金银花中有机磷类农药测定方法建立及残留状况调查△

顾炎，薛健，金红宇，马双成

(1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193；2.中国食品药品检定研究院，北京 100050)

金银花中有机磷类农药测定方法建立及残留状况调查△

顾炎1，薛健1，金红宇2，马双成2

(1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京100193；2.中国食品药品检定研究院，北京100050)

目的：了解金银花中有机磷农药的残留状况，并在此基础上提出具有针对性的监管建议。方法：建立了GC-FPD同时测定54种有机磷类农药的方法，并对60个批次的金银花样品进行测定，对测定结果进行分析。结果：60个批次的样品共有23个检出含有有机磷类农药；方法涉及的54种有机磷类农药，共检出敌敌畏、马拉硫磷、毒死蜱和水胺硫磷4种。检出率最高的为毒死蜱(38.3%)，其余的3种农药均只有个别样品有检出。毒死蜱的检出浓度也相对较高。结论：金银花中多数有机磷类农药的总体检出率不高，但毒死蜱检出率较高，且检出浓度也相对较大，需要重点监控。

金银花；有机磷农药；中药材；残留状况；GC-FPD

有机磷农药是一类高毒杀虫剂，目前该类农药中毒已成为严重的健康问题之一，每年导致的死亡人数约20万[1]。但是由于其具有廉价、高效以及低生物累积性等优点，仍有不少种类被广泛应用[2]。为保障安全，该类农药的使用规范和残留控制显得尤为重要。

金银花种植过程中虫害严重，有机磷类杀虫剂的使用较为普遍，近年来金银花农药残留测定的报道中也时有该类农药检出[3-5]。但是，目前大部分报道中涉及的样品量都比较少，对金银花中有机磷类农药的残留状况很难有全面的认识。为进一步了解金银花中有机磷农药的残留状况，本研究建立了测定金银花中54种有机磷农药的方法，对金银花中有机磷类农药残留状况进行了调查分析，并在此基础上提出具有针对性的监管建议。

1 仪器与材料

1.1仪器

6890型气相色谱分析仪(配备火焰光度检测器)(美国Agilent公司)、HP-5(30m×0.32mm，0.25μm)色谱柱(美国Agilent公司)、自动进样器G4513A(美国Agilent公司)、PL203/01型电子天平(瑞士梅特勒公司)、WH-1型涡旋混合仪(上海沪西分析仪器厂)、LABOROTA4000/4型旋转蒸发器(德国海道夫公司)、Feb-80型离心沉淀器(金坛市医疗仪器厂)、SGK-5LB型低噪音空气泵(北京东方精华苑科技有限公司)。

1.2试剂

分析纯乙腈、甲苯(北京化工厂)；色谱纯丙酮(FisherScientific)；甲胺磷、敌敌畏、敌百虫、速灭磷、虫螨畏、灭线磷、治暝磷、甲拌磷、甲基乙拌磷、巴胺磷、特丁硫磷、内吸磷、杀螟腈、地虫硫磷、甲基对氧磷、氯唑磷、乙嘧硫磷、除线磷、甲基毒死蜱、甲基对硫磷、甲基立枯磷、对氧磷、皮蝇磷、杀螟松、马拉硫磷、倍硫磷、毒死蜱、对硫磷、水胺硫磷、溴硫磷、嘧啶磷、异柳磷、稻丰散、喹硫磷、杀扑磷、乙基溴硫磷、杀虫畏、苯线磷、碘硫磷、丙溴磷、虫螨磷、.丰索磷、乙硫磷、三唑磷、三硫磷、敌瘟磷、哒嗪硫磷、亚胺硫磷、苯硫磷、伏杀磷 、谷硫磷、硫丙磷、乙基谷硫磷、蝇毒磷标准品(100μg·mL-1，农业部环保所)；石墨化碳/氨基固相萃取柱[500mg，500mg·(6mL)-1，SUPELCO]。

1.3样品

金银花样品信息及对应序号如表1所示。

表1 金银花样品信息

注：“/”表示产地不确定。

2 方法

2.1标准品溶液配制

取54种农药浓度为100μg·mL-1标准品各0.5mL，置于50mL容量瓶中，加丙酮定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为1000ng·mL-1的混合标准储备溶液。精密量取混合标准储备液适量，用空白提取液定量稀释至所需浓度，摇匀，即得工作农药基质添加标准品溶液。

2.2样品制备

样品粉碎，过三号筛。准确称定1.0g金银花样品于10mL具塞试管中，加入乙腈5mL，涡旋提取5min，3500r·min-1离心15min，取出上清液于梨形瓶中，再用乙腈5mL提取一次，合并提取液，减压浓缩至约1mL。

固定好石墨化碳/氨基固相萃取柱，用5mL乙腈-甲苯(3∶1)溶液预淋洗，当液面到达柱面顶部时，将上述浓缩液加入柱中，用1mL左右乙腈洗涤3次，洗涤液加入固相萃取柱。用20mL乙腈-甲苯(3∶1)溶液洗脱，梨形瓶收集淋洗液，减压浓缩至近干，取出到刻度试管中，加丙酮定容至1mL，进入GC-FPD进行分析。

2.3仪器条件

色谱柱：HP-5(30m×0.32mm，0.25μm)，DB-1701(30m×0.32mm，0.25μm)辅助定性；进样口温度：250℃，不分流进样。检测器温度：250℃，氢气流量：75mL·min-1，空气流量：60mL·min-1；载气为氮气，恒定压力：6.71psi，进样量1μL。升温程序：初始温度100℃，以5℃·min-1升到190℃，以2℃·min-1升到200℃，以10℃·min-1升到250℃，保持14min。该条件下分离效果最好，1μg·mL-1对照品气相HP-5及DB-1701柱色谱图如图1所示。

2.4方法学考察

2.4.1线性关系 取1000ng·mL-154种有机磷类农药混合标准品储备液，分别配制出50、100、200、500、1000ng·mL-1的基质添加标准溶液，进行GC-FPD的测定。进样后绘制标准曲线，以峰面积为纵坐标，试样浓度(ng·mL-1)为横坐标，进行回归计算。

2.4.2精密度和灵敏度 取200ng·mL-1基质添加标准溶液重复进样6次，测得各农药的RSD值。根据各农药的信噪比，以信噪比(S/N)为3测得54种农药检出限(LOD)；以信噪比(S/N)为10测得方法的定量限。

2.4.3加样回收试验 准确称取金银花样品1.0g，分别添加0.1、0.4、1mL质量浓度为500ng·mL-1的农药对照品溶液，挥干溶剂，制成50、200、500ng·g-13个添加水平样品(每个水平3个平行)，按照2.2、2.3中的步骤进行测定。样品本底色谱图如图1所示，加样回收结果如表2所示。

2.5样品测定

按照2.2、2.3中的步骤，对60份样品进行测定。并对阳性结果进行GC-MS确认。

注：A.对照品 HP-5色谱图；B.对照品DB-1701色谱图；C.样品本底图；1.甲胺磷 2.敌敌畏 3.敌百虫 4.速灭磷 5.虫螨畏 6.灭线磷 7.治暝磷 8.甲拌磷 9.甲基乙拌磷 10.巴胺磷 11.特丁硫磷 12.内吸磷 13.杀螟腈 14.地虫硫磷15.甲基对氧磷16.氯唑磷17.乙嘧硫磷18.除线磷19.甲基毒死蜱 20.甲基对硫磷21.甲基立枯磷22.对氧磷 23.皮蝇磷24.杀螟松25.马拉硫磷26.倍硫磷27.毒死蜱 28.对硫磷29水胺硫磷30.溴硫磷31.嘧啶磷32.异柳磷33.稻丰散 34.喹硫磷35.杀扑磷36.乙基溴硫磷37.杀虫畏38苯线磷39.碘硫磷40.丙溴磷41.虫螨磷42.丰索磷43.乙硫磷44.三唑磷45.三硫磷46.敌瘟磷47.哒嗪硫磷48.亚胺硫磷49.苯硫磷50.伏杀磷 51.谷硫磷52.硫丙磷53.乙基谷硫磷54.蝇毒磷。图1 1 μg·mL-1 54种有机磷类农药对照品HP-5/DB-1701色谱图与样品本底色谱图

农药名称50ng·g-1200ng·g-1500ng·g-1回收率RSD回收率RSD回收率RSD甲胺磷78.36.789.92.878.33.8敌敌畏67.34.071.20.762.93.8敌百虫92.65.988.57.089.72.1速灭磷69.37.292.12.689.23.3虫螨畏96.73.189.52.891.62.1灭线磷97.26.892.22.890.93.1治暝磷98.110.891.03.792.41.5甲拌磷95.48.285.55.789.51.3甲基乙拌磷86.99.770.29.981.51.7巴胺磷+特丁硫磷97.511.590.64.591.41.7内吸磷+杀螟腈97.711.891.23.493.01.4地虫硫磷93.412.291.53.592.21.7甲基对氧磷93.09.992.65.790.53.3氯唑磷93.512.593.04.293.71.6乙嘧硫磷98.28.292.15.491.40.8除线磷103.513.990.23.392.41.5甲基毒死蜱+甲基对硫磷96.611.292.34.992.91.6甲基立枯磷97.48.293.64.793.22.5对氧磷+皮蝇磷100.29.092.64.792.52.0杀螟松96.11.694.02.792.71.7马拉硫磷98.86.996.33.892.51.4倍硫磷89.49.087.27.291.81.1毒死蜱+对硫磷99.412.793.93.991.81.5水胺硫磷98.711.091.73.193.11.9溴硫磷91.89.492.12.393.02.1嘧啶磷97.713.092.82.592.41.7异柳磷100.28.391.95.690.71.8稻丰散+喹硫磷98.313.191.83.592.31.9杀扑磷94.410.890.63.292.91.5乙基溴硫磷94.67.091.92.991.42.0杀虫畏107.26.794.83.890.42.4苯线磷89.910.087.59.089.24.2碘硫磷102.714.390.24.989.51.6丙溴磷92.86.691.87.189.30.5虫螨磷98.714.495.03.694.11.9丰索磷96.910.791.04.893.01.4乙硫磷96.59.490.03.592.81.5三唑磷99.08.790.83.895.91.7三硫磷90.814.090.93.397.51.9敌瘟磷93.19.689.30.392.83.4哒嗪硫磷101.410.588.71.392.33.2亚胺硫磷93.47.088.66.491.50.3苯硫磷91.210.489.72.891.71.6伏杀磷+谷硫磷100.49.989.52.592.51.5硫丙磷107.38.6103.02.193.04.1乙基谷硫磷86.47.779.97.593.22.1蝇毒磷97.14.8101.62.492.01.4

3 结果与讨论

3.1测定方法的适用性

本研究建立的测定方法选择乙腈作为提取溶剂，主要是考虑到乙腈对有机磷类农药溶解性良好[6]，且对色素等成分溶出少，可以减小净化的难度。提取方式选择涡旋提取离心分离，不仅耗费的溶剂量少，且缩短了前处理时间，降低了花费的同时，也提高了测定效率。为了简化测定，样品净化则采用操作简便、且适用性广的固相萃取法，考虑到有机磷极性以及金银花色素含量较高的特点，选择了石墨化碳-氨基固相萃取柱[7-8]。

本方法涉及的多数农药种类在50～500ng·mL-1线性良好，定量限小于50ng·mL-1，精密度(以RSD计)均小于5%。50、200、500ng·g-13个添加水平的平均回收率分别为94.8%、90.6%、90.9%，RSD均小于15%，且整个方法操作便捷、耗时较短，适用于金银花中有机磷类农药的残留测定，符合本研究对测定方法的需求。

3.2金银花有机磷农药残留状况

河南和山东不仅是金银花的道地产区，也是金银花的主产地，根据中药材天地网给出的数据，2015年这两个地区金银花产量占到全国总产量一半以上[9]，从市场上购买的金银花产地也主要集中在这两个地区。

60个批次的样品共有23个检出含有有机磷类农药，其中1个批次样品同时检出3种，3个检出2种，其余均只检出1种。方法涉及的54种有机磷类农药，共检出敌敌畏、马拉硫磷、毒死蜱和水胺硫磷4种，检出的最大值分别为0.353、0.383、0.504、0.031μg·g-1。检出率最高的为毒死蜱(38.3%)，其余的3种农药均只有个别样品有检出。被检出的4种有机磷农药，马拉硫磷为低毒，毒死蜱和敌敌畏为中毒，而水胺硫磷为高毒[10]。其中毒性最高的水胺硫磷仅有1个样品有检出，且检出浓度较低。而检出率高的毒死蜱，其检出浓度也相对较高。

3.3金银花有机磷农药监管建议

根据农业部1586号和2032号公告，水胺硫磷和毒死蜱分别在柑橘和蔬菜上禁止使用，但在中药材上的使用均未有明确的限制。与之相对的，这4种农药都未在金银花上进行登记，也没有在金银花上的安全使用研究报道。样品中有检出的种类，很大可能是在金银花的实际生产过程中有使用的。为确保使用安全，有必要对这4种有机磷类农药在金银花上的残留动态等进行研究，并在研究基础上给出安全使用建议。

此外，目前国内尚未有这几种农药在中药材上的最大残留限量的规定，而没有明确限量规定对实际监控是极大的阻碍。因此，农药在中药材上的最大残留限量标准的制定十分迫切。对金银花而言，尤其是检出率和检出浓度都比较高的毒死蜱，更是标准制定工作中需要优先考虑的。

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MethodofDeterminationforOrganophosphorusPesticidesandResiduesInvestigateinHoneysuckle

GUYan1，XUEJian1*，JINHongyu2，MAShuangcheng2

(1.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalScience&PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China；2.NationalInstitutesforFoodandDrugControl，Beijing100050，China)

Objective：To give some targeted suggestions for supervision and management on the basis of residual dynamics of organophosphorus pesticides in Honeysuckle.Methods：A method of determination for54organophosphorus pesticides in Honeysuckle by GC-FPD was established and60samples collected were tested.Results：23of samples had detectable residues and a total of4pesticides were identified which were dichlorvos，malathion，chlorpyrifos and isocarbophos.Chlorpyrifos had the highest detectable rate (38.8%)，while the other three ones were rarely detected.Besides，the concentration of chlorpyrifos was also relatively higher than that of the others.Conclusion：The detectable rates of organophosphorus pesticides in Honeysuckle were low generally，but both the detectable rate and concentration of chlorpyrifos were comparatively high.Therefore，more attention should be payed to chlorpyrifos in the supervisory process.

Honeysuckle；organophosphorus；traditional Chinese medicine；residual dynamics；GC-FPD

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.014

2016-02-29)

“重大新药创制”科技重大专项(2014ZX09304307-002)

*

薛健，研究员，研究方向：中药有效成分分析及农药残留重金属研究；Tel：(010)57833097，E-mail：xuejian200@sina.com