类风湿关节炎外周血TLR4表达及其与IL-37水平的相关性

万丽丽，王晓东，慈春增

1.潍坊医学院临床医学院，山东潍坊 261042；2.潍坊医学院附属医院免疫风湿科，山东潍坊 261042

类风湿关节炎外周血TLR4表达及其与IL-37水平的相关性

万丽丽1，王晓东2，慈春增2

1.潍坊医学院临床医学院，山东潍坊 261042；2.潍坊医学院附属医院免疫风湿科，山东潍坊 261042

目的 研究类风湿关节炎（RA）外周血Toll样受体4（TLR4）表达水平，并观察其与白介素-37（IL-37）的相关性。方法 选取2015年5月—2016年5月潍坊医学院附属医院收治的45例RA患者为研究组，另选取同期骨21例关节炎患者为骨关节炎组，健康体检者21名为对照组，应用流式细胞仪检测入选者外周血TLR4表达，并观察其与IL-37水平相关性。 结果 研究组TLR4阳性率和IL-37水平为（28.43±3.21）%和（78.56±8.97）ng/L，均显著高于骨关节炎组的（10.21±4.32）%、（17.25±5.68）ng/L和对照组的（13.08±2.05）%、（10.08±2.56）ng/L，比较差异具有统计学意义（P＜0.05），骨关节炎组和对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；相关性分析显示：TLR4阳性率与IL-37水平呈正相关关系。结论 RA患者外周血TLR4表达上调，且与IL-37水平呈正相关关系。

类风湿关节炎；Toll样受体4；白介素-37

类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一种全身性自身免疫病，以对称性、多关节慢性破坏为主。RA与遗传、环境及多因素存在相关性，但是迄今发病机制尚不确切[1]。Toll样受体（toll-like receptor，TLR）是一种跨膜蛋白，其在RA发病中的作用越来越受重视。Toll样受体4（tolllike receptor-4，TLR4）是被首先发现的TLR，能识别病原体相关模式分子来激活机体免疫系统，启动一系列信号传导通路，产生炎性因子[2]。白介素-37（Interleukin-37，IL-37）是一种抗炎性细胞因子，能抑制过度炎性反应，起到保护作用[3]。该研究旨在分析2015年5月—2016年5月潍坊医学院附属医院免疫风湿科收治的45例RA患者外周血TLR4表达水平，并观察其与IL-37的相关性，为临床诊疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年5月—2016年5月该院免疫风湿科收治的45例RA患者为研究组，所有患者均符合RA的诊断标准[4]，经疾病活动评分显示病情活动，并排除细菌、病毒感染。男性10例，女性35例，年龄35～70岁，平均年龄（41.3±2.1）岁，均另选取同期骨关节炎患者21例为骨关节炎组，男性5例，女性16例，年龄34～70岁，平均年龄（40.8±1.3）岁，健康体检者21名为对照组，男性6名，女性15名，年龄35～70岁，平均年龄（41.2±2.3）岁，3组入选者年龄和性别比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

抽取3组入选者空腹清晨静脉血约4 mL，将其放置于抗凝管中，应用流式细胞仪检测TLR4表达阳性情况，应用酶联免疫吸附法 （Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清中IL-37表达水平。流失细胞检测应用荧光标记单克隆抗体为抗人CD14-FITC、抗人TLR4-PE，ELISA试剂盒为IL-37试剂盒。

1.3 观察指标

观察各组外周血TLR4阳性率和IL-37水平，并分析TLR4阳性率与IL-37水平的相关性。

1.4 统计方法

应用SPSS 17.0统计学软件分析和处理数据，计量资料用（±s）表示，应用t检验，应用Pearson相关分析TLR4阳性率与IL-37水平的相关性，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 研究组和骨关节炎组比较

研究组TLR4阳性率和IL-37水平均显著高于骨关节炎组，比较差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 研究组和骨关节炎比较（±s）

表1 研究组和骨关节炎比较（±s）

组别TLR4阳性率（%） IL-37（ng/L）研究组（n=45）骨关节炎组（n=21）tP 28.43±3.21 10.21±4.32 5.023 0.021 78.56±8.97 17.25±5.68 7.937 0.015

2.2 各组比较

研究组TLR4阳性率和IL-37水平均显著高于对照组，比较差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。同时，比较了表1和表2中骨关节炎组和对照组TLR4阳性率和IL-37水平的差异，结果显示两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

表2 研究组和对照组比较（±s）

表2 研究组和对照组比较（±s）

组别TLR4阳性率（%） IL-37（ng/L）研究组（n=45）对照组（n=21）tP 28.43±3.21 13.08±2.05 4.984 0.024 78.56±8.97 10.08±2.56 8.015 0.011

2.3 相关性分析

Pearson相关性分析显示TLR4阳性率与IL-37水平呈正相关关系（r=0.805，P＜0.05），见图1。

图1 RA患者IL-37（ng/L）与7LR4（%）相关性

3 讨论

RA属于自身免疫性疾病，免疫功能异常是引起RA的主要发病机制。滑膜炎是RA的基本病理改变，而炎症反应发挥重要作用。虽有研究证实，RA是在抗原的驱动下，由多因素共同参与引起，但是至今仍不明确。早期研究多致力于T、B细胞的研究，试图探讨T细胞及B细胞在RA免疫反应中的作用[5]。近年来，TLR逐渐被学者所重视，其在RA发生和发展中发挥一定作用。TLR能连接天然和获得性免疫危险信号，可以促进炎性因子受体表达[6]。当机体发生感染、免疫紊乱时，TLR可以分子模拟、表位扩散、模糊识别等引起免疫紊乱，使大量炎性因子产生，参与炎性反应，介导RA发生和发展过程。TLR4是目前研究最广泛的TLR受体，主要识别细菌脂多糖，然后再CD14协助下调控炎性反应。已有研究证实[7]，TLR4会于RA淋巴细胞和滑膜纤维母细胞的表面高表达。

IL-37主要由12条β链构成，结构与白介素-18具有相似性，存在5种不同异构体，其中IL-37b结构最大，是主要表达的功能单位。IL-37也是先天性炎症免疫抑制剂，可以抑制促炎因子的信号通路，抑制STATs1-4磷酸化，进而削弱炎症作用，对炎症反应具有抑制作用；IL-37还可以与SMAD3形成复合物，对STAT1及STAT3具有拮抗作用，起到抑制炎症反应作用。有研究显示[8-9]，IL-37能有效抑制肿瘤坏死因子α，抑制中性粒细胞活化，降低肝细胞分泌促炎性因子和趋化因子，也会减少对肝细胞的损伤，进而形成良性循环。该研究显示，研究组TLR4阳性率和IL-37水平为（28.43±3.21）%和（78.56±8.97）ng/L，均显著高于骨关节炎组的（10.21±4.32）%、（17.25±5.68）ng/ L和对照组的（13.08±2.05）%、（10.08±2.56）ng/L，与姚茹冰等[9]，杨超等人[10]研究结果具有相似性，姚茹冰研究显示RA组TLR4表达明显高于健康对照组，杨超等人研究显示，RA组治疗前IL-37为 （244.31±50.42）ng/L明显高于对照组的（14.35±8.18）ng/L，说明RA患者会出现TLR4表达上调，IL-37表达水平也会升高，分析其原因：RA发病与免疫紊乱存在较大关系，免疫紊乱会刺激TLR4表达上调，进而促进炎性反应发生；IL-37能抑制炎性反应，而RA患者机体存在较高炎性反应，会刺激IL-37表达升高来抑制炎性反应。不同炎性因子刺激IL-37水平升高，但是不同细胞及组织具体诱导机制尚不确切，有待进一步解决。但IL-37和炎症因子均参与RA的发生和发展，并能通过抑制炎性因子来发挥保护机制，提示临床上可以通过提高IL-37水平来治疗RA。该研究还发现，TLR4阳性率与IL-37水平呈正相关关系，分析其原因为：RA患者会出现TLR4表达上调，且在炎性因子的刺激下，TLR4信号通路会反复激活，刺激炎性因子表达升高，IL-37是炎症因子的抑制剂，可以代偿性的因炎症因子增加而增加，IL-37介导负反馈调节来降低RA患者过度炎性反应，因此TLR4阳性率与IL-37水平呈正相关关系。

综上所述，RA患者外周血中会出现TLR4阳性率高表达，也会出现IL-37水平表达升高，IL-37水平升高对患者具有一定保护作用，TLR4与IL-37存在正相关关系。

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Expression of TLR4 in Peripheral Blood of Patients with Rheumatoid Arthritis and Its Correlation with IL-37 Level

WAN Li-li1，WANG Xiao-dong2，CI Chun-zeng2
1.Weifang Medical University,Clinical Medicine College，Weifang,Shandong Province,261042 China；2.Affiliated Hospital of Weifang Medical University,Immune Department of rheumatism,Weifang,Shandong Province,261042 China

Objective To study the expression level of Toll like receptor 4(TLR4)in peripheral blood in rheumatoid arthritis(RA),and to observe the interleukin-37 (IL-37)correlation.Methods 45 patients with RA who were admitted to affiliated Hospital of Weifang Medical University from May 2015 to May 2016 were selected as the study group,another 21 patients with osteoarthritis of the same period were selected as osteoarthritis group,21 cases of healthy persons were as control group,the expression of TLR4 in peripheral blood was detected by flow cytometry,and to observe the correlation between the level of IL-37 and the level of.Results The positive rate of TLR4 and the level of IL-37 in the study group were（28.43±3.21）%and（78.56±8.97）ng/L,they were significantly higher than（10.21±4.32）%,（17.25±5.68）ng/L in the osteoarthritis group and（13.08±2.05）%,（10.08±2.56）ng/L in the control group,the difference was statistically significant(P＜0.05),there was no significant difference between the osteoarthritis group and the control group(P＞0.05);Correlation analysis showed that:the positive rate of TLR4 was positively correlated with IL-37 level.Conclusion TLR4 expression in peripheral blood of patients with RA are up regulation,and it is positively correlated with the level of IL-37.

Rheumatoid arthritis;Toll like receptor 4;Interleukin-37

R36

A doi 10.11966/j.issn.2095-994X.2016.02.04.08

2016-10-21；

2016-11-25

万丽丽（1989.8-），女，山东临沂人，硕士，研究方向：风湿病学。

慈春增（1962.4-），男，山东潍坊人，本科，主任医师，研究方向：风湿病学，E-mail：986779932@qq.com。