中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆、阿扎哌醇、咔唑心安残留量的测定 液相色谱-串联质谱法［S］.北京：中国标准出版社，2006.

［8］GB/T 27404-2008.实验室质量控制规范 食品理化检测［S］.北京：中国标准出版社，2008.

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1001-0769（2016）08-0068-03