不同土壤条件下怀牛膝质量评价△

杜真辉，董诚明，2*，夏伟，魏硕

(1.河南中医学院药学院，河南 郑州 450000；2.呼吸疾病河南省协同创新中心，河南 郑州 450000)

不同土壤条件下怀牛膝质量评价△

杜真辉1，董诚明1，2*，夏伟1，魏硕1

(1.河南中医学院药学院，河南 郑州450000；2.呼吸疾病河南省协同创新中心，河南 郑州450000)

目的：评价3种不同土壤条件下怀牛膝的质量。方法：对垆土地、沙土地、黏土地栽培的牛膝，进行水分、灰分、外观性状、醇溶性浸出物、β-蜕皮甾酮和牛膝多糖的比较分析。结果：3种不同土壤条件下牛膝的水分、灰分、醇溶性浸出物均符合药典规定；经变异系数权重法分析，品质为垆土地>沙土地>黏土地。结论：怀牛膝栽培以垆土地为宜。

怀牛膝；变异系数权重法；不同土壤条件；质量评价

牛膝即苋科牛膝属植物牛膝AchyeanthesbidentataBI.的干燥根，为著名的四大怀药之一，具有逐瘀通经、补肝肾、强筋骨、利尿通淋等功效，临床用于经闭、痛经、腰膝酸痛等症[1]。现代研究表明，牛膝根含有二萜皂苷、甾体类、糖类等化合物，并含有钾盐及多种微量元素[2]，其中，研究较多的生理活性物质为牛膝甾酮和牛膝多糖，牛膝甾酮具有促进蛋白质的合成、抑制由药物引起的血糖升高、降低胆固醇以及使受损的细胞再生等作用[3]；牛膝多糖具有提高肌体免疫功能、抑制肿瘤生长及抗衰老等多种生理活性[4]。

河南焦作的武陟、温县、沁阳等地位于太行山脚下，南临黄河，北依沁河，为怀牛膝的主产地，由于其地理位置的特殊性，土地可以分为临近黄河的沙土地和临近太行山的垆土地[5]，两者均为怀牛膝的主要栽培土壤。

有研究表明，近几年山东、江苏、辽宁、安徽、山西、河北等省引种栽培怀牛膝，但蜕皮甾酮含量较低[6]，河南省内也有部分市区尝试引种栽培怀牛膝。河南禹州为禹白芷、南星、漏芦等药材的道地产区，气温温和，土层深厚，多属黏土[7]，近年有怀牛膝的引种栽培，但未见有相关质量研究。本实验就上述三种不同土壤条件下怀牛膝的质量进行科学评价，以指导怀牛膝的规范化生产。

1 材料与方法

1.1试验材料

采自河南温县的垆土地栽培牛膝(编号1)、沙土地栽培牛膝(编号2)、采自河南禹州的黏土地栽培牛膝(编号3)。以上样品经河南中医学院董诚明教授鉴别为牛膝AchyeanthesbidentataBI.。

1.2方法

1.2.1外观性状检测 使用直尺测定根长，使用游标卡尺测定根粗。

1.2.2水分、灰分、醇溶性浸出物、β-蜕皮甾酮测定 按照《中华人民共和国药典》2010版规定方法进行检测。

β-蜕皮甾酮标准曲线的绘制：分别吸取浓度为32μg·mL-1的β-蜕皮甾酮的对照品溶液2.5、5、7.5、10、12.5μL，注入高效液相，以峰面积对进样量进行线性回归，得到回归方为：Y=2.6E+5X-92769；r=0.9996。

1.2.3多糖的提取及测定 牛膝多糖标曲的绘制：标准葡萄糖溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL，分别加水补足2mL，加入6%苯酚溶液1mL，迅速加入5mL浓硫酸混匀，静置10min，在490nm条件下进行测量，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，做标准曲线，得出回归方程为：Y=2.7315X；r=0.9997。

样品的制备及测定：取干燥的牛膝粉末10g，按照1∶10的比列加入80%乙醇，采用加热回流法提取2次，每次1h，滤渣加热挥干乙醇后，用40倍水分三次(20倍+10倍+10倍)回流提取，分别提取1.5h、0.5h、0.5h，合并滤液，浓缩。浓缩液中加入95%乙醇至含醇量达到80%，边加边搅拌，得灰白色沉淀。静置12h后离心分离沉淀，取固体部分再重复溶解、沉淀、离心分离操作至乙醇液澄清无色为止。沉淀以少许蒸馏水溶解，使用Sevag法除蛋白3次。收集清液，再加入4倍乙醇醇析，至4℃条件下静置12h，沉淀加95%洗涤两次，得牛膝粗多糖[8]。牛膝多糖的测定，采用硫酸-苯酚比色法测定[9]。

2 结果与分析

2.1牛膝外观性状及水分、灰分

经测定3种不同土壤条件下牛膝的根长、根粗、水分、灰分及醇溶性浸出物结果如下：

表1 不同土壤条件下牛膝的根长、根粗、水分、灰分及醇溶性浸出物

3种不同土壤条件下的牛膝，根呈细长圆柱形，多弯曲，上端较粗，下端较细，温县牛膝多呈现灰黄色，少见淡棕色，禹州牛膝多呈现淡棕色，均有稀疏的侧根痕，横长皮孔突起，质坚硬，易折断，断面平坦，淡棕色或黄棕色，微呈角质样，中心木质部黄白色，外周散在黄白色点状维管束，排列为轮状，多为3轮，偶见2轮或4轮，由表1可知，引种禹州栽培牛膝的根长与根粗均显著低于原产地。

根据《中华人民共和国药典》2010版规定，牛膝药材的水分不超过15.0%，总灰分不超过9.0%，浸出物不少于6.5%。由表1可知，3种不同土壤条件下的牛膝均符合药典规定。

2.2变异系数权重法评定牛膝质量

2.2.1指标成分的测定结果β-蜕皮甾酮含量与多糖含量的结果如表2所示，以两者为指标性成分，运用变异系数权重法对3种不同土壤条件下怀牛膝质量进行评价[10]。

表2 β-蜕皮甾酮、多糖含量 (%)

2.2.2 变异系数权重法评价 变异系数法能够避免因单位不同或者均数不同对评价指标变异程度的影响，在不同的土壤条件中，某指标Xi取值差异越大，则该指标的可变性较大，较难实现，从而更能反映被评价对象的水准。

权重是指各个评价指标在整个指标体系中的权数，直接影响最终的评价结果，目前很多的指标权重是依靠专家的主观判断，结果不能得到客观的反映。本文使用变异系数权重法，能够直接利用指标信息求得权重，尽可能消除人为主观影响，使权重更加切合实际情况，更加准确地评价3种不同栽培模式牛膝的质量。

变异系数权重法的具体步骤如下：

②计算第i项评价指标的标准差

③计算第i项评价指标的均值

④权重的确定

⑤综合得分Wi=Xi×Ai

按照以上公式，计算可得结果如表3所示。

表3 指标计算结果

根据表3计算出的权重Ai，带入⑤项下的公式可以计算出不同土壤条件下的综合得分：

表4 综合得分及排名

由表4可以看出，垆土地栽培下的牛膝质量较优，黏土地栽培牛膝质量较差。

3 讨论

温县怀牛膝生长土壤主要为黄河、沁河冲积沉积物，其特殊的气候条件与地貌组合等生态环境，使其成为怀牛膝的道地产区之一。垆土地养分与水分适中，适合怀牛膝的生长，与朱鲁等人研究相一致[11]。沙土地土质轻，沙性重，养分缺乏，水分保留时间短，其品质次于垆土地栽培；黏土地质地较重，养分含量高，但土壤通透性较差，水分不易流失，不利于牛膝的生长，所得牛膝品质较差。综上所述，牛膝栽培土壤以垆土地为佳。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].中国医药科技出版社，2010：72.

[2] 韩紫岩，牛艳阳.牛膝的研究概况[J].中国药业，2007，16(15)：65.

[3] 周军.牛膝中化学成分和药理作用研究进展[J].天津药学，2009，21(3)：66.

[4] 时春秋，周永达，张剑波，等.牛膝多糖研究进展[J].中国新药杂志，2006，15(16)：1330-1332.

[5] 张庆岭.垆土铁棍山药与沙土铁棍山药的性状比较[J].中医临床研究，2012，4(21)：34.

[6] 张翠英，梁生旺，张广强.不同产地牛膝中蜕皮甾酮的含量[J].中国药学杂志，2001，36(10)：399-700.

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[9] 董群，邓丽伊，方积年，等.改良的苯酚-硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究[J].中国药学杂志，1996，31(9)：550-553.

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[11] 朱鲁，席新顺.怀牛膝生长的土壤基础及优质丰产规范化栽培技术[J].河南农业，2004(10)：22.

QualityAssessmentforAchyrantheswithDifferentSoilCondition

DUZhenhui1，DONGChengmin1，2*，XIAWei1，WEIShuo1

(1.HenanUniversityofTCMCollegeofMedicine，Zhengzhou450000；2.RespiratorydiseasesinHenanprovinceCollaborativeInnovationCenter，Zhengzhou450000，China)

Objective：To evaluate the quality ofAchyranthesbidentatain3different soil condition.Methods：The comparative analysis of moisture，ash，content ethanol-soluble extractives，β-ecdysone andpolysaccharides ofA.bidentatawere carried out in different soil condition，including loessial soil cultivation，sand land cultivation，viscosity land cultivation.Results：The moisture and ash content ofA.bidentata，from3different cultivation models，were up to specification of the Chinese pharmacopoeia.The artificial loessial soil cultivation was proved to bebetter andmechanical loessial soil cultivationwas proved to be worse according to the method of weighted mean and the principal component analysis.Conclusion：In the progress of cultivation ofA.bidentata，selecting the artificial loessial soil cultivation is appropriate and the artificial loessial soil cultivation ofA.bidentatestill needs further standardized research.

Achyranthesbidentata；weighted mean and the principal component analysis；different soil condition；quality evaluation

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.017

2015-12-23)

河南省科技厅(14204428)

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董诚明，教授，研究方向：主要从事中药资源的开发利用；Tel：(0371)65680041，Email：dcm371@hactcm.edu.cn